HC-1119对三阴性乳腺癌BT549细胞生物学行为的影响 被引量：2

1

作者 黄钱 任秋宇 +2 位作者 张春燕 何涛 甘淋 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期2221-2226,共6页

目的:检测新型人工合成的雄激素受体(androgen receptor,AR)拮抗剂HC-1119对三阴性乳腺癌BT549细胞生物学功能的影响,并探讨其分子机制。方法:用Western blot法检测不同人乳腺癌细胞系MDA-MB-231、T47D、MCF-7、SKBR3和BT549中AR的表达... 目的:检测新型人工合成的雄激素受体(androgen receptor,AR)拮抗剂HC-1119对三阴性乳腺癌BT549细胞生物学功能的影响,并探讨其分子机制。方法:用Western blot法检测不同人乳腺癌细胞系MDA-MB-231、T47D、MCF-7、SKBR3和BT549中AR的表达。在AR表达阳性的三阴性乳腺癌BT549细胞中,采用HC-1119进行刺激,用CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡和周期分布情况,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭情况,Western blot法检测HC-1119刺激对BT549细胞中E-cadherin、vimentin和P21表达的影响。结果:AR在BT549细胞中阳性表达;HC-1119呈浓度和时间依赖性抑制BT549细胞的活力(P<0.05),显著上调BT549细胞的早期凋亡百分比和S期百分比(P<0.01),抑制BT549细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05);此外,HC-1119还能抑制BT549细胞中P21表达(P<0.01),而E-cadherin和vimentin的表达未见改变。结论:AR拮抗剂HC-1119能够抑制AR阳性的三阴性乳腺癌BT549细胞的活力、迁移能力和侵袭能力,促进细胞凋亡,阻滞细胞周期;HC-1119通过P21调节细胞生长,却没有经过上皮-间充质转化而参与BT549细胞的迁移行为。 展开更多

关键词 三阴性乳腺癌 雄激素受体 HC-1119 细胞活力 细胞凋亡

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Notch信号通路与先天性心脏病

2

作者 田坤灵 陈川宁 《协和医学杂志》 CSCD 北大核心 2024年第3期649-654,共6页

先天性心脏病(congenital heart disease, CHD)指胎儿在胚胎时期的心脏发育异常,通常伴有大血管发育不良,其发病机制复杂,目前尚未阐明。研究表明,Notch信号通路参与心脏发育的全过程,包括原始心脏的形成及发育、出生后心脏正常功能的维... 先天性心脏病(congenital heart disease, CHD)指胎儿在胚胎时期的心脏发育异常,通常伴有大血管发育不良,其发病机制复杂,目前尚未阐明。研究表明,Notch信号通路参与心脏发育的全过程,包括原始心脏的形成及发育、出生后心脏正常功能的维持,该通路异常会导致CHD的发生。本文就Notch信号通路参与心脏生长发育以及导致CHD的作用机制展开综述,以期为CHD的早期诊断提供参考。 展开更多

关键词 先天性心脏病 NOTCH信号通路 心脏发育

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一代二代联合测序快速鉴定肝豆状核变性及家系溯源研究 被引量：1

3

作者 黄原 何苗 +4 位作者 范振鑫 邓娟 李颖 王宇杰 郑小莉 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期406-410,共5页

目的:探索二代测序筛选和一代测序验证的快速准确诊断罕见遗传病肝豆状核变性的检测方法和流程。方法:提取先证者DNA并构建高通量测序文库后通过二代测序鉴定其可能致病位点;再提取包括先证者在内的该家系13位成员DNA,设计引物并对目标... 目的:探索二代测序筛选和一代测序验证的快速准确诊断罕见遗传病肝豆状核变性的检测方法和流程。方法:提取先证者DNA并构建高通量测序文库后通过二代测序鉴定其可能致病位点;再提取包括先证者在内的该家系13位成员DNA,设计引物并对目标片段PCR扩增后进行双相一代测序验证。结果:先证者的ATP7B基因外显子8中检测出1个杂合错义突变(rs121907990;chr13:51937570);家系成员共查出3位携带同一杂合错义突变者,先证者ATP7B突变来源于母系。结论:本研究设计的联合二代测序检测与一代测序验证的肝豆状核变性基因突变位点的快速鉴定技术和流程图,可能为罕见遗传病基因突变致病位点提供可借鉴的检测模式,为早期高效精准确诊罕见遗传病提供帮助。 展开更多

关键词 肝豆状核变性 ATP7B基因 一代测序 二代测序

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雄激素受体在三阴性乳腺癌中的研究进展 被引量：18

4

作者 黄钱 甘淋 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2019年第2期318-321,共4页

三阴性乳腺癌是乳腺癌中最具侵袭性的亚型之一,与其他亚型的乳腺癌患者相比,三阴性乳腺癌患者存活率和无病生存率更低。近几年,随着细胞以及基因分析的高速发展,乳腺癌的研究也达到了一个新的高度,研究发现在高达70%～90%的乳腺癌中均... 三阴性乳腺癌是乳腺癌中最具侵袭性的亚型之一,与其他亚型的乳腺癌患者相比,三阴性乳腺癌患者存活率和无病生存率更低。近几年,随着细胞以及基因分析的高速发展,乳腺癌的研究也达到了一个新的高度,研究发现在高达70%～90%的乳腺癌中均有雄激素受体的表达,并且它的表达与乳腺癌的发病机制密切相关。因此,在雄激素受体阳性的三阴性乳腺癌中,雄激素受体拮抗剂有望成为新的治疗途径。本篇综述主要介绍雄激素受体在三阴性乳腺癌中的研究以及常见雄激素受体拮抗剂对三阴性乳腺癌治疗的研究。 展开更多

关键词 三阴性乳腺癌 乳腺癌 雄激素受体拮抗剂 雄激素受体

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扶正祛邪抑癌方治疗大鼠原发性肝癌的实验研究 被引量：7

5

作者 雷丹 黄素琼 +3 位作者 李波 王晓栋 刘友平 魏嵋 《世界科学技术-中医药现代化》 CSCD 北大核心 2020年第4期986-995,共10页

目的探讨扶正祛邪抑癌方对原发性肝癌大鼠的治疗效果,以及与体内细胞因子的相关性。方法干预组使用二乙基亚硝胺(Diethylnitrosamine,DEN)进行造模,造模成功后随机分为模型组、斑蝥组、高剂量组、中剂量组和低剂量组共5组。正常组、模... 目的探讨扶正祛邪抑癌方对原发性肝癌大鼠的治疗效果,以及与体内细胞因子的相关性。方法干预组使用二乙基亚硝胺(Diethylnitrosamine,DEN)进行造模,造模成功后随机分为模型组、斑蝥组、高剂量组、中剂量组和低剂量组共5组。正常组、模型组予以生理盐水灌胃,斑蝥组予以复方斑蝥胶囊灌胃,三个不同剂量组予以扶正祛邪抑癌方灌胃,12周后腹主动脉取血,检测肝功指标:GGT、ALP、AST、ALT;Elisa检测IL-6、LI-10、TNF-α、IFN-γ;免疫组化检测AFP、COX-2。结果给药组可以改善肝癌大鼠一般情况、生存率、ALT、AST、ALP、GGT、IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ,减低肝脏组织中COX-2、AFP的表达,且以中剂量组改善最明显。结论扶正祛邪抑癌方可以提高肝癌大鼠的生存率,改善大鼠一般情况及肝功能,并且减少血清中的炎症因子,对原发性肝癌有一定治疗作用。 展开更多

关键词 原发性肝癌 二乙基亚硝胺 扶正祛邪抑癌方 细胞因子 大鼠

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利用蛋白质组学技术筛查乳腺癌患者血清肿瘤标志物 被引量：8

6

作者 张晨曦 刘晓燕 +2 位作者 张春燕 张青 甘淋 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2017年第20期3354-3358,共5页

目的通过蛋白质组学技术,筛选乳腺癌患者和健康人血清的差异表达蛋白,以期筛查乳腺癌早期诊断的肿瘤标志物。方法收集乳腺癌患者血清10例、健康人血清各10例,采用双向电泳(2-DE)技术分离蛋白,通过PDQuest软件筛选乳腺癌和健康人血清表... 目的通过蛋白质组学技术,筛选乳腺癌患者和健康人血清的差异表达蛋白,以期筛查乳腺癌早期诊断的肿瘤标志物。方法收集乳腺癌患者血清10例、健康人血清各10例,采用双向电泳(2-DE)技术分离蛋白,通过PDQuest软件筛选乳腺癌和健康人血清表达差异的蛋白样点,进一步质谱分析鉴定。结果初步建立人乳腺癌、健康人血清双向电泳图谱,PDQuest软件分析2-DE电泳结果,检测出22个差异蛋白点,以健康人组为参照,乳腺癌组上调有18个蛋白样点,下调有4个。从22个差异点中筛选其中12个差异蛋白样点进行取样、胶内酶切、质谱鉴定,成功鉴定4个表达差异的蛋白点,通过数据库检索最终确定上述蛋白点对应的蛋白质分别为锚蛋白-3亚型X7(ankyrin-3 isoform X7)、keratin,type I cyto-skeletal 9、核膜血影重复蛋白2亚型X11(nesprin-2 isoform X11)、Dynein heavy chain 10,axonemal iso-form X9。结论健康人组和乳腺癌组筛选出的差异蛋白质可能成为乳腺癌的早期诊断标志物。 展开更多

关键词 乳腺肿瘤 蛋白质组学 血清 肿瘤标志物

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乳腺癌患者血清中20种氨基酸的检测及在乳腺癌筛查中的意义 被引量：3

7

作者 何永鹏 郑晓东 +8 位作者 徐灵莉 雷海科 林昌海 付晓琴 邓浩月 李沁栖 任秋宇 朱娟 甘淋 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1238-1245,共8页

目的考察乳腺癌患者与正常体检者血清中氨基酸水平的差异,并探讨其在乳腺癌筛查中的意义。方法招募2019年4-6月重庆大学附属肿瘤医院病理科确诊的女性乳腺癌患者59例作为乳腺癌组,以正常女性体检者53例作为对照组。采用高效液相色谱-质... 目的考察乳腺癌患者与正常体检者血清中氨基酸水平的差异,并探讨其在乳腺癌筛查中的意义。方法招募2019年4-6月重庆大学附属肿瘤医院病理科确诊的女性乳腺癌患者59例作为乳腺癌组,以正常女性体检者53例作为对照组。采用高效液相色谱-质谱法(HPLC-MS)检测招募者血清中20种氨基酸水平,分析乳腺癌组与对照组间、乳腺癌不同分子亚型组间、早期乳腺癌组与晚期乳腺癌组间氨基酸水平的差异。采用ROC曲线对差异血清氨基酸在乳腺癌筛查中的效能进行评估。结果乳腺癌组血清中丙氨酸(Ala)、天冬酰胺(Asn)、瓜氨酸(Cit)、谷氨酸(Glu)、组氨酸(His)、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、赖氨酸(Lys)、鸟氨酸(Orn)、苯丙氨酸(Phe)、脯氨酸(Pro)、苏氨酸(Thr)、酪氨酸(Tyr)、缬氨酸(Val)的水平均高于对照组(P均<0.05),精氨酸(Arg)水平低于对照组(P=0.003)。ROC曲线分析表明,在乳腺癌患者血清中升高的14种氨基酸中,Ala和Pro单独筛查乳腺癌的效能较高,AUC均为0.75;Ile单独筛查乳腺癌时有最高的灵敏度,达0.82;Lys单独筛查乳腺癌时有最高的特异度,达0.94;这14种氨基酸联合检测时能够提高乳腺癌的筛查效能,AUC为0.88,灵敏度为0.69,特异度为0.94。早期乳腺癌(TNM分期Ⅰ期和Ⅱ期)患者血清Val水平高于晚期(TNM分期Ⅲ期和Ⅳ期)患者(P=0.044),其他19种氨基酸水平在早期和晚期乳腺癌患者之间差异均无统计学意义(P均>0.05)。20种血清氨基酸水平在Luminal A型、Luminal B型、三阴性型、人表皮生长因子受体2(HER2)阳性型乳腺癌组间差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论乳腺癌患者血清中15种氨基酸水平与正常体检者相比存在差异,有助于乳腺癌筛查;14种在乳腺癌患者血清中升高的氨基酸的联合检测有利于提高乳腺癌筛查效能,是有潜力的生物学标志物。 展开更多

关键词 乳腺肿瘤 血清 氨基酸类 筛查 高效液相色谱-质谱法 肿瘤生物标记

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MDA-MB-231乳腺癌细胞两种低氧模型的建立与比较分析 被引量：4

8

作者 方天星 倪玉芳 +1 位作者 赖德平 曾凡才 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期244-251,共8页

目的:由于实体瘤内的肿瘤细胞常处于低氧环境,本实验拟探究两种常用低氧模型对乳腺癌细胞影响的差异。方法:以不同浓度(0~300μmol/L)CoCl2处理人乳腺癌MDA-MB-231细胞不同时间(24 h、48 h和72 h)建立化学低氧模型,以不同程度低氧(1%、2... 目的:由于实体瘤内的肿瘤细胞常处于低氧环境,本实验拟探究两种常用低氧模型对乳腺癌细胞影响的差异。方法:以不同浓度(0~300μmol/L)CoCl2处理人乳腺癌MDA-MB-231细胞不同时间(24 h、48 h和72 h)建立化学低氧模型,以不同程度低氧(1%、2%和5%O2)处理MDA-MB-231细胞不同时间(4 h、16 h和24 h)建立物理低氧模型。采用CCK-8法检测细胞活力,Western blot检测低氧诱导因子1α(HIF-1α)、Bcl-2及基质金属蛋白酶2(MMP-2)的蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell和划痕实验检测细胞的侵袭及迁移能力。结果:综合不同时间和浓度的HIF-1α蛋白表达结果,最终以100μmol/L CoCl2处理24 h建立化学低氧模型,以2%O 2处理24 h建立物理低氧模型;物理低氧细胞的HIF-1α蛋白表达明显高于化学低氧,且物理低氧细胞处于复氧环境后HIF-1α蛋白快速降解;物理低氧细胞凋亡增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低,而化学低氧细胞无明显变化;两种低氧细胞的MMP-2蛋白表达均升高,且化学低氧细胞的侵袭及迁移能力增强。结论:两种低氧细胞模型构建成功,并且两种低氧细胞在HIF-1α蛋白表达与稳定性、细胞活力、凋亡、侵袭及迁移等方面均存在差异。这些差异可为低氧模型的选择和研究低氧环境下的肿瘤细胞特性提供参考。 展开更多

关键词 低氧 低氧诱导因子1Α 细胞凋亡 细胞活力 乳腺癌

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ATF4在CCl4和LPS/D-GalN介导小鼠肝损伤中的保护作用 被引量：3

9

作者 秦蜀 陈润 +6 位作者 赵晓芳 王勇 向远彩 罗国松 周虹 代荣阳 张春燕 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2018年第13期2146-2150,共5页

目的利用小鼠模型对转录激活因子4(ATF4)在肝损伤中的作用进行研究。方法建立CCl 4慢性肝损伤小鼠模型和LPS/D-Gal N急性肝损伤小鼠模型,运用逆转录PCR和Western blot分析比较损伤模型中小鼠肝脏、心脏、肾脏、肺脏组织中的ATF4蛋白及其... 目的利用小鼠模型对转录激活因子4(ATF4)在肝损伤中的作用进行研究。方法建立CCl 4慢性肝损伤小鼠模型和LPS/D-Gal N急性肝损伤小鼠模型,运用逆转录PCR和Western blot分析比较损伤模型中小鼠肝脏、心脏、肾脏、肺脏组织中的ATF4蛋白及其mRNA水平。采用CRISPR-Cas9技术敲低ATF4后,分析检测两种模型中小鼠血清AST和ALT水平。为进一步探明ATF4的作用,采用内质网应激诱导剂衣霉素处理小鼠,Western blot检测小鼠肝、肺组织中ATF4、磷酸化-eIF2α、总eIF2α和Bip的蛋白水平。RT-PCR检测肝脏XBP1 mRNA的剪接形式(活性形式)和未剪接形式(非活性形式)。结果小鼠肝脏中的ATF4蛋白与其他组织相比异常增高。衣霉素能诱导小鼠体内内质网应激反应(如e IF 2α磷酸化),却引起小鼠肝脏中ATF4蛋白降低。在CCl4慢性肝损伤模型和LPS/D-GalN急性肝损伤小鼠模型中,肝脏ATF4蛋白明显降低。CRISPR-Cas9敲低肝脏ATF4后,两种小鼠模型中的血清AST和ALT进一步升高。结论 ATF4在小鼠肝损伤中起保护作用。 展开更多

关键词 ATF4 CCL4 LPS/D-GalN 肝损伤

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Salubrinal在ABT737诱导的人肝癌细胞Sk-Hep1凋亡中的作用及机制 被引量：2

10

作者 谢邹祺 代荣阳 张春燕 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2019年第8期1198-1203,共6页

目的探索ABT737诱导的Sk-Hep1人肝癌细胞凋亡中salubrinal的作用其机制。方法联合应用ABT737与salubrinal后,转染eIF2αS51A质粒(51位丝氨酸不能磷酸化突变体)、eIF2αS51D(51位丝氨酸磷酸化突变体)质粒进入Sk-Hep1人肝癌细胞中,Western... 目的探索ABT737诱导的Sk-Hep1人肝癌细胞凋亡中salubrinal的作用其机制。方法联合应用ABT737与salubrinal后,转染eIF2αS51A质粒(51位丝氨酸不能磷酸化突变体)、eIF2αS51D(51位丝氨酸磷酸化突变体)质粒进入Sk-Hep1人肝癌细胞中,Western Blot检测PARP剪切蛋白、DNA损伤情况、p-eIF2α、eIF2α蛋白表达。结果在Sk-Hep1人肝癌细胞中联合应用salubrinal与ABT737后,与对照组相比,剪切的PARP蛋白表达量明显下调,磷酸化的H2AX蛋白表达量明显下调(P <0.05);p-eIF2α、eIF2α蛋白表达水平没有明显变化。转染eIF2αS51A、eIF2αS51D质粒后,与对照组相比,剪切的PARP、p-eIF2α蛋白表达水平无明显变化(P> 0.05)。结论 Salubrinal对ABT737诱导的细胞凋亡和损伤具有拮抗作用,该拮抗作用可能与eIF2α通路无关。 展开更多

关键词 肝癌 salubrinal Sk-Hep1 ABT737 eIF2α通路 剪切的PARP蛋白

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小鼠THBS1基因敲除改善内脏脂肪免疫微环境并抑制结直肠癌腹腔种植转移 被引量：1

11

作者 汪腾 高源 +2 位作者 赵昆 向远彩 缪洪明 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第18期1907-1915,共9页

目的探究血小板反应蛋白1(thrombospondin-1,THBS1)基因敲除对结直肠癌免疫微环境与肿瘤进展的作用。方法构建THBS1基因敲除小鼠,经PCR、琼脂糖凝胶电泳明确小鼠基因型。用THBS1基因野生型(THBS1^(+/+))与THBS1基因敲除(THBS1^(-/-))小... 目的探究血小板反应蛋白1(thrombospondin-1,THBS1)基因敲除对结直肠癌免疫微环境与肿瘤进展的作用。方法构建THBS1基因敲除小鼠,经PCR、琼脂糖凝胶电泳明确小鼠基因型。用THBS1基因野生型(THBS1^(+/+))与THBS1基因敲除(THBS1^(-/-))小鼠构建结直肠癌皮下荷瘤与腹腔种植转移模型,观察THBS1基因敲除对小鼠肿瘤生长情况的影响。用流式细胞术检测腹腔种植转移模型中THBS1基因敲除后对结直肠癌附睾脂肪中免疫细胞的变化。结果与THBS1^(+/+)小鼠相比,THBS1^(-/-)小鼠在结肠癌皮下荷瘤模型中肿瘤生长没有差异(P>0.05),而在腹腔种植转移模型中则显著抑制肿瘤生长(P<0.05)。流式细胞术检测结果显示,与THBS1^(+/+)小鼠相比,THBS1基因敲除后腹腔种植转移模型小鼠的附睾脂肪组织中总巨噬细胞比例增高(P<0.01),其中M1型(经典型或促炎型)巨噬细胞比例升高(P<0.01)、M2型(替代活化型或抗炎型)巨噬细胞比例下降(P<0.01);髓源性抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSC)比例下降(P<0.05),其中Ly6C亚群(P<0.01)比例升高,Ly6G亚群比例降低(P<0.05);CD8+T细胞比例显著升高(P<0.01)、CD4^(+)T细胞比例降低(P<0.01)。与THBS1^(+/+)小鼠相比,THBS1基因敲除小鼠外周血总巨噬细胞、M1型巨噬细胞、M2型巨噬细胞比例均无变化(P>0.05);MDSC及ly6C亚群比例无变化(P>0.05),ly6G亚群比例降低(P<0.05);CD8^(+)T细胞比例显著降低(P<0.05)、CD4+T细胞比例无变化(P>0.05)。结论THBS1基因敲除通过增强肿瘤免疫抑制结直肠癌细胞腹腔种植转移。 展开更多

关键词 血小板反应蛋白1 结直肠癌 免疫微环境 附睾脂肪

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核因子E2相关因子1诸多亚型的产生机制及其在疾病中的作用

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作者 贾蔓 吕金晶 向远彩 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期595-602,共8页

核因子E2相关因子1(nuclear factor-erythroid 2 related factor 1,Nrf1/Nfe2l1)在个体正常生长发育过程中具有维持细胞内稳态和器官完整性的作用。其功能缺失会产生严重的氧化应激和基因组不稳定等,继而导致肝癌、神经退行性疾病等多... 核因子E2相关因子1(nuclear factor-erythroid 2 related factor 1,Nrf1/Nfe2l1)在个体正常生长发育过程中具有维持细胞内稳态和器官完整性的作用。其功能缺失会产生严重的氧化应激和基因组不稳定等,继而导致肝癌、神经退行性疾病等多种疾病。近年研究发现,Nrf1存在多种具有不同程度活化活性甚至相反活性的亚型,这些亚型的分布可能在肿瘤的发生发展过程中具有重要作用。为了更好地了解Nrf1在组织细胞中所发挥的功能,本文简要介绍Nrf1的发现历程,并从选择性剪切加工、内部选择性翻译起始、翻译后剪切加工等方面阐述Nrf1亚型的产生机制,同时详细阐明“跨膜动态加工”、“位点特异性剪切加工”、“泛素依赖性剪切加工”3种翻译后加工模型的差异。最后,介绍Nrf1各亚型的生物学功能及其产生过程出现异常时在疾病中的作用。本文着重对Nrf1各亚型产生机制及其在疾病中的作用进行综述,力求为寻找肿瘤治疗的新策略提供新的方向。 展开更多

关键词 核因子E2相关因子1 RNA剪切 翻译后修饰加工 肿瘤治疗

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转胶蛋白沉默影响三阴性乳腺癌细胞凋亡和自噬的作用机制

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作者 杨家磊 唐朝 +3 位作者 廖芮婷 加晓芳 何涛 杨文理 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2022年第12期1261-1267,共7页

目的 三阴性乳腺癌的发生发展机制尚未完全阐明,转胶蛋白(TAGLN)在三阴性乳腺癌中的作用机制也尚不明确。文中旨在探讨TAGLN基因沉默对三阴性乳腺癌Hs578T稳定细胞凋亡和自噬的影响及其机制。方法 确定Hs578T细胞的puromycin最佳筛选浓... 目的 三阴性乳腺癌的发生发展机制尚未完全阐明,转胶蛋白(TAGLN)在三阴性乳腺癌中的作用机制也尚不明确。文中旨在探讨TAGLN基因沉默对三阴性乳腺癌Hs578T稳定细胞凋亡和自噬的影响及其机制。方法 确定Hs578T细胞的puromycin最佳筛选浓度;设计、合成TAGLN shRNA,构建TAGLN慢病毒干扰质粒sh1和sh2,分别包装含TAGLN shRNA(shRNA1和shRNA2)及对照shRNA(ctrl)的慢病毒并感染Hs578T细胞;puromycin筛选建立TAGLN沉默的Hs578T稳定细胞系(Hs578Tsh1和Hs578Tsh2)和对照稳定细胞系(Hs578TCtrl),qPCR和Western blot鉴定稳定细胞中TAGLN mRNA和蛋白的表达水平;在各组Hs578T稳定细胞中,用流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测检测Bax、Bcl-2、Caspase3、Cleaved-Caspase3、PARP、Cleaved-PARP等蛋白的表达情况。结果 Western blot和qPCR结果显示,与对照稳定细胞Hs578T Ctrl相比,TAGLN敲低细胞Hs578T sh1、Hs578T sh2的TAGLN蛋白表达(P<0.01),mRNA表达亦降低(P<0.01)。流式细胞术结果显示,敲低TAGLN的Hs578T sh1、Hs578T sh2稳定细胞较Hs578TCtrl细胞的总凋亡率分别增加100.7%、74.4%(P<0.01),早期凋亡率分别增加126.4%、85.7%(P<0.01),晚期凋亡率分别增加49.2%、51.9%(P<0.01)。Western blot结果显示,敲低TAGLN的Hs578T sh1、Hs578T sh2稳定细胞较Hs578TCtrl细胞的Bcl-2表达减少,Bax表达增多,Bax/Bcl-2比值分别增加148%、115%,Cleaved-PARP蛋白分别增加41%、34%,Capase3蛋白分别增加26%、11%,Cleaved-Caspase3蛋白增加27%、21%(P<0.01);敲低TAGLN的Hs578T sh1、Hs578T sh2稳定细胞较对照Hs578T Ctrl细胞的LC3-Ⅱ、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达减少,而P62蛋白表达均升高(P<0.01)。结论 成功构建了TAGLN沉默的Hs578T稳定细胞系及对照细胞系;TAGLN可能通过ERK1/2信号通路促进三阴性乳腺癌Hs578T稳定细胞的凋亡及抑制自噬通量。 展开更多

关键词 转胶蛋白 三阴性乳腺癌 凋亡 自噬

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