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重组人细胞角蛋白9 cDNA的原核表达及纯化
1
作者
王博
周艳
+5 位作者
侯卫坤
蔡永松
张英
王林玉
韩燕
孟列素
《西安交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第4期502-506,共5页
目的克隆人细胞角蛋白CK9的cDNA,通过原核表达系统表达融合蛋白并进行纯化和鉴定。方法从人角质形成细胞系(HaCaT)中提取RNA,以RT-PCR反转录cDNA,使用特异性引物PCR扩增出人CK9编码区全长并克隆到pET-28a载体上,再用IPTG诱导融合蛋白his...
目的克隆人细胞角蛋白CK9的cDNA,通过原核表达系统表达融合蛋白并进行纯化和鉴定。方法从人角质形成细胞系(HaCaT)中提取RNA,以RT-PCR反转录cDNA,使用特异性引物PCR扩增出人CK9编码区全长并克隆到pET-28a载体上,再用IPTG诱导融合蛋白his-CK9的表达。表达的融合蛋白通过Ni 2+亲和层析纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果测序鉴定构建表达载体中CK9的cDNA序列正确;融合蛋白his-CK9可在大肠杆菌中诱导表达;纯化的融合蛋白his-CK9纯度较高;纯化的融合蛋白his-CK9可与商品化CK9抗体特异性结合。结论成功构建原核表达载体pET-28a-CK9,并成功诱导及纯化融合蛋白his-CK9。
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关键词
原核表达系统
细胞角蛋白9
融合蛋白
细胞骨架
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职称材料
题名
重组人细胞角蛋白9 cDNA的原核表达及纯化
1
作者
王博
周艳
侯卫坤
蔡永松
张英
王林玉
韩燕
孟列素
机构
西安交通大学
第一
附属
医院
转化
医学
中心
西安交通大学
医学
部
基础
医学
院生物化学与分子生物学系
陕西省肿瘤精准
医学
重点实验室
西安交通大学
第一
附属
医院
皮肤科
西安交通大学医学部附属红会医院骨坏死与关节重建病区
西安交通大学
第一
附属
医院
骨科
西安交通大学
第一
附属
医院
消化内科
出处
《西安交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第4期502-506,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.81273211
81201373)
+1 种基金
陕西省社会发展科技攻关项目(No.2016SF-238)
西安交通大学第一附属医院基金资助项目(No.2016QN-13)~~
文摘
目的克隆人细胞角蛋白CK9的cDNA,通过原核表达系统表达融合蛋白并进行纯化和鉴定。方法从人角质形成细胞系(HaCaT)中提取RNA,以RT-PCR反转录cDNA,使用特异性引物PCR扩增出人CK9编码区全长并克隆到pET-28a载体上,再用IPTG诱导融合蛋白his-CK9的表达。表达的融合蛋白通过Ni 2+亲和层析纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果测序鉴定构建表达载体中CK9的cDNA序列正确;融合蛋白his-CK9可在大肠杆菌中诱导表达;纯化的融合蛋白his-CK9纯度较高;纯化的融合蛋白his-CK9可与商品化CK9抗体特异性结合。结论成功构建原核表达载体pET-28a-CK9,并成功诱导及纯化融合蛋白his-CK9。
关键词
原核表达系统
细胞角蛋白9
融合蛋白
细胞骨架
Keywords
prokaryotic expression system
cytokeratin 9
fusion protein
cytoskeleton
分类号
R393 [医药卫生—基础医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
重组人细胞角蛋白9 cDNA的原核表达及纯化
王博
周艳
侯卫坤
蔡永松
张英
王林玉
韩燕
孟列素
《西安交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2017
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