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外泌体为载体的微小RNA-1基因运送抑制人口腔鳞状细胞癌CAL-27细胞增殖的研究
被引量：
2
1
作者
伍宝琴
黎春晖
+1 位作者
张梦莲
聂敏海
《华西口腔医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第2期136-142,共7页
目的用供体细胞基因过表达的方法构建微小RNA-1(miR-1)高表达的细胞内源性外泌体,探讨以外泌体为载体,运送miR-1对口腔鳞状细胞癌CAL-27细胞增殖的作用。方法采用超速离心法提取过表达miR-1的HEK293细胞的外泌体,并用透射电子显微镜、...
目的用供体细胞基因过表达的方法构建微小RNA-1(miR-1)高表达的细胞内源性外泌体,探讨以外泌体为载体,运送miR-1对口腔鳞状细胞癌CAL-27细胞增殖的作用。方法采用超速离心法提取过表达miR-1的HEK293细胞的外泌体,并用透射电子显微镜、纳米颗粒分析仪、Western blot及定量聚合酶链反应(qPCR)进行外泌体鉴定。过表达miR-1的HEK293细胞外泌体(miR1-EXO)、HEK293细胞的外泌体(CON-EXO)及等体积磷酸盐缓冲液(PBS)分别与CAL-27细胞共培养,用免疫荧光检测外泌体向细胞的转运,用qPCR检测CAL-27细胞miR-1及下游靶基因MET的表达变化,用噻唑蓝比色法(MTT)检测CAL-27细胞增殖情况,用流式细胞术进行细胞周期检测。同时,miR1-EXO、CON-EXO及等体积PBS分别与人正常口腔黏膜上皮角化细胞(NOK)共培养,用MTT法检测NOK细胞增殖情况。结果miR1-EXO、CON-EXO均呈典型的球形或杯状结构,直径约110 nm,并高表达外泌体标志性蛋白CD9、Alix及Tsg101。miR1-EXO中miR-1的表达量为285.80±14.33,CON-EXO的表达量为1.00±0.06,二者间有统计学差异(P<0.0001)。免疫荧光及qPCR结果显示,与CAL-27细胞共培养后,miR1-EXO被CAL-27细胞摄取,miR1-EXO CAL-27细胞的miR-1表达水平高于CONEXO及PBS,miR-1下游靶基因MET表达水平下调。MTT及细胞周期结果显示,与CAL-27细胞共培养后,miR1-EXO G0/G1期细胞比例高于CON-EXO和PBS,抑制CAL-27细胞增殖,而miR1-EXO对NOK细胞增殖的影响很小。结论供体细胞基因过表达的方法可使过表达miR-1的HEK293细胞分泌高表达miR-1的外泌体,并且高表达miR-1的外泌体可以将miR-1运送到CAL-27细胞,下调MET基因表达,抑制CAL-27细胞增殖。
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关键词
外泌体
微小RNA-1
口腔鳞状细胞癌
细胞增殖
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职称材料
题名
外泌体为载体的微小RNA-1基因运送抑制人口腔鳞状细胞癌CAL-27细胞增殖的研究
被引量：
2
1
作者
伍宝琴
黎春晖
张梦莲
聂敏海
机构
西南医科大学口腔医学院口颌面修复重建和再生实验室
西南
医科
大学
附属
口腔
医院牙周黏膜病科
出处
《华西口腔医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第2期136-142,共7页
基金
四川省教育厅重点项目(17ZA0443)
四川省卫生和计划生育委员会科研课题(16PJ535)
西南医科大学附属口腔医院项目(201707)。
文摘
目的用供体细胞基因过表达的方法构建微小RNA-1(miR-1)高表达的细胞内源性外泌体,探讨以外泌体为载体,运送miR-1对口腔鳞状细胞癌CAL-27细胞增殖的作用。方法采用超速离心法提取过表达miR-1的HEK293细胞的外泌体,并用透射电子显微镜、纳米颗粒分析仪、Western blot及定量聚合酶链反应(qPCR)进行外泌体鉴定。过表达miR-1的HEK293细胞外泌体(miR1-EXO)、HEK293细胞的外泌体(CON-EXO)及等体积磷酸盐缓冲液(PBS)分别与CAL-27细胞共培养,用免疫荧光检测外泌体向细胞的转运,用qPCR检测CAL-27细胞miR-1及下游靶基因MET的表达变化,用噻唑蓝比色法(MTT)检测CAL-27细胞增殖情况,用流式细胞术进行细胞周期检测。同时,miR1-EXO、CON-EXO及等体积PBS分别与人正常口腔黏膜上皮角化细胞(NOK)共培养,用MTT法检测NOK细胞增殖情况。结果miR1-EXO、CON-EXO均呈典型的球形或杯状结构,直径约110 nm,并高表达外泌体标志性蛋白CD9、Alix及Tsg101。miR1-EXO中miR-1的表达量为285.80±14.33,CON-EXO的表达量为1.00±0.06,二者间有统计学差异(P<0.0001)。免疫荧光及qPCR结果显示,与CAL-27细胞共培养后,miR1-EXO被CAL-27细胞摄取,miR1-EXO CAL-27细胞的miR-1表达水平高于CONEXO及PBS,miR-1下游靶基因MET表达水平下调。MTT及细胞周期结果显示,与CAL-27细胞共培养后,miR1-EXO G0/G1期细胞比例高于CON-EXO和PBS,抑制CAL-27细胞增殖,而miR1-EXO对NOK细胞增殖的影响很小。结论供体细胞基因过表达的方法可使过表达miR-1的HEK293细胞分泌高表达miR-1的外泌体,并且高表达miR-1的外泌体可以将miR-1运送到CAL-27细胞,下调MET基因表达,抑制CAL-27细胞增殖。
关键词
外泌体
微小RNA-1
口腔鳞状细胞癌
细胞增殖
Keywords
exosomes
microRNA-1
oral squamous cell carcinoma
cell proliferation
分类号
R739.8 [医药卫生—肿瘤]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
外泌体为载体的微小RNA-1基因运送抑制人口腔鳞状细胞癌CAL-27细胞增殖的研究
伍宝琴
黎春晖
张梦莲
聂敏海
《华西口腔医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021
2
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