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细菌表达dsRNA介导的家蚕FTZ-F1基因的RNA干扰 被引量：8
1
作者 王根洪 祝慧敏 +4 位作者 罗会松 王轲轲 杨小波 蒋亮 夏庆友 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期596-601,共6页
为探索细菌表达目标基因dsRNA介导的RNAi技术是否在家蚕Bombyx mori可行,本研究引入了在其他物种中广泛应用的细菌表达dsRNA的RNAi系统:HT115细菌株和L4440质粒。利用L4440载体两端含有T7启动子的特点,设计并构建了针对家蚕核受体FTZ-F... 为探索细菌表达目标基因dsRNA介导的RNAi技术是否在家蚕Bombyx mori可行,本研究引入了在其他物种中广泛应用的细菌表达dsRNA的RNAi系统:HT115细菌株和L4440质粒。利用L4440载体两端含有T7启动子的特点,设计并构建了针对家蚕核受体FTZ-F1基因的RNA干扰(RNA interference)载体,将构建好的质粒转入大肠杆菌Escherichia coliHT115,在IPTG诱导下成功获得目标基因对应双链RNA(dsRNA)。结果显示:通过对5龄第7天家蚕幼虫注射IPTG诱导后提取的FTZ-F1基因对应的dsRNA25μg,85%的蛹变态发育过程明显延迟,不能实现幼虫到蛹的形态完全转变。荧光定量PCR分析显示目标基因的表达得到了特异的抑制。实验结果初步表明,通过细菌表达目标基因dsRNA介导的RNAi策略,以其经济、高效的特点,具有广泛应用于家蚕基因功能研究中的潜力。 展开更多
关键词 家蚕 RNA干扰 双链RNA L4440质粒 HT115细菌株 变态发育
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节瓜及近缘葫芦科作物种质资源rDNA-ITS序列分析与系统进化研究 被引量：4
2
作者 赵芹 谢大森 +3 位作者 何晓明 陈仁芳 彭庆务 罗少波 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期1096-1106,共11页
通过PCR扩增获得了56份节瓜种质资源及7份相关瓜类种质资源的rDNA-ITS序列,测序后结合GenBank中34份葫芦科作物的ITS序列,利用生物信息学软件分析序列长度、变异位点、G＋C含量、遗传分歧、同源性百分比差异、系统进化关系。节瓜种质资... 通过PCR扩增获得了56份节瓜种质资源及7份相关瓜类种质资源的rDNA-ITS序列,测序后结合GenBank中34份葫芦科作物的ITS序列,利用生物信息学软件分析序列长度、变异位点、G＋C含量、遗传分歧、同源性百分比差异、系统进化关系。节瓜种质资源ITS基本序列全长612-617 bp,G＋C含量59.97%-61.07%,供试材料间共96个变异位点,其中一些变异位点有明显的种性特征,可作为特异DNA指纹鉴别位点。基于ITS序列差异,56份节瓜材料聚为5大类,其中12-2-3材料为单独一个分支,黑毛节瓜H2251为第二分支,H5FA为第三分支,剩余节瓜材料聚为第四、五分支。节瓜材料12-2-3与其他材料遗传分歧最大,农艺性状与抗性也差异较大,可用作节瓜杂交育种的亲本以扩大选择范围。节瓜的系统位置排列在Indomelothria blumei（GU799496）与Dactyliandra welwitschii（HQ201973）之间,与Indomelothria blumei亲缘关系最近;Mrbayes软件分析表明,葫芦科作物Zehneria thwaitesii（AM981145）、Ctenolepis cerasiformis（AM981142）、Cucumis melo（AM36377）、Dactyliandra welwitschii（HQ201973）、Trochomeria macrocarpa（AM981141）最原始,系统进化顺序为甜瓜→南瓜、栝楼、苦瓜、丝瓜、西瓜、蒲瓜→冬瓜、节瓜→黄瓜。本研究通过分析节瓜及近缘葫芦科作物种质资源的ITS序列,为其系统进化、DNA指纹鉴别、育种亲本选择及比较组学分析等提供了分子生物学依据。 展开更多
关键词 节瓜 葫芦科作物 种质资源 RDNA-ITS 序列分析 系统进化
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基于ITS分析云南光叶桑和钦州长果桑在桑属中的亲缘关系及分化时间 被引量：4
3
作者 陈仁芳 陈祥平 +3 位作者 范小敏 陈家元 刘泽听 虞志伟 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期2-7,共6页
云南光叶桑、钦州长果桑在形态分类学上均属同一桑种Morus macroura。通过PCR扩增2份地方品种资源材料的ITS序列并分析序列差异及构建系统进化树,阐明各自在桑属中的遗传分化关系。2份材料的ITS序列长度均为576 bp,其中:云南光叶桑的G+... 云南光叶桑、钦州长果桑在形态分类学上均属同一桑种Morus macroura。通过PCR扩增2份地方品种资源材料的ITS序列并分析序列差异及构建系统进化树,阐明各自在桑属中的遗传分化关系。2份材料的ITS序列长度均为576 bp,其中:云南光叶桑的G+C含量为59.90%,碱基序列45位A变G,560位T变G,与昆明奶桑(Morus macroura)、荥经川桑(Morus notabilis)、云南毛叶奶桑(Morus macroura var.mawa)、云南长穗桑(Morus wittiorum)、云南奶桑(Morus macroura)、雅安华桑(Morus cathayana)同在第Ⅰ类群,有较近的亲缘关系;钦州长果桑的G+C含量为59.72%,碱基序列45位为A,560位T变G,与云南华桑(Morus cathayana)同在第Ⅱ类群,有较近的亲缘关系。应用松散分子钟方法估算云南光叶桑与荥经川桑、雅安华桑、云南长穗桑的分化时间为8.23 Ma,钦州长果桑与云南华桑的分化时间为9.67 Ma,二者起源的地质年代是新第三纪中新世与上新世之交,是为了抵御地球寒冷、旱化,向南、向山地迁移形成的物种。 展开更多
关键词 核糖体DNA内转录间隔区 桑属 云南光叶桑 钦州长果桑 亲缘关系 分歧年代
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蓖麻蚕不同组织器官中胰蛋白酶抑制剂的种类与分析 被引量：3
4
作者 王凌燕 钟晓武 +3 位作者 张艳 莫现会 谭祥 赵萍 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期761-766,共6页
胰蛋白酶抑制剂（TI）是鳞翅目昆虫体内广泛存在的一种蛋白酶抑制剂，主要功能是抑制胰蛋白酶的降解。采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和胰蛋白酶抑制剂活性染色，对18个蓖麻蚕品种5龄第5天的血液及其它组织中TI种类的分布进行了调查。经... 胰蛋白酶抑制剂（TI）是鳞翅目昆虫体内广泛存在的一种蛋白酶抑制剂，主要功能是抑制胰蛋白酶的降解。采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和胰蛋白酶抑制剂活性染色，对18个蓖麻蚕品种5龄第5天的血液及其它组织中TI种类的分布进行了调查。经碱性聚丙烯酰胺凝胶电泳，在血液中共检测到8种TIs，分别命名为ETI-1～ETI-8，品种间存在多态性分布；在头和脂肪体中分别检测到1种TI；在体壁中检测到3种TIs。经酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳，在血液中共检测到4种TIs，分别命名为ETI-b1、ETI-b2、ETI-b3和ETI-b4，品种间种类分布无差异；在血液中检测到的TI包含了在头、脂肪体和体壁中检测到的TI种类。 展开更多
关键词 蓖麻蚕 胰蛋白酶抑制剂 分布 品种 组织 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
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家蚕胚胎发育相关基因的分析(英文) 被引量：1
5
作者 柴春利 夏庆友 +3 位作者 李斌 孙卫忠 左伟东 鲁成 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期25-32,共8页
在家蚕基因组中检索分析了与果蝇86个胚胎发育相关基因同源的基因。分析结果表明,在果蝇的这86个基因中,有62(72%)个基因在家蚕基因组中存在直向同源关系,其中58(67%)个基因并且在家蚕、果蝇、冈比亚按蚊3种昆虫的基因组间呈现1∶1∶1... 在家蚕基因组中检索分析了与果蝇86个胚胎发育相关基因同源的基因。分析结果表明,在果蝇的这86个基因中,有62(72%)个基因在家蚕基因组中存在直向同源关系,其中58(67%)个基因并且在家蚕、果蝇、冈比亚按蚊3种昆虫的基因组间呈现1∶1∶1直向同源关系。通过比较分析发现,体节极性决定基因在3种昆虫基因组间最为保守。同果蝇和冈比亚按蚊相比,家蚕中决定背-腹部形成的基因分化最大。进一步利用芯片数据对其中的12个母性基因在家蚕5龄第3天幼虫生殖腺中的表达情况进行分析:有2个基因(orb和nanos)在卵巢中特异表达;4个基因(spire、Ras85D、gd和arrest)在精巢中特异表达;另外的6个基因(exuperantia、vasa、pumilio、mago nashi、nudel和dorsal)在精巢和卵巢中均有表达,但是其中的2个基因(pumilio和nudel)在雌、雄间的表达量存在显著差异。研究结果为家蚕发育调控机制的进一步研究提供了重要线索和数据信息。 展开更多
关键词 家蚕 胚胎发育 直向同源基因 果蝇 冈比亚按蚊
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一个新的家蚕kunitz类型CI基因的克隆和序列分析
6
作者 赵萍 李娟 +2 位作者 林英 夏庆友 向仲怀 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期195-200,共6页
家蚕胰凝乳蛋白酶抑制剂(chymotrypsin inhibitor,CI)的多个编码基因位于多个染色体位点上,是家蚕CI具有丰富多态性的原因之一。根据Gene Bank中登录的家蚕CI基因Sci-sb的mRNA,设计引物克隆了一个家蚕kunitz类型的CI基因,命名为CI-fb。C... 家蚕胰凝乳蛋白酶抑制剂(chymotrypsin inhibitor,CI)的多个编码基因位于多个染色体位点上,是家蚕CI具有丰富多态性的原因之一。根据Gene Bank中登录的家蚕CI基因Sci-sb的mRNA,设计引物克隆了一个家蚕kunitz类型的CI基因,命名为CI-fb。CI-fb基因有3个外显子,开放阅读框长度为255 bp,编码85个氨基酸残基,具有一个典型的kunitz结构域。CI-fb基因与其他已知的kunitz类型的CI基因相比,在基因序列和结构、蛋白序列和结构上高度相似,但在已知的CI基因家族中序列最短。RT-PCR分析表明,CI-fb基因在家蚕的脂肪体、精巢、卵巢、马氏管、气管和中肠6个组织中表达,而在丝腺、血细胞和体壁中没有表达,是一个组织特异性表达的基因。研究结果为进一步研究家蚕CI的多态性和功能提供了新的线索。 展开更多
关键词 家蚕 胰凝乳蛋白酶抑制剂 基因克隆 CI-fo基因 组织表达
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四川桑树种质资源 被引量：1
7
作者 陈仁芳 陈祥平 +6 位作者 范小敏 陈家元 刘泽听 孙伟亭 柯皓天 付云 张群才 《四川蚕业》 2011年第4期50-51,共2页
报道了四川的野生、地方、选育、引进的桑树种质资源。四川有桑属植物9种,资源丰富。野生桑种分布不重叠,对研究桑属的起源、演化有重要的参考价值,且有特异性状,是桑树育种宝贵财富。地方桑树品种,种类繁多,长期在一个地区种植,具有明... 报道了四川的野生、地方、选育、引进的桑树种质资源。四川有桑属植物9种,资源丰富。野生桑种分布不重叠,对研究桑属的起源、演化有重要的参考价值,且有特异性状,是桑树育种宝贵财富。地方桑树品种,种类繁多,长期在一个地区种植,具有明显的地区适应性。选育和引进的桑树品种,产叶量高,叶质好,推广时应注意引种适应性实验。 展开更多
关键词 四川 桑属 资源 桑品种
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不同EGFP-蜘蛛丝融合基因在昆虫细胞的表达及融合丝蛋白形成机制初探(英文)
8
作者 赵爱春 夏庆友 +3 位作者 鲁成 向仲怀 张袁松 中垣雅雄 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期581-591,共11页
蜘蛛能吐出具有优异机械特性的多种类型的丝,其中管状腺丝用于构建卵囊并具有良好的分子和机械性能,是目前唯一报道的全长cDNA序列的蜘蛛丝。基于为将来利用生物工程方法大量生产高性能的仿蜘蛛丝纤维提供基础信息,通过Bac-to-Bac/AcNP... 蜘蛛能吐出具有优异机械特性的多种类型的丝,其中管状腺丝用于构建卵囊并具有良好的分子和机械性能,是目前唯一报道的全长cDNA序列的蜘蛛丝。基于为将来利用生物工程方法大量生产高性能的仿蜘蛛丝纤维提供基础信息,通过Bac-to-Bac/AcNPV杆状病毒表达系统,在强启动子驱动下,对2个大小不同的蜘蛛卵囊丝蛋白基因序列(全长cDNA序列和部分cDNA序列)与EGFP报告基因实现了在AcNPV昆虫细胞中的融合表达。绿色荧光和W estern印迹分析表明,被表达出的2个大小不同的卵囊丝融合蛋白在昆虫细胞胞质中呈现出明显不同的溶解性。含有部分卵囊丝基因的短EGFP-蜘蛛丝融合基因的表达产物在胞质里具有可溶性;而含有全长卵囊丝基因的巨大EGFP-蜘蛛丝融合基因的表达产物倾向于自我装配形成沉淀聚合物。研究结果也暗示了蜘蛛丝蛋白的分子大小可能对其装配成高性能的丝纤维有重要影响。 展开更多
关键词 蜘蛛丝 全长管状腺丝cDNA Bac-to-Bac/AcNPV杆状病毒表达系统 丝蛋白 形成机制
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南充云雾山野生白桑 育2号 新疆白桑ITS序列及系统位置
9
作者 陈仁芳 陈祥平 +6 位作者 范小敏 陈家元 刘泽听 孙伟亭 柯皓天 付云 张群才 《四川蚕业》 2011年第3期13-16,58,共5页
研究了南充云雾山野生白桑、育2号、新疆白桑ITS序列长度、G+C%、变异位点和系统位置。ITS序列长度均为576bp,G+C百分含量分别为59.55%,59.55%,59.72%,南充云雾山野生白桑、育2号45位为A、505位、560位T;新疆白桑45位A、505位G、560位T... 研究了南充云雾山野生白桑、育2号、新疆白桑ITS序列长度、G+C%、变异位点和系统位置。ITS序列长度均为576bp,G+C百分含量分别为59.55%,59.55%,59.72%,南充云雾山野生白桑、育2号45位为A、505位、560位T;新疆白桑45位A、505位G、560位T。系统位置均在BranchesⅡ,与剑持、瑞穗桑同一分支。白桑ITS序列没有地理迁移的变化,是较早分化的物种。育2号、新疆白桑与剑持、瑞穗桑有较近的亲缘关系,宜长江流域以北栽培。ITS序列信息位点有限,在分析桑属的系统学时,需要另找片段,或与其它片段联合分析。 展开更多
关键词 云雾山 野生白桑 育2号 新疆白桑ITS 系统位置
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12个特殊桑资源ITS,TrnL-F,rps16序列与亲缘关系分析
10
作者 范小敏 陈祥平 +7 位作者 柯皓天 张泽华 孙伟亭 付云 张群才 魏亮 梁燕梅 陈仁芳 《四川蚕业》 2012年第1期7-10,21,共5页
报道了12个特殊桑资源ITS,TrnL-F,rps16序列长度、G+C%、变异位点及亲缘关系,分析了它们的栽培适生范围。ITS序列576-590 bp,G+C%59.45-60.17,27个变异位点。TrnL-F基因间区920-923bp,G+C%34.02-34.24,5个变异位点,rps16内含子929bp,G+C... 报道了12个特殊桑资源ITS,TrnL-F,rps16序列长度、G+C%、变异位点及亲缘关系,分析了它们的栽培适生范围。ITS序列576-590 bp,G+C%59.45-60.17,27个变异位点。TrnL-F基因间区920-923bp,G+C%34.02-34.24,5个变异位点,rps16内含子929bp,G+C%32.51-33.26;19个变异位点。神农架华桑♀与珙县川桑有较近的亲缘关系,宜长江流域栽植。龙桑、龙须桑、新疆白桑、剑持、小官桑与神农鸡桑1号、改良鼠返、乌克兰白桑有较近的亲缘关系,雅安白桑与神农架山桑有较近的亲缘关系,宜长江流域以北栽植。雅周桑与湖北蒙桑4号、四川高海拔鸡桑有较近的亲缘关系,宜在长江流域山区栽植。广东桑"大十"与湖北白桑、越南白桑、印度55有较近的亲缘关系,钦州长果桑与斯里兰卡桑3号有较近的亲缘关系,咸丰长穗桑与利川长穗桑有较近的亲缘关系,宜长江流域以南栽植。 展开更多
关键词 桑属 特殊桑资源 ITS TrnL-F rps16序列 亲缘关系 适生区域
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