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利用酵母双杂交法检测甘蓝SCR与SRK之间的相互作用被引量：6: 1; 作者罗兵薛丽琰 +7 位作者朱利泉张贺翠彭一波陈松杨红杨昆李成琼王小佳《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期579-586,共8页; 为深入研究甘蓝S位点受体激酶(SRK)和S位点富含半胱氨酸蛋白(SCR)间相互识别的分子机理,以具有典型自交不亲和性的甘蓝D3为材料,利用巢式PCR分别扩增SRK胞外域(eSRK)和SCR,通过酵母双杂交检测二者之间的相互作用,并利用同源重组技术将e... 展开更多; 关键词甘蓝 S位点受体激酶(SRK) S位点富含半胱氨酸蛋白(SCR) 酵母双杂交; 在线阅读下载PDF 职称材料

甘蓝自交不亲和基因MLPK与SSP的FISH定位被引量：5: 2; 作者荣小营朱利泉 +4 位作者王永高启国陈晓丹杨洋王小佳《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期802-808,共7页; 利用FISH技术,对自交不亲和基因MLPK与SSP在甘蓝有丝分裂前中期染色体、减数分裂早粗线期染色体以及伸长DNA纤维等3种分辨率水平的靶DNA载体上进行物理定位。结果表明,在有丝分裂前中期,MLPK探针信号位于一对近中着丝粒同源染色体的短... 展开更多; 关键词甘蓝 MLPK基因 SSP基因荧光原位杂交自交不亲和性; 在线阅读下载PDF 职称材料

甘蓝自交不亲和信号传导中THL1和SRK相互作用的体外检测被引量：4: 3; 作者高启国宋明 +3 位作者牛义杨昆朱利泉王小佳《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期934-943,共10页; 在甘蓝自交不亲和信号传导中SRK和THL1之间可能存在相互作用。为进一步证实该相互作用,以甘蓝E1为材料,采用RT-PCR技术扩增了THL1和SRK激酶结构域(记为SRKE1)编码序列,构建了THL1原核表达质粒pET43.1-THL1,SRKE1原核表达质粒pET431-SRKE... 展开更多; 关键词 S-位点受体激酶类硫氧还蛋白毕赤酵母; 在线阅读下载PDF 职称材料

甘蓝自交不亲和信号传导元件ARC1的体外表达及其与SRK相互作用验证被引量：3: 4; 作者牛义王志敏 +3 位作者高启国宋明王小佳朱利泉《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期1202-1208,共7页; 在甘蓝自交不亲和信号传导中ARC1和上游因子SRK之间可能存在相互作用。为进一步证实该相互作用,以甘蓝E1为材料,采用RT-PCR技术扩增ARC1的编码序列,构建ARC1原核表达质粒pET43.1a-ARC1,转化宿主菌大肠杆菌BL21,通过SDS-PAGE检测该蛋白... 展开更多; 关键词甘蓝信号传导 S-位点受体激酶(SRK) 臂重复蛋白1(ARC1); 在线阅读下载PDF 职称材料

基于SRK和SCR序列的甘蓝自交不亲和系单倍型分析被引量：2: 5; 作者高启国韦静宜 +1 位作者朱利泉王小佳《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期86-90,共5页; 采用RT-PCR和其他分子生物学方法,以甘蓝自交不亲和系E1和F1柱头cDNA为模板扩增SRKE1和SRKF1基因,以花药cDNA为模板扩增SCRE1和SCRF1基因.经序列比对首次证明E1和F1材料分别为S28和S7单倍型.经三维结构分析,预测SCRE1上C5-C6和C7-C8之... 展开更多; 关键词甘蓝自交不亲和性 SRK基因 SCR基因单倍型; 在线阅读下载PDF 职称材料

甘蓝染色体及伸长DNA纤维制备技术的研究被引量：2: 6; 作者荣小营朱利泉 +1 位作者王永王小佳《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期1-7,共7页; 以甘蓝根尖、花药、黄化苗等为材料,初步建立了甘蓝有丝分裂前中期染色体、减数分裂粗线期染色体以及伸长DNA纤维等3种具有不同空间分辨率的靶DNA载体的制备技术.结果表明:通过变温处理可以有效提高前中期染色体分裂相比率;采用0.002 mo... 展开更多; 关键词甘蓝染色体伸长DNA纤维制片; 在线阅读下载PDF 职称材料

甘蓝柱头蛋白质双向电泳体系的建立被引量：1: 7; 作者曾静陈松 +3 位作者朱利泉高启国王小佳杨晓红《中国蔬菜》北大核心 2012年第06X期30-36,共7页; 蛋白质提取方法和电泳条件是蛋白质组学研究中双向电泳的关键。为建立适合甘蓝柱头总蛋白质的双向电泳体系,本试验以甘蓝柱头为材料,采用改良TCA/丙酮沉淀法提取柱头总蛋白质,通过对IPG胶条、上样量、聚焦程序、SDS-PAGE胶浓度等的优化... 展开更多; 关键词甘蓝柱头自交不亲和蛋白质双向电泳; 在线阅读下载PDF 职称材料

同源重组快速构建甘蓝SCR酵母双杂交诱饵载体及其自激活作用的检测: 8; 作者罗兵朱利泉 +7 位作者薛丽琰张贺翠彭一波杨红杨昆高启国李成琼王小佳《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期79-85,共7页; 采用巢式PCR获得甘蓝SCR的成熟肽编码区,利用同源重组技术首次将其克隆到pGBKT7载体中,构建酵母双杂交系统的诱饵载体pGBKT7-SCR,结果表明:通过巢式PCR获得了正确的甘蓝SCR成熟肽编码区,并成功构建到pGBKT7诱饵载体中,且转化有诱饵载体... 展开更多; 关键词甘蓝 SCR蛋白同源重组酵母双杂交诱饵载体自激活; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名利用酵母双杂交法检测甘蓝SCR与SRK之间的相互作用被引量：6: 1; 作者罗兵薛丽琰朱利泉张贺翠彭一波陈松杨红杨昆李成琼王小佳; 机构西南大学植物生理生物化学实验室常熟理工学院生物与食品工程学院西南大学重庆市蔬菜学重点实验室; 出处《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期579-586,共8页; 基金国家自然科学基金项目(30971849)资助; 文摘为深入研究甘蓝S位点受体激酶(SRK)和S位点富含半胱氨酸蛋白(SCR)间相互识别的分子机理,以具有典型自交不亲和性的甘蓝D3为材料,利用巢式PCR分别扩增SRK胞外域(eSRK)和SCR,通过酵母双杂交检测二者之间的相互作用,并利用同源重组技术将eSRK与GAL4报告基因DNA活化域融合(pGADT7eSRK)以及SCR与GAL4报告基因DNA结合域融合(pGBKT7SCR)。两种重组质粒分别转化酵母Y187和Y2HGold后未出现自激活现象。融合的二倍体酵母(pGADT7eSRK×pGBKT7SCR)能在选择性固体培养基(SD/–Ade/–His/–Leu/–Trp/X-a-Gal/AbA)上生长,并且菌落呈蓝色。结果表明,eSRK与SCR蛋白能够相互结合,为深入研究二者作用位点成功建立了一个技术平台。; 关键词甘蓝 S位点受体激酶(SRK) S位点富含半胱氨酸蛋白(SCR) 酵母双杂交; Keywords Brassica oleracea L. Self-incompatibility S-locus receptor kinase （SRK） S-locus cysteine-rich protein （SCR） Yeast two-hybrid system; 分类号 S635 [农业科学—蔬菜学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名甘蓝自交不亲和基因MLPK与SSP的FISH定位被引量：5: 2; 作者荣小营朱利泉王永高启国陈晓丹杨洋王小佳; 机构西南大学植物生理生物化学实验室西南大学重庆市蔬菜学重点实验室; 出处《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期802-808,共7页; 基金国家自然科学基金项目(30671429) 重庆市自然基金项目(9266)资助; 文摘利用FISH技术,对自交不亲和基因MLPK与SSP在甘蓝有丝分裂前中期染色体、减数分裂早粗线期染色体以及伸长DNA纤维等3种分辨率水平的靶DNA载体上进行物理定位。结果表明,在有丝分裂前中期,MLPK探针信号位于一对近中着丝粒同源染色体的短臂中部,距着丝粒的百分距离约为53.41±3.16;SSP探针信号位于一对具有随体的近端着丝粒同源染色体的长臂端部,距着丝粒的百分距离约为78.36±4.26。综合3种载体上的FISH结果表明,MLPK与SSP在甘蓝染色体组中可能都只有一个同源序列座位,具有在单倍体基因组中的单拷贝性。重复FISH杂交表明,MLPK与5SrDNA位于同一对染色体。依据Armstrong的核型分析标准,初步判断MLPK与SSP可能分别位于甘蓝的2号和7号染色体,与S位点不存在连锁关系。另从比较基因组学角度对定位结果进行了讨论。; 关键词甘蓝 MLPK基因 SSP基因荧光原位杂交自交不亲和性; Keywords Brassica oleracea MLPK gene SSP gene Fluorescence in situ hybridization Self-incompatibility; 分类号 S635 [农业科学—蔬菜学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名甘蓝自交不亲和信号传导中THL1和SRK相互作用的体外检测被引量：4: 3; 作者高启国宋明牛义杨昆朱利泉王小佳; 机构西南大学重庆市蔬菜学重点实验室西南大学植物生理生物化学实验室; 出处《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期934-943,共10页; 基金重庆市自然科学基金项目(9266) 国家自然科学基金项目(30471190,30671429) 教育部高等学校博士学科点专项科研基金项目(20050625003); 文摘在甘蓝自交不亲和信号传导中SRK和THL1之间可能存在相互作用。为进一步证实该相互作用,以甘蓝E1为材料,采用RT-PCR技术扩增了THL1和SRK激酶结构域(记为SRKE1)编码序列,构建了THL1原核表达质粒pET43.1-THL1,SRKE1原核表达质粒pET431-SRKE1和真核表达质粒pPIC9K-SRKE1,分别在宿主菌大肠杆菌BL21和毕赤酵母GS115中进行表达。THL1融合蛋白经胰岛素检测,表明表达的THL1有氧化还原活性。建立了体外检测蛋白质相互作用的新方法,并用该方法对THL1与SRKE1的相互作用进行了检测,结果表明THL1可与SRKE1相互作用并形成稳定的复合体,这为深入分析THL1与SRK相互作用机理提供了理论和技术基础。; 关键词 S-位点受体激酶类硫氧还蛋白毕赤酵母; Keywords S-locus receptor kinase Thioredoxin-like protein Pichia pastoris; 分类号 S635 [农业科学—蔬菜学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名甘蓝自交不亲和信号传导元件ARC1的体外表达及其与SRK相互作用验证被引量：3: 4; 作者牛义王志敏高启国宋明王小佳朱利泉; 机构西南大学重庆市蔬菜学重点实验室西南大学植物生理生物化学实验室; 出处《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期1202-1208,共7页; 基金国家自然科学基金项目(30471190和30671429) 重庆市自然科学基金项目(9266) +1 种基金西南大学科研基金项目(SWU208044)资助; 文摘在甘蓝自交不亲和信号传导中ARC1和上游因子SRK之间可能存在相互作用。为进一步证实该相互作用,以甘蓝E1为材料,采用RT-PCR技术扩增ARC1的编码序列,构建ARC1原核表达质粒pET43.1a-ARC1,转化宿主菌大肠杆菌BL21,通过SDS-PAGE检测该蛋白的表达。利用免疫共沉淀原理及pET43.1a-ARC1融合蛋白序列中的6×His标签与Ni+结合的特点建立了体外检测蛋白质相互作用的新方法,并用该方法对ARC1与SRK的相互作用进行了检测。结果表明,在体外ARC1能与SRK相互作用并形成复合体,这为深入分析ARC1与SRK相互作用机理以及探讨ARC1与下游传导元件的相互作用提供了理论和技术基础。; 关键词甘蓝信号传导 S-位点受体激酶(SRK) 臂重复蛋白1(ARC1); Keywords Brassica oleracea L Signal transduction S-locus receptor kinase （SRK） Arm repeat containing 1 （ARC1）; 分类号 S635 [农业科学—蔬菜学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名基于SRK和SCR序列的甘蓝自交不亲和系单倍型分析被引量：2: 5; 作者高启国韦静宜朱利泉王小佳; 机构教育部南方山地园艺学重点实验室西南大学植物生理生物化学实验室; 出处《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期86-90,共5页; 基金国家自然科学基金项目(30900986) 重庆市自然科学基金项目(2009BB1298) +1 种基金西南大学博士基金项目(SWUB2008042)资助; 文摘采用RT-PCR和其他分子生物学方法,以甘蓝自交不亲和系E1和F1柱头cDNA为模板扩增SRKE1和SRKF1基因,以花药cDNA为模板扩增SCRE1和SCRF1基因.经序列比对首次证明E1和F1材料分别为S28和S7单倍型.经三维结构分析,预测SCRE1上C5-C6和C7-C8之间氨基酸序列决定SCRE1的单倍型特异性,SRKE1上TNNSFYSRLKVS序列决定了SRKE1的单倍型特异性,并对两者相对作用的关键氨基酸位点进行了分析.; 关键词甘蓝自交不亲和性 SRK基因 SCR基因单倍型; Keywords Brassica oleracea self-incompatibility S-locus receptor kinase（SRK） gene S-locus cysteine-rich protein（SCR） gene haplotype; 分类号 Q789 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名甘蓝染色体及伸长DNA纤维制备技术的研究被引量：2: 6; 作者荣小营朱利泉王永王小佳; 机构西南大学植物生理生物化学实验室西南大学重庆市蔬菜学重点实验室; 出处《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期1-7,共7页; 基金国家自然科学基金资助项目(30671429) 重庆市自然科学基金资助项目(9266); 文摘以甘蓝根尖、花药、黄化苗等为材料,初步建立了甘蓝有丝分裂前中期染色体、减数分裂粗线期染色体以及伸长DNA纤维等3种具有不同空间分辨率的靶DNA载体的制备技术.结果表明:通过变温处理可以有效提高前中期染色体分裂相比率;采用0.002 mol/L 8-羟基喹啉20℃预处理1 h、2%纤维素酶和2%果胶酶混合液37℃酶解约2 h、0.075 mol/L氯化钾25℃低渗30 min,制备的前中期染色体效果最佳;2%纤维素酶和2%果胶酶混合液37℃酶解约3 h,可获得伸展良好、背景干净的粗线期染色体;分子梳理法与移动界面法相比,前者制备的伸长DNA纤维效果较好.此方法的建立为荧光原位杂交技术在甘蓝相关研究领域的应用打下了坚实的基础.; 关键词甘蓝染色体伸长DNA纤维制片; Keywords Brassica oleracea ehromosomes extended DNA fiber slide preparation; 分类号 S635 [农业科学—蔬菜学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名甘蓝柱头蛋白质双向电泳体系的建立被引量：1: 7; 作者曾静陈松朱利泉高启国王小佳杨晓红; 机构西南大学农学与生物技术学院西南大学园艺园林学院; 出处《中国蔬菜》北大核心 2012年第06X期30-36,共7页; 基金国家自然科学基金项目(30900986 31071802) +2 种基金中央高校基本科研业务费专项(XDJK2010B010); 文摘蛋白质提取方法和电泳条件是蛋白质组学研究中双向电泳的关键。为建立适合甘蓝柱头总蛋白质的双向电泳体系,本试验以甘蓝柱头为材料,采用改良TCA/丙酮沉淀法提取柱头总蛋白质,通过对IPG胶条、上样量、聚焦程序、SDS-PAGE胶浓度等的优化,建立了甘蓝柱头总蛋白质双向电泳体系,即选用长17cm、pH3～10NL的IPG胶条,上样量150μg,按照聚焦程序Ⅰ进行等电聚焦,第二向SDS-PAGE胶浓度选用12%,得到了分辨率高、重复性好的双向电泳图片。; 关键词甘蓝柱头自交不亲和蛋白质双向电泳; Keywords Brassica oleracea L.var.capitata L.stigma Self-incompatibility Protein two-dimensional electrophoresis; 分类号 S635 [农业科学—蔬菜学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名同源重组快速构建甘蓝SCR酵母双杂交诱饵载体及其自激活作用的检测: 8; 作者罗兵朱利泉薛丽琰张贺翠彭一波杨红杨昆高启国李成琼王小佳; 机构西南大学植物生理生物化学实验室常熟理工学院生物与食品工程学院西南大学重庆市蔬菜学重点实验室; 出处《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期79-85,共7页; 基金国家自然科学基金资助项目(30971849); 文摘采用巢式PCR获得甘蓝SCR的成熟肽编码区,利用同源重组技术首次将其克隆到pGBKT7载体中,构建酵母双杂交系统的诱饵载体pGBKT7-SCR,结果表明:通过巢式PCR获得了正确的甘蓝SCR成熟肽编码区,并成功构建到pGBKT7诱饵载体中,且转化有诱饵载体的Y2HGold在SD/-Trp营养缺陷平板上生长良好,而在SD/-His-Trp和SD/-Trp/X-a-Gal/AbA营养缺陷平板上皆不能生长,说明对报告基因无自激活作用;且毒性实验也表明,SCR蛋白对酵母没有毒害作用.; 关键词甘蓝 SCR蛋白同源重组酵母双杂交诱饵载体自激活; Keywords Brassica oleracea L. SCR protein homologous recombination yeast two-hybrid system bait plasmid self-activation; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	利用酵母双杂交法检测甘蓝SCR与SRK之间的相互作用	罗兵薛丽琰朱利泉张贺翠彭一波陈松杨红杨昆李成琼王小佳	《作物学报》 CAS CSCD 北大核心	2011	6	在线阅读下载PDF 职称材料
2	甘蓝自交不亲和基因MLPK与SSP的FISH定位	荣小营朱利泉王永高启国陈晓丹杨洋王小佳	《作物学报》 CAS CSCD 北大核心	2009	5	在线阅读下载PDF 职称材料
3	甘蓝自交不亲和信号传导中THL1和SRK相互作用的体外检测	高启国宋明牛义杨昆朱利泉王小佳	《作物学报》 CAS CSCD 北大核心	2008	4	在线阅读下载PDF 职称材料
4	甘蓝自交不亲和信号传导元件ARC1的体外表达及其与SRK相互作用验证	牛义王志敏高启国宋明王小佳朱利泉	《作物学报》 CAS CSCD 北大核心	2009	3	在线阅读下载PDF 职称材料
5	基于SRK和SCR序列的甘蓝自交不亲和系单倍型分析	高启国韦静宜朱利泉王小佳	《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心	2011	2	在线阅读下载PDF 职称材料
6	甘蓝染色体及伸长DNA纤维制备技术的研究	荣小营朱利泉王永王小佳	《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心	2009	2	在线阅读下载PDF 职称材料
7	甘蓝柱头蛋白质双向电泳体系的建立	曾静陈松朱利泉高启国王小佳杨晓红	《中国蔬菜》北大核心	2012	1	在线阅读下载PDF 职称材料
8	同源重组快速构建甘蓝SCR酵母双杂交诱饵载体及其自激活作用的检测	罗兵朱利泉薛丽琰张贺翠彭一波杨红杨昆高启国李成琼王小佳	《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心	2012	0	在线阅读下载PDF 职称材料