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离体培养条件下神经生长因子对毛囊的影响 被引量:6
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作者 屠军波 杨壮群 +1 位作者 姚天华 赵小鸽 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期127-129,141,共4页
目的 观察神经生长因子 (nervegrowthfactor,NGF)对离体培养条件下的人头皮毛囊生长的影响。方法 在离体人头皮毛囊培养模型中 ,加入 10 0 μg·L -1的NGF ,测量毛囊长度的变化以及 2 4hDNA合成率。结果 目镜测微器观测 10 0 μg... 目的 观察神经生长因子 (nervegrowthfactor,NGF)对离体培养条件下的人头皮毛囊生长的影响。方法 在离体人头皮毛囊培养模型中 ,加入 10 0 μg·L -1的NGF ,测量毛囊长度的变化以及 2 4hDNA合成率。结果 目镜测微器观测 10 0 μg·L -1的NGF与 12 5mg·L-1的米诺地尔一样能明显地促进游离的人头皮毛囊生长 (P <0 .0 5 ) ,尤以前 8d较为明显 ;3 H TdR掺入检测的DNA合成率亦明显增高。结论  10 0 μg·L 展开更多
关键词 神经生长因子 体外培养 毛囊生长 神经调控 形态学
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CDK1靶向shRNA质粒载体的构建及鉴定 被引量:3
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作者 赵晶 韩苏夏 +2 位作者 马瑾璐 黄辰 张丹 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1053-1055,1060,共4页
目的:设计并构建CDK1-shRNA质粒表达载体,转染肝癌HepG2细胞,验证shRNA对肝癌HepG2细胞CDK1基因的沉默效应,便于进一步研究CDK1的功能。方法:设计针对CDK1mRNA靶序列的小发夹状RNA,化学合成含茎环结构的正义链与反义链,退火形成带内切酶... 目的:设计并构建CDK1-shRNA质粒表达载体,转染肝癌HepG2细胞,验证shRNA对肝癌HepG2细胞CDK1基因的沉默效应,便于进一步研究CDK1的功能。方法:设计针对CDK1mRNA靶序列的小发夹状RNA,化学合成含茎环结构的正义链与反义链,退火形成带内切酶粘/平末端的双链后,与酶切后的 pSIREN-RetroQ-ZsGreen载体片段进行连接、转化。经测序等方法鉴定重组克隆。将重组载体质粒经脂质体包裹转染肝癌HepG2细胞,realtime PCR及Western blot检测RNA干扰效果。结果:重组克隆经测序证实插入的序列正确,realtime PCR及Western blot检测证实设计的3条RNA干扰序列有效沉默了肝癌HepG2细胞中的内源性CDK1。结论:所制备的CDK1-shRNA在肝癌HepG2细胞中可获得高效转染,并能产生特异性的基因沉默效应,以CDK1为靶向的shRNA能够有效下调CDK1基因的表达,对周期依赖激酶CDK1功能的研究奠定基础。 展开更多
关键词 SHRNA CDK1 基因沉默 肝癌细胞
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慢病毒介导的融合基因SP-TAT-Apoptin对HepG2细胞的作用 被引量:2
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作者 韩苏夏 赵晶 +4 位作者 马瑾璐 黄辰 吕毅 欧玮 贾茜 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期310-312,共3页
目的:将已构建的SP-TAT-Apoptin融合基因真核表达载体包装成感染性慢病毒颗粒,并用病毒颗粒感染肝癌HepG2细胞,测定其诱导凋亡的效率。方法:通过脂质体Li-pofectamine TM2000将SP-TAT-Apoptin融合基因真核表达载体与其他包装质粒共同转... 目的:将已构建的SP-TAT-Apoptin融合基因真核表达载体包装成感染性慢病毒颗粒,并用病毒颗粒感染肝癌HepG2细胞,测定其诱导凋亡的效率。方法:通过脂质体Li-pofectamine TM2000将SP-TAT-Apoptin融合基因真核表达载体与其他包装质粒共同转导入293FT细胞,包装并收集感染性病毒颗粒,用实时定量PCR法测定病毒滴度,免疫荧光法检测重组慢病毒感染的293FT细胞中SP-TAT-Apoptin融合基因的表达,同时通过流式细胞术(FCM)测定慢病毒感染后HepG2细胞的凋亡率。结果:SP-TAT-Apoptin重组慢病毒感染293FT细胞后,用V5抗原单克隆抗体(mAb)进行免疫荧光化学检测,示SP-TAT-Apoptin融合基因可成功表达于293FT细胞;通过Anexin-VPI法检测示SP-TAT-Apoptin融合基因慢病毒感染肝癌HepG2细胞后可引起细胞凋亡,其凋亡效率明显高于单纯脂质体转染组。结论:成功包装出可表达SP-TAT-Apoptin融合基因且具感染性的慢病毒颗粒,感染HepG2肝癌细胞后可引起其凋亡,为进一步研究融合基因SP-TAT-Apoptin体内治疗效果极其在临床中的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 APOPTIN 融合基因 慢病毒 细胞凋亡
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2型糖尿病患者牙槽骨成骨细胞体外培养与生物学特性研究 被引量:4
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作者 孙道才 宋应亮 +1 位作者 饶国洲 梁丽华 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期667-671,共5页
目的:研究2型糖尿病患者牙槽骨成骨细胞生物学特异性。方法:采用组织块法进行体外培养2型糖尿病患者和正常人牙槽骨成骨细胞,倒置显微镜观察细胞的形态,用碱性磷酸酶(ALP)、茜素红(Alizarinred)染色法分别进行细胞成骨特性的检测,噻唑蓝... 目的:研究2型糖尿病患者牙槽骨成骨细胞生物学特异性。方法:采用组织块法进行体外培养2型糖尿病患者和正常人牙槽骨成骨细胞,倒置显微镜观察细胞的形态,用碱性磷酸酶(ALP)、茜素红(Alizarinred)染色法分别进行细胞成骨特性的检测,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞的增殖趋势,用酶动力学、放射免疫及酶联免疫分析(ELISA)方法分别进行碱性磷酸酶、骨钙素(BGP)和Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)浓度的检测,结果:在同等培养条件下,二者的形态无明显差异,但2型糖尿病患者成骨细胞较正常人成骨细胞生长慢、活性弱,矿化结节形成少;2型糖尿病成骨细胞上清液中ALP、BGP及COL-Ⅰ浓度均较正常人低(P<0.05)。结论:2型糖尿病患者牙槽骨成骨细胞增殖较缓慢,特征性分泌物含量较正常成骨细胞低。 展开更多
关键词 种植 成骨细胞 2型糖尿患者 牙槽骨 细胞培养
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SP-TAT-Apoptin融合蛋白对HepG2细胞周期的影响 被引量:2
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作者 韩苏夏 马瑾璐 +2 位作者 吕毅 黄辰 段康民 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期864-866,共3页
目的:研究SP-TAT-Apoptin融合基因诱导人肝癌HepG2细胞凋亡和细胞周期阻滞,探讨其用于肝癌治疗的可能性。方法:通过DNA重组技术,以pcDNA3.1/Apoptin质粒11为模板,构建SP-TAT-Apoptin融合基因plenti6-V5-D-TOPO真核表达载体。用SP-TAT-Ap... 目的:研究SP-TAT-Apoptin融合基因诱导人肝癌HepG2细胞凋亡和细胞周期阻滞,探讨其用于肝癌治疗的可能性。方法:通过DNA重组技术,以pcDNA3.1/Apoptin质粒11为模板,构建SP-TAT-Apoptin融合基因plenti6-V5-D-TOPO真核表达载体。用SP-TAT-Apoptinplenti6-V5-D-TOPO真核表达载体转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO),转染后Blasticidin霉素进行筛选,并进行鉴定得到稳定表达SP-TAT-Apoptin的CHO细胞株。收集含有TAT-Apoptin融合蛋白的筛选细胞培养上清,用于HepG2细胞培养。于共培养后的不同时段收集HepG2细胞,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡和细胞周期。结果:用包含SP-TAT-Apoptin融合基因的plenti6-V5-D-TOPO真核表达载体瞬时转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO),成功筛选出稳定表达SP-TAT-Apoptin融合蛋白的CHO细胞,收集细胞培养上清,继续用于HepG2细胞培养,可观察到HepG2细胞阻滞于G1期并引起细胞凋亡。结论:SP-TAT-Apoptin融合表达可引起HepG2细胞的细胞周期G1期阻滞。 展开更多
关键词 信号肽 蛋白转导域 鸡贫血病毒 Apoptin蛋白 肝癌
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