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人乳头瘤病毒11型E6基因完整开放阅读框架的克隆和鉴定 被引量:2
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作者 马军 闫晓彩 +2 位作者 来宝长 王一理 司履生 《西安医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期471-474,共4页
目的 为构建人乳头瘤病毒 1 1型 (HPV1 1 )DNA疫苗 ,从尖锐湿疣病变组织中克隆疫苗靶基因E6。方法 利用改良提取染色体外游离DNA的方法制备模板DNA ,采用聚合酶链反应(PCR)技术进行基因克隆。结果 从病变组织中扩增出了全长人乳头瘤... 目的 为构建人乳头瘤病毒 1 1型 (HPV1 1 )DNA疫苗 ,从尖锐湿疣病变组织中克隆疫苗靶基因E6。方法 利用改良提取染色体外游离DNA的方法制备模板DNA ,采用聚合酶链反应(PCR)技术进行基因克隆。结果 从病变组织中扩增出了全长人乳头瘤病毒 1 1型E6基因完整开放阅读框架 ,并插入中介载体T easy中构建重组质粒 ,转化JM1 0 9扩增后经酶切、PCR及测序分析 ,证实克隆成功。结论 该实验的成功为下一步制备HPV1 1的治疗性疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒 基因克隆 聚合酶链反应
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重组人单链白细胞介素12融合基因(rhscIL-12)的构建和真核表达 被引量:1
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作者 张梅 司履生 +1 位作者 王一理 耿宜苹 《西安医科大学学报》 CSCD 2000年第4期297-302,共6页
克隆人 IL - 1 2 ( h IL - 1 2 ) p40和 p35亚单位 c DNA,构建人单链 IL- 1 2 ( rhsc IL- 1 2 )融合基因 ,并在哺乳动物细胞中进行表达。方法 从经 PDBu刺激的 EBV转化的人 B淋巴母细胞株 NC37中提取 m RNA,经 RT- PCR分别获得 h IL- 1... 克隆人 IL - 1 2 ( h IL - 1 2 ) p40和 p35亚单位 c DNA,构建人单链 IL- 1 2 ( rhsc IL- 1 2 )融合基因 ,并在哺乳动物细胞中进行表达。方法 从经 PDBu刺激的 EBV转化的人 B淋巴母细胞株 NC37中提取 m RNA,经 RT- PCR分别获得 h IL- 1 2 p40和 p35亚单位编码序列的 c DNA,运用重组 PCR技术将两段基因通过一疏水性多肽接头 ( Gly4 Ser) 3 DNA序列进行体外基因重组 ,构建 rhsc IL- 1 2融合基因 ,将其插入 pc DNA3.1 ( + )真核表达载体 ,经脂质体转染 COS7细胞进行表达 ,Western blot进行分析。结果 所克隆的 h IL- 1 2 p40、p35c DNA序列和构建的 rhsc IL - 1 2融合基因 DNA序列均经测序得以证实 ,融合基因可在 COS7中表达其产物 rhsc IL- 1 2融合蛋白 ,其分子量为 70 KD,可与鼠抗人 IL - 1 2 p40 /p70单克隆抗体特异性结合。结论 本研究结果为进一步探讨 rhsc IL- 1 2融合蛋白的生物学活性和特性奠定了基础 ,也为 rhsc IL- 1 展开更多
关键词 重组人单链白细胞介素12 融合基因 真核表达
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人共刺激分子B7-1/CD80胞外编码区cDNA的克隆及序列分析
3
作者 杨章民 张进安 +1 位作者 王剑利 司履生 《陕西师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期101-103,共3页
用RT PCR法从人外周血单核细胞克隆了编码共刺激分子B7 1 /CD80胞外区的cDNA ,并用Sanger链终止法进行测序 .结果表明 ,所获cDNA片段的序列与GenBank中已报道的人B7 1 /CD80cDNA序列的对应部分仅有两个碱基存在差异( 6 58位A→T ,773位A... 用RT PCR法从人外周血单核细胞克隆了编码共刺激分子B7 1 /CD80胞外区的cDNA ,并用Sanger链终止法进行测序 .结果表明 ,所获cDNA片段的序列与GenBank中已报道的人B7 1 /CD80cDNA序列的对应部分仅有两个碱基存在差异( 6 58位A→T ,773位A→G) ,这为探讨B7 1 展开更多
关键词 人共刺激分子 B7-1/CD80 胞外编码区 CDNA 序列分析 RT-PCR法 基因克隆 免疫球蛋白
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EphB4在肺癌组织中的表达及临床意义
4
作者 李文生 李建国 +4 位作者 王水利 冯捷 王茁 王一理 司履生 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期390-392,共3页
目的 研究EphB4在肺癌组织中的表达和意义。方法 采用免疫组化SP法检测 5 0例肺癌及 2 0例癌旁组织中EphB4的表达水平。结果 EphB4在肺癌组织中的表达水平高于癌旁组织 (P <0 .0 1) ,EphB4的表达与肺癌的分级呈正相关 (P <0 .0... 目的 研究EphB4在肺癌组织中的表达和意义。方法 采用免疫组化SP法检测 5 0例肺癌及 2 0例癌旁组织中EphB4的表达水平。结果 EphB4在肺癌组织中的表达水平高于癌旁组织 (P <0 .0 1) ,EphB4的表达与肺癌的分级呈正相关 (P <0 .0 5 ) ,与临床分期及淋巴结转移之间无相关性 (P >0 .0 5 )。 展开更多
关键词 EPHB4 肺癌 免疫组化
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人IL-18cDNA克隆及原核表达 被引量:1
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作者 安小惠 王一理 +2 位作者 耿宜萍 来宝长 司履生 《西安医科大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第4期301-303,共3页
目的 从外周血单核细胞中克隆人IL 1 8成熟编码序列cDNA ,对其进行测序并构建原核表达载体 ,进行原核表达。方法 从人外周血单核细胞中分离总RNA ,进行RT PCR获得人IL 1 8cDNA。测序证实其结果正确后 ,构建原核表达载体。E .coli的表... 目的 从外周血单核细胞中克隆人IL 1 8成熟编码序列cDNA ,对其进行测序并构建原核表达载体 ,进行原核表达。方法 从人外周血单核细胞中分离总RNA ,进行RT PCR获得人IL 1 8cDNA。测序证实其结果正确后 ,构建原核表达载体。E .coli的表达产物通过SDS PAGE、WesternBlot证实。结果 所克隆的人IL 1 8cDNA编码序列经测序证实与GenBank所报道的序列完全一致 ,细菌表达产物经SDS PAGE证实其大小约为 1 8.3KDa,WesternBlot进一步证实了所表达产物的正确性。结论 本研究结果为进一步探讨IL 1 8的生物学活性和特性奠定了基础 ,同时亦为利用人IL 1 8进行免疫基因治疗的研究打下了良好的基础。 展开更多
关键词 人白细胞介素18 基因克隆 原核表达 IL-18cDNA 细胞因子 克隆人
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