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小反刍兽疫病毒非结构蛋白C单克隆抗体的制备与鉴定
1
作者
李菊
毕冬琳
+5 位作者
杨晓莉
杨东亮
张潇文
刘方程
李琼毅
柏家林
《浙江农业学报》
CSCD
北大核心
2024年第5期1047-1054,共8页
为制备小反刍兽疫病毒(PPRV)非结构蛋白C单克隆抗体,根据PPRV C基因编码多肽链氨基酸序列抗原性分析,设计合成一条含20个氨基酸的抗原肽(CRSGKPRGETPGPLLPEIMQ)和一条含21个氨基酸的筛选抗原多肽(PLRAGERGLAPQAVQHRTLIK),将它们分别与...
为制备小反刍兽疫病毒(PPRV)非结构蛋白C单克隆抗体,根据PPRV C基因编码多肽链氨基酸序列抗原性分析,设计合成一条含20个氨基酸的抗原肽(CRSGKPRGETPGPLLPEIMQ)和一条含21个氨基酸的筛选抗原多肽(PLRAGERGLAPQAVQHRTLIK),将它们分别与钥孔血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin, KLH)和生物素羧基蛋白(biotin carboxyl carrier protein, Biotin)交联,制备获得免疫原和筛选抗原。用免疫原肌肉注射5只8~12周龄、体重约20 g的无特定病原体(specific pathogen free, SPF)级BALB/c雌性小鼠,第1次免疫后分别间隔7 d进行第2次免疫和第3次免疫,三免后21 d进行冲击免疫,冲击免疫后第3天采集血液分离血清,采用间接酶联免疫吸附法(ELISA)测得1只免疫小鼠血清抗体效价为1∶312 500,2只为1∶62 500。取3只小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0经聚乙二醇(PEG)融合制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA筛选出26株阳性淋巴杂交瘤细胞,进一步经克隆化培养筛选出46株单克隆细胞株。通过Western blot(WB)筛选获得2株能稳定分泌特异性抗PPRV C蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,WB、间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay, IFA)鉴定显示,制备的单克隆抗体具有较好的灵敏性和病毒反应性。研究结果为进一步阐明C蛋白在PPRV生命周期中的作用奠定了基础,也为小反刍兽疫(PPR)诊断提供了有效的诊断试剂。
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关键词
小反刍兽疫病毒
非结构蛋白C
杂交瘤细胞技术
单克隆抗体
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职称材料
题名
小反刍兽疫病毒非结构蛋白C单克隆抗体的制备与鉴定
1
作者
李菊
毕冬琳
杨晓莉
杨东亮
张潇文
刘方程
李琼毅
柏家林
机构
西北民族大学细胞基质疫苗关键技术与产业化教育部工程研究中心
西北民族大学
生物医学
研究
中心
生物
工程
与
技术
国家民委重点实验室
西北民族大学
生命科学与
工程
学院
出处
《浙江农业学报》
CSCD
北大核心
2024年第5期1047-1054,共8页
基金
国家自然科学基金(31860696)
西北民族大学中央高校基本科研业务费项目(31920190003)
兰州市人才创业创新项目(2020-RC-85)。
文摘
为制备小反刍兽疫病毒(PPRV)非结构蛋白C单克隆抗体,根据PPRV C基因编码多肽链氨基酸序列抗原性分析,设计合成一条含20个氨基酸的抗原肽(CRSGKPRGETPGPLLPEIMQ)和一条含21个氨基酸的筛选抗原多肽(PLRAGERGLAPQAVQHRTLIK),将它们分别与钥孔血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin, KLH)和生物素羧基蛋白(biotin carboxyl carrier protein, Biotin)交联,制备获得免疫原和筛选抗原。用免疫原肌肉注射5只8~12周龄、体重约20 g的无特定病原体(specific pathogen free, SPF)级BALB/c雌性小鼠,第1次免疫后分别间隔7 d进行第2次免疫和第3次免疫,三免后21 d进行冲击免疫,冲击免疫后第3天采集血液分离血清,采用间接酶联免疫吸附法(ELISA)测得1只免疫小鼠血清抗体效价为1∶312 500,2只为1∶62 500。取3只小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0经聚乙二醇(PEG)融合制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA筛选出26株阳性淋巴杂交瘤细胞,进一步经克隆化培养筛选出46株单克隆细胞株。通过Western blot(WB)筛选获得2株能稳定分泌特异性抗PPRV C蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,WB、间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay, IFA)鉴定显示,制备的单克隆抗体具有较好的灵敏性和病毒反应性。研究结果为进一步阐明C蛋白在PPRV生命周期中的作用奠定了基础,也为小反刍兽疫(PPR)诊断提供了有效的诊断试剂。
关键词
小反刍兽疫病毒
非结构蛋白C
杂交瘤细胞技术
单克隆抗体
Keywords
Peste des petits ruminants virus
non-structural protein C
hybridoma cell fusion technique
monoclonal antibody
分类号
S855 [农业科学—临床兽医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
小反刍兽疫病毒非结构蛋白C单克隆抗体的制备与鉴定
李菊
毕冬琳
杨晓莉
杨东亮
张潇文
刘方程
李琼毅
柏家林
《浙江农业学报》
CSCD
北大核心
2024
0
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