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先髋臼杯在成人髋关节发育不良全髋关节置换术中的疗效观察 被引量:4
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作者 侯卫坤 刘林 +4 位作者 鲁超 彭侃 杨治 许珂 许鹏 《中国骨伤》 CAS 2016年第6期526-529,共4页
目的 :探讨先髋臼杯在全髋关节置换术(THR)治疗CroweⅡ型成人髋关节发育不良(DDH)的早期疗效。方法:自2001年9月至2013年7月,采用先髋臼杯对18例(18髋)CroweⅡ型DDH患者行THR,其中男13例,女5例;年龄42~60岁,平均47.6岁;病程9~22... 目的 :探讨先髋臼杯在全髋关节置换术(THR)治疗CroweⅡ型成人髋关节发育不良(DDH)的早期疗效。方法:自2001年9月至2013年7月,采用先髋臼杯对18例(18髋)CroweⅡ型DDH患者行THR,其中男13例,女5例;年龄42~60岁,平均47.6岁;病程9~22年,平均13.5年。术前患者均有髋关节疼痛,肢体短缩,髋关节功能受限。术前1 d及术后12个月分别进行Harris髋关节评分;术后1周对髋臼假体覆盖率进行影像学评价。结果:术后18例(18髋)获得随访,时间12~24个月,平均17个月。手术切口均Ⅰ期愈合。术后无深静脉血栓、髋关节脱位、感染及假体松动等并发症发生,随访期内无需要手术翻修病例。术后1周X线片示髋臼假体覆盖率均大于80%。Harris评分由术前的42.67±5.06分提高到术后12个月的94.79±3.27(t=-45.269,P〈0.001)。结论:对CroweⅡ型DDH患者,采用先髋臼杯进行THR,可获得较高的髋臼假体覆盖率及满意的早期临床疗效。 展开更多
关键词 髋臼 关节成形术 置换 髋关节
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过表达miR-140-5p的人脐带间充质干细胞对骨关节炎的治疗作用 被引量:1
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作者 彭侃 鲁超 +2 位作者 胡守业 井文森 王波 《山西医科大学学报》 CAS 2020年第8期825-833,共9页
目的探究过表达miR-140-5p的人脐带间充质干细胞(hUC-MSC)对骨关节炎的治疗作用。方法从正常足月剖宫产健康新生儿脐带标本中分离和培养hUC-MSC。用过表达miR-140-5p的重组慢病毒载体pLenO-DCE-Puro-miR-140-5p或空慢病毒载体转染293T细... 目的探究过表达miR-140-5p的人脐带间充质干细胞(hUC-MSC)对骨关节炎的治疗作用。方法从正常足月剖宫产健康新生儿脐带标本中分离和培养hUC-MSC。用过表达miR-140-5p的重组慢病毒载体pLenO-DCE-Puro-miR-140-5p或空慢病毒载体转染293T细胞,收集重组慢病毒悬液。将hUC-MSC分为感染组(过表达miR-140-5p组)、空病毒组和对照组,分别应用相应的慢病毒悬液处理感染组和空病毒组hUC-MSC,MTT法测定hUC-MSC增殖能力。将60只雄性SD大鼠随机分为假手术组(n=15)、模型组(n=15)、空病毒组(n=15)和过表达miR-140-5p的重组慢病毒组(miR-140-5p组,n=15)。通过切断大鼠右膝关节的前交叉韧带建立骨关节炎模型。空病毒组和miR-140-5p组大鼠分别关节腔内注射50μl空病毒或过表达miR-140-5p的重组慢病毒感染的hUC-MSC(1×106个细胞),假手术组和模型组大鼠注射等体积PBS,共给药8周,每周注射3次。番红O-固绿染色和OARSI评分考察软骨退变情况。RT-PCR或Western blot检测大鼠软骨组织中miR-140-5p、SOX9、collagenⅡ、Aggrecan、NLRP3、caspase-1、MMP13和ADAMTS-5的表达。结果感染组、空病毒组和对照组的细胞增殖能力差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组相比,miR-140-5p组大鼠的番红O染色明显加深。miR-140-5p组的OARSI评分均显著低于模型组(P<0.05)。miR-140-5p组collagenⅡ(COL2A1)、Aggrecan和SOX9的表达水平均显著高于模型组(P<0.05)。miR-140-5p组NLRP3、caspase-1、MMP13和ADAMTS-5的mRNA和蛋白表达水平均显著低于模型组(P<0.05)。结论通过关节腔内注射过表达miR-140-5p的hUC-MSC可显著抑制骨关节炎大鼠的软骨退变并提高软骨修复功能。 展开更多
关键词 骨关节炎 人脐带间充质干细胞 miR-140-5p 重组慢病毒 软骨损伤
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STAT3荧光素酶报告基因检测系统的构建及其检测STAT3活化能力的研究 被引量:3
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作者 王博 张英 +5 位作者 王林玉 江山娇 蔡永松 周艳 李琰清 侯卫坤 《山西医科大学学报》 CAS 2017年第11期1108-1113,共6页
目的构建STAT3荧光素酶报告基因检测系统并检测STAT3活化能力,为筛选STAT3活性调控相关药物提供实验基础。方法基因合成STAT3反应元件序列,退火形成含酶切位点的双链DNA,内切酶XhoⅠ和HindⅢ双酶切报告基因载体p GL6-TA,T4 DNA连接酶将S... 目的构建STAT3荧光素酶报告基因检测系统并检测STAT3活化能力,为筛选STAT3活性调控相关药物提供实验基础。方法基因合成STAT3反应元件序列,退火形成含酶切位点的双链DNA,内切酶XhoⅠ和HindⅢ双酶切报告基因载体p GL6-TA,T4 DNA连接酶将STAT3反应元件插入p GL6-TA载体多克隆位点,将该载体转染He La细胞,G418筛选STAT3荧光素酶报告基因稳定表达的单克隆He La细胞株。5,10,20 ng/ml不同浓度激动剂IL-6和20,40,80μmol/L抑制剂S3I-201刺激单克隆He La-STAT3-Luc细胞,检测荧光素酶对应的发光值验证STAT3荧光素酶报告基因检测系统的检测能力。结果测序和比对结果显示,STAT3荧光素酶报告基因系统p GL6-STAT3-Luc中STAT3反应元件序列正确;G418成功筛选出稳定表达STAT3荧光素酶报告基因的单克隆He La细胞株;5,10和20 ng/ml浓度IL-6可刺激He La-STAT3-Luc细胞中荧光素酶的活性显著升高(P<0.001),且分别升高5.4,10.3和20.0倍;不同时间点检测1 ng/ml和5 ng/ml浓度IL-6刺激He La-STAT3-Luc细胞,其荧光素酶的活性呈现线性增长趋势;40μmol/L和80μmol/L浓度的抑制剂S3I-201与10 ng/ml浓度IL-6共刺激He La-STAT3-Luc细胞,其荧光素酶的活性显著降低(P<0.001),STAT3活化的抑制率分别为18.9%和43.7%。结论成功构建STAT3荧光素酶报告基因检测系统,该系统具有有效检测STAT3活化水平的能力。 展开更多
关键词 荧光素酶 报告基因 JNK-STAT信号通路 STAT3
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IL-22促进滑膜细胞表达MMP3、VEGF而抑制MMP13的表达 被引量:2
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作者 侯卫坤 王博 +1 位作者 刘林 许鹏 《山西医科大学学报》 CAS 2017年第4期343-347,共5页
目的观察IL-22在体外对滑膜成纤维细胞MMP3、MMP13及VEGF表达的影响。方法纳入2012-03~2012-06在西安市红会医院接受全膝关节置换术的患者,分为类风湿性关节炎(RA)及骨性关节炎(OA)两组,每组各8例患者;用实时定量PCR检测膝关节滑膜组织I... 目的观察IL-22在体外对滑膜成纤维细胞MMP3、MMP13及VEGF表达的影响。方法纳入2012-03~2012-06在西安市红会医院接受全膝关节置换术的患者,分为类风湿性关节炎(RA)及骨性关节炎(OA)两组,每组各8例患者;用实时定量PCR检测膝关节滑膜组织IL-17、IL-22、IL-17RA、IL-22R1、IL-22BP、AHR、MMP3及MMP13等基因mRNA水平的表达。体外培养滑膜细胞系HTB-93,分为对照组、IL-22组及IL-22+IL-22BP组,实时定量PCR检测MMP3、MMP13及VEGF基因mRNA水平的表达变化。结果采用Mann-Whitney U检验统计数据。结果在OA滑膜组织中,IL-22、IL-22R1、AHR以及MMP13 mRNA表达水平较在RA滑膜组织中高(P<0.05),而IL-17RA及MMP3则相反,在RA滑膜组织中表达较高(P<0.05)。体外培养HTB-93滑膜细胞系上,与对照组相比,IL-22组MMP3和VEGF的mRNA表达上调(P<0.05),而MMP13的mRNA表达下调(P<0.05);与IL-22组相比,IL-22+IL-22BP组的MMP3和VEGF的mRNA表达有下调趋势,而MMP13的mRNA表达有上调趋势,两组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 IL-22在OA滑膜组织中的表达较高,在体外可促进滑膜细胞表达MMP3、VEGF而抑制MMP13的表达。 展开更多
关键词 骨性关节炎 类风湿性关节炎 IL-22 滑膜细胞 MMP VEGF
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人细胞角蛋白1基因的克隆、原核表达及纯化
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作者 王博 侯卫坤 +5 位作者 周艳 蔡永松 王林玉 张英 韩燕 孟列素 《山西医科大学学报》 CAS 2017年第2期114-119,共6页
目的克隆人细胞角蛋白1(cytokeratin 1,CK1),原核表达系统表达融合蛋白并进行纯化和鉴定。方法从人角质形成细胞系中提取RNA,以RT-PCR反转录cDNA,用特异性引物PCR扩增人CK1编码区全长基因(NM_006121.3),内切酶EcoRⅠ和HindⅢ双酶切PCR... 目的克隆人细胞角蛋白1(cytokeratin 1,CK1),原核表达系统表达融合蛋白并进行纯化和鉴定。方法从人角质形成细胞系中提取RNA,以RT-PCR反转录cDNA,用特异性引物PCR扩增人CK1编码区全长基因(NM_006121.3),内切酶EcoRⅠ和HindⅢ双酶切PCR产物和p ET-28a载体,T4 DNA连接酶将人CK1编码区全长基因克隆到pET-28a载体上,IPTG诱导融合蛋白his-CK1的表达。融合蛋白经Ni^(2+)亲和层析纯化,SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果测序鉴定表明构建表达载体中人CK1序列正确;融合蛋白his-CK1的相对分子量为70 kD,并在大肠杆菌中高效表达;融合蛋白以包涵体形式,在变性条件下纯化融合蛋白his-CK1,其纯度大于90%;纯化的融合蛋白his-CK1可与商品化CK1抗体以及His抗体特异性结合。结论成功构建了原核表达质粒pET-28a-CK1,并成功诱导表达及纯化融合蛋白his-CK1。 展开更多
关键词 细胞角蛋白1 基因克隆 融合蛋白 原核表达系统
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