狂犬病病毒实验室检测方法研究进展 被引量：2

1

作者 杨妍梅 冯若飞 马忠仁 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第8期102-106,共5页

狂犬病病毒(RV)属于人畜共患的急性直接接触性传染病病毒,近年来又有感染上升的趋势。因此,急需一种快速、准确、灵敏的检测RV的实验室诊断方法。现就酶联免疫吸附试验(ELISA)、荧光抗体方法(FAT)、快速荧光抑制灶技术(RFFIT)、反转录-... 狂犬病病毒(RV)属于人畜共患的急性直接接触性传染病病毒,近年来又有感染上升的趋势。因此,急需一种快速、准确、灵敏的检测RV的实验室诊断方法。现就酶联免疫吸附试验(ELISA)、荧光抗体方法(FAT)、快速荧光抑制灶技术(RFFIT)、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、荧光定量RT-PCR,环介导等温扩增技术(LAMP)和基因芯片技术等狂犬病病毒实验室诊断方法做一综述,为更好地开展实验室诊断提供参考。 展开更多

关键词 狂犬病病毒 检测方法 研究进展

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天祝白牦牛肾组织成纤维细胞系的建立与生物学特性研究 被引量：9

2

作者 冯若飞 马忠仁 +4 位作者 关伟军 李明生 乔自林 冯玉萍 周雪雁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期726-732,共7页

采集天祝白牦牛胚胎肾组织,用胰蛋白酶热消化法制备原代细胞,通过差速消化和差速贴壁法继代培养和细胞纯化,扩增至F3代后冷冻保存,并对复苏细胞的形态、活力、生长曲线、荧光蛋白质粒转染表达、核型以及乳酸脱氢酶同工酶等生物学特性进... 采集天祝白牦牛胚胎肾组织,用胰蛋白酶热消化法制备原代细胞,通过差速消化和差速贴壁法继代培养和细胞纯化,扩增至F3代后冷冻保存,并对复苏细胞的形态、活力、生长曲线、荧光蛋白质粒转染表达、核型以及乳酸脱氢酶同工酶等生物学特性进行了分析。结果显示,原代和传代细胞生长形态良好,群体倍增时间为27.2 h;染色体2n=60;二倍体为74%,占主体;乳酸脱氢酶同工酶电泳图谱有明显特征,LDH5浓度较高,活性较强;外源质粒在该细胞中能进行复制和表达;细菌、真菌、病毒、支原体检测呈阴性。表明本研究已成功建立天祝白牦牛肾组织成纤维细胞系,该细胞系的建立,使天祝白牦牛这一国家重要种质资源在细胞水平上得以保存,也为基因组文库和体细胞克隆等研究提供了理想的生物材料。 展开更多

关键词 天祝白牦牛 肾组织 成纤维细胞系 生物学特性

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MDCK细胞成瘤相关蛋白的筛选及验证

3

作者 张凡 胡嘉琦 +5 位作者 敖慧娟 李睿 蓝雯琳 谈笑 乔自林 杨琨 《江苏农业学报》 北大核心 2025年第10期2009-2017,共9页

为明确Madin-Darby犬肾(MDCK)细胞成瘤机制,本研究基于数据非依赖性采集质谱(DIA-MS)技术,以非成瘤性MDCK细胞与高成瘤性MDCK细胞为供试材料,分析不同成瘤性MDCK细胞的蛋白质表达差异。结果表明,非成瘤性MDCK细胞与高成瘤性MDCK细胞中... 为明确Madin-Darby犬肾(MDCK)细胞成瘤机制,本研究基于数据非依赖性采集质谱(DIA-MS)技术,以非成瘤性MDCK细胞与高成瘤性MDCK细胞为供试材料,分析不同成瘤性MDCK细胞的蛋白质表达差异。结果表明,非成瘤性MDCK细胞与高成瘤性MDCK细胞中共鉴定到11359个蛋白质,其中差异倍数(FC)>1.5且校正P<0.05的差异蛋白质数量为163个。非成瘤性MDCK细胞中93个差异蛋白质上调表达,70个差异蛋白质下调表达。差异蛋白质主要参与蛋白质磷酸化、胞内信号转导及肽酶活性负调控,且功能富集于细胞外空间。2个成瘤关键蛋白质双皮质素样激酶1(DCLK1)和组织因子通路抑制因子2(TFPI2)的实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹(Western blot)结果显示,非成瘤性MDCK细胞中,DCLK1基因相对表达水平极显著低于成瘤性MDCK细胞,TFPI2基因相对表达水平极显著高于成瘤性MDCK细胞。本研究结果为MDCK细胞成瘤机制及肿瘤标志物筛选提供了潜在分子调控靶点。 展开更多

关键词 MDCK细胞 数据非依赖性采集质谱(DIA-MS) 成瘤性 双皮质素样激酶1(DCLK1) 组织因子途径抑制剂2(TFPI2)

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岷县黑裘皮羊肾组织成纤维细胞系的建立及其生物学特性研究

4

作者 冯若飞 马忠仁 +3 位作者 乔自林 李明生 冯玉萍 关伟军 《中国草食动物》 2011年第1期5-9,共5页

采集岷县黑裘皮羊肾组织,用胰蛋白酶热消化法制备原代细胞,通过差速消化和差速贴壁法进行继代培养和细胞纯化,并对复苏细胞的形态、活力、生长曲线、荧光蛋白质粒转染表达、核型以及乳酸脱氢酶同工酶等生物学特性进行了分析。结果显示:... 采集岷县黑裘皮羊肾组织,用胰蛋白酶热消化法制备原代细胞,通过差速消化和差速贴壁法进行继代培养和细胞纯化,并对复苏细胞的形态、活力、生长曲线、荧光蛋白质粒转染表达、核型以及乳酸脱氢酶同工酶等生物学特性进行了分析。结果显示:原代和传代细胞生长形态均好,群体倍增时间为28.3 h;染色体2 n=54,二倍体占主体(84%)乳酸脱氢酶同工酶电泳图谱有明显特征,未见LDH4、LDH5谱带,与其它羊有明显区别;外源性荧光蛋白转染质粒在该细胞中能进行复制和表达;细菌、真菌、病毒、支原体检测呈阴性。表明该研究已成功建立岷县黑裘皮羊肾组织成纤维细胞系,为在细胞水平上保存岷县黑裘皮羊种质资源以及进行相关研究提供了理想的生物材料。 展开更多

关键词 岷县黑裘皮羊 肾组织 成纤维细胞系 生物学特性

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日本脑炎诊断技术研究进展 被引量：1

5

作者 裴国顺 冯若飞 侯兰新 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第9期85-89,共5页

日本脑炎是一种严重危害养猪业以及人类健康的虫媒病,每年造成大量的经济损失。为了更好地控制与预防该病,及时的诊断尤为重要。用于日本脑炎诊断的技术主要有病毒分离与鉴定、血清学诊断技术及分子生物学技术等。由于每种诊断技术都有... 日本脑炎是一种严重危害养猪业以及人类健康的虫媒病,每年造成大量的经济损失。为了更好地控制与预防该病,及时的诊断尤为重要。用于日本脑炎诊断的技术主要有病毒分离与鉴定、血清学诊断技术及分子生物学技术等。由于每种诊断技术都有其优势和不足之处,所以应根据具体情况选择合适的诊断方法。论文就各种诊断技术的原理、特点进行概述,并对日本脑炎诊断技术的发展趋势进行展望。 展开更多

关键词 日本脑炎 免疫荧光 诊断 聚合酶链反应 酶联免疫吸附试验

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电子鼻和电子舌信号联用方法分析及其在食品品质检测中的应用 被引量：14

6

作者 田晓静 王俊 +3 位作者 裘姗姗 杨具田 马忠仁 陆会宁 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期386-389,共4页

电子鼻和电子舌模拟哺乳动物的嗅觉和味觉实现了食品感官品质的客观评定,但味觉和嗅觉信息并不是独立存在的,而是相互作用影响形成综合信息。本文主要综述了电子鼻和电子舌信息联用常用方法直接合并、分别提取特征值后合并和分别建模后... 电子鼻和电子舌模拟哺乳动物的嗅觉和味觉实现了食品感官品质的客观评定,但味觉和嗅觉信息并不是独立存在的,而是相互作用影响形成综合信息。本文主要综述了电子鼻和电子舌信息联用常用方法直接合并、分别提取特征值后合并和分别建模后重组有效信息的方法,为综合的电子感官信息客观反映食品的感官品质提供有效的工具。 展开更多

关键词 电子鼻 电子舌 信号联用 应用

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我国不同地区猪脑心肌炎和细小病毒流行病学调查 被引量：4

7

作者 王丹 冯若飞 +5 位作者 马忠仁 谢晶莹 张海霞 杨妍梅 李向茸 冯玉萍 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2014年第9期43-45,共3页

猪脑心肌炎病毒（Encephalomyocarditis virus,EMCV）属于小RNA病毒科、心病毒属成员,能引起猪以脑炎、心肌炎或心肌周围炎为主要特征的急性传染病[1-3]。EMCV感染的妊娠母猪则以流产、死胎、弱胎、木乃伊胎等繁殖障碍为主要特征,其他... 猪脑心肌炎病毒（Encephalomyocarditis virus,EMCV）属于小RNA病毒科、心病毒属成员,能引起猪以脑炎、心肌炎或心肌周围炎为主要特征的急性传染病[1-3]。EMCV感染的妊娠母猪则以流产、死胎、弱胎、木乃伊胎等繁殖障碍为主要特征,其他猪多呈隐性感染状态[4-6]。目前,多个国家和地区不时的报道了该病发生和流行[6-8]。猪细小病毒（Porcineparvovirus PPV）是引起猪繁殖障碍的一个非常重要的病原体之一。 展开更多

关键词 猪脑心肌炎 猪繁殖障碍 猪细小病毒 脑心肌炎病毒 流行病学调查 急性传染 妊娠母猪 病毒科 抗体检测 病毒属

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淀粉微载体的制备及对CHO-K1细胞培养的初步应用 被引量：4

8

作者 张磊 李明生 +4 位作者 郑荣 张健 靳冬武 马忠仁 冯玉萍 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期454-460,516,共8页

以普通市售马铃薯淀粉为原材料,在常温下利用W/O乳化方法制备了交联淀粉微球,并以二乙胺基乙基修饰了微球的表面电荷。同时研究了制备淀粉微球的制备工艺和改性工艺,成功制备了适合细胞培养用的淀粉微载体。利用扫描电镜(SEM)、红外(FT-... 以普通市售马铃薯淀粉为原材料,在常温下利用W/O乳化方法制备了交联淀粉微球,并以二乙胺基乙基修饰了微球的表面电荷。同时研究了制备淀粉微球的制备工艺和改性工艺,成功制备了适合细胞培养用的淀粉微载体。利用扫描电镜(SEM)、红外(FT-IR)、X射线衍射仪(XRD)对微球进行了表征。结果表明,最佳制备条件为:淀粉溶液浓度为7%,搅拌速度为500 rpm,交联剂用量为8%,水油相体积比1∶6;微球表面修饰最佳条件为:加入微球质量2倍体积的3.5 mol/L NaOH溶液和2.5 mol/L DEAE-HCl溶液,60℃密闭反应4 h。对比Cytodex-1微载体,培养CHO-K1细胞至144 h时,淀粉微载体表面细胞密度达到1.8×10~6cells/mL,且两者培养效果相似,表明了自制淀粉微载体是一种潜在的贴壁细胞培养用高分子材料。 展开更多

关键词 马铃薯淀粉 淀粉微球 二乙氨基乙基 CHO-K1细胞 细胞培养

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再生丝素蛋白膜的性能及其细胞培养特性研究 被引量：4

9

作者 龙仕和 李明生 +7 位作者 靳冬武 崔梦楠 马素娟 徐水林 柏家林 李倬 冯玉萍 马忠仁 《材料导报》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第6期65-70,共6页

研究了温度梯度法所制再生丝素蛋白膜的溶失率、抗酶能力和动物细胞体外培养特性。以紫外分光光度法检测丝素蛋白膜在水中的溶失率;再用质量体积浓度0.25%和0.5%的胰蛋白酶液分别消化丝素蛋白膜2d,以膜的结构和质量是否发生明显变化为指... 研究了温度梯度法所制再生丝素蛋白膜的溶失率、抗酶能力和动物细胞体外培养特性。以紫外分光光度法检测丝素蛋白膜在水中的溶失率;再用质量体积浓度0.25%和0.5%的胰蛋白酶液分别消化丝素蛋白膜2d,以膜的结构和质量是否发生明显变化为指标,判断膜抗胰蛋白酶的能力;最后在丝素蛋白膜上培养BHK-21细胞和Vero细胞,再用0.25%和0.5%胰蛋白酶液分别消化膜上细胞并进行传代培养,观察细胞形态和生长状况。实验结果表明,温度梯度法直接所制丝素蛋白膜48h内的溶失率低于0.2%,再经25%甲醇处理后溶失率为0,2d内膜仍保持完整结构且质量无明显变化;BHK-21细胞和Vero细胞在丝素蛋白膜上生长良好,形态正常;0.25%和0.5%的胰蛋白酶液均可在4min内将膜上两种细胞消化脱落且细胞连续传代培养5代,细胞形态正常。 展开更多

关键词 再生丝素蛋白膜 溶失率 消化 细胞培养基质

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胰蛋白酶激活条件优化及其在细胞培养中的应用 被引量：3

10

作者 李明生 靳冬武 +5 位作者 张健 冯玉萍 郑荣 张磊 李倬 马忠仁 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1304-1310,共7页

基于猪胰脏提取胰蛋白酶,以酶活力为衡量指标,在单因素试验的基础上通过正交试验探讨了胰蛋白酶原的激活条件,并通过离子交换层析纯化胰蛋白酶,最后探讨胰蛋白酶对BHK-21和Vero两种贴壁依赖性细胞的消化效果。结果表明,胰蛋白酶原最佳... 基于猪胰脏提取胰蛋白酶,以酶活力为衡量指标,在单因素试验的基础上通过正交试验探讨了胰蛋白酶原的激活条件,并通过离子交换层析纯化胰蛋白酶,最后探讨胰蛋白酶对BHK-21和Vero两种贴壁依赖性细胞的消化效果。结果表明,胰蛋白酶原最佳的激活条件为:激活剂浓度0.2 mol/L,pH 8.5,16℃下激活1.5 h,酶活力达到2 953.68 U/mg。通过DEAE sepharose FF纯化后其酶活力达到3 980.42 U/mg,纯化倍数达到2.26;细胞消化结果表明,用其消化BHK-21细胞和Vero细胞并连续10代,平均消化时间和细胞增殖浓度与Hyclone和Gibco产品没有明显的差异(p>0.05),每代细胞形态良好,生长正常。该工艺简单,激活耗时短,易于产业化,为胰蛋白酶的国产化和进一步研究奠定理论依据。 展开更多

关键词 胰蛋白酶 激活条件 酶活力 细胞培养

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甘肃省猪日本脑炎血清学调查 被引量：4

11

作者 冯若飞 马忠仁 +5 位作者 乔自林 李明生 李佳 冯玉萍 龙玲 林学仕 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第2期118-121,共4页

为了解甘肃省猪日本脑炎病毒(JEV)的感染情况,采用间接ELISA法对甘肃省部分地区的1258份猪血清样本进行了猪日本脑炎抗体检测。结果显示,抗体总阳性率为73.3%,其中3月龄以下抗体阳性率为63.7%,3月龄以上为78.1%,且抗体滴度高于3月龄以... 为了解甘肃省猪日本脑炎病毒(JEV)的感染情况,采用间接ELISA法对甘肃省部分地区的1258份猪血清样本进行了猪日本脑炎抗体检测。结果显示,抗体总阳性率为73.3%,其中3月龄以下抗体阳性率为63.7%,3月龄以上为78.1%,且抗体滴度高于3月龄以下猪群,通过t检验,二者阳性率存在显著性差异。不同地区中,陇南、天水为最高,甘南最低。甘肃省猪群存在JEV感染,且感染率较高。 展开更多

关键词 酶联免疫吸附试验 日本脑炎病毒 猪

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盖他病毒研究进展 被引量：7

12

作者 韦鹏建 冯若飞 马忠仁 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第8期97-100,共4页

盖他病毒是披盖病毒科甲病毒属成员的一种单链线形RNA病毒,广泛分布于亚洲及澳大利亚北部的太平洋沿岸地区,其原型株为MM2021。病毒对去氧胆酸盐和氯仿等一些有机溶剂及酸敏感,主要侵害马和猪,易感的细胞系有Vero、BHK-21、C6/36、MA-10... 盖他病毒是披盖病毒科甲病毒属成员的一种单链线形RNA病毒,广泛分布于亚洲及澳大利亚北部的太平洋沿岸地区,其原型株为MM2021。病毒对去氧胆酸盐和氯仿等一些有机溶剂及酸敏感,主要侵害马和猪,易感的细胞系有Vero、BHK-21、C6/36、MA-104、Hmlu和RK-13等。目前,关于盖他病毒的研究还较少,很多机理尚未清楚,其危害程度亦不可预知。因此,论文就盖他病毒的特性做了一些简要总结概括,为建立和完善人畜共患病公共卫生体系和早期预警机制提供一些知识贮备。 展开更多

关键词 盖他病毒 人畜共患病 蚊虫媒介

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人血白蛋白的原核表达及应用 被引量：2

13

作者 李向茸 冯若飞 +4 位作者 谢晶莹 田伟 杨妍梅 王丹 马忠仁 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期130-135,共6页

旨在构建人血白蛋白(HSA)基因的原核表达载体pGEX-4T-1-rHSA,诱导表达后纯化重组HSA蛋白,制备多克隆抗体并对其进行鉴定。根据GenBank发表的HSA(NM_000477.5)的核苷酸序列设计合成1对特异性引物,以人胚肺二倍体细胞的总RNA为模板,利用RT... 旨在构建人血白蛋白(HSA)基因的原核表达载体pGEX-4T-1-rHSA,诱导表达后纯化重组HSA蛋白,制备多克隆抗体并对其进行鉴定。根据GenBank发表的HSA(NM_000477.5)的核苷酸序列设计合成1对特异性引物,以人胚肺二倍体细胞的总RNA为模板,利用RT-PCR扩增HSA基因,将其克隆至pGEX-4T-1载体,构建重组原核表达质粒pGEX-4T-1-rHSA,经PCR、酶切及测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21(DE3),进行IPTG诱导表达,表达产物经变性、复性、亲和层析纯化后作为免疫原制备多克隆抗体,应用间接ELISA和Western-blot方法对所得抗体进行检测。结果表明,重组蛋白主要以包涵体的形式存在,分子质量为92 kD;重组蛋白具有良好的反应原性和免疫原性;应用其制备的抗血清效价达到1∶100 000;纯化的多克隆抗体与血源人血清白蛋白和重组人血白蛋白均能产生特异性结合,具有良好的生物学活性。 展开更多

关键词 人血清白蛋白 原核表达 包涵体 多克隆抗体

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β-丙内酯对脑心肌炎病毒灭活效果的试验 被引量：3

14

作者 冯若飞 樊得英 +5 位作者 韦鹏建 李向茸 乔自林 李明生 沈心亮 马忠仁 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2011年第8期19-21,共3页

通过研究β-丙内酯(BPL)对脑心肌炎病毒(EMCV)灭活效果以及优化灭活条件,为制备脑心肌炎诊断试剂和疫苗提供参考依据。用终浓度分别为1∶1 000、1∶2 000、1∶4 000等的β-丙内酯灭活103TCID50滴度猪脑心肌炎病毒,采用4℃灭活4 h、8 h、... 通过研究β-丙内酯(BPL)对脑心肌炎病毒(EMCV)灭活效果以及优化灭活条件,为制备脑心肌炎诊断试剂和疫苗提供参考依据。用终浓度分别为1∶1 000、1∶2 000、1∶4 000等的β-丙内酯灭活103TCID50滴度猪脑心肌炎病毒,采用4℃灭活4 h、8 h、12 h后37℃2 h,并将灭活后的病毒接种敏感细胞VREO上观察细胞病变(CPE)情况,选择未出现CPE的细胞孔盲传3代后,采用ELISA和PCR的方法观察灭活效果。结果显示:BPL浓度和反应时间与灭活效果存在明显的线性关系,但BPL浓度越高抗原性下降幅度越大,RT-PCR未有扩增,说明BPL可以用于EMCV的灭活,且根据试验结果优选灭活条件为BPL浓度为1:2 000,4℃灭活8h为最佳。结论表明:BPL完全可以用来灭活EMCV,为今后开发灭活疫苗或诊断试剂的生物安全性提供了保证。 展开更多

关键词 脑心肌炎病毒 灭活 效果

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膜联蛋白A2在病毒感染中的作用研究进展 被引量：5

15

作者 李琼毅 赵克学 +1 位作者 梁浩勤 冯若飞 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期79-81,共3页

膜联蛋白A2(Annexin A2,ANXA2)是一类由Ca 2+调控的具有磷脂结合特性的膜联蛋白,与多种细胞生理过程和临床疾病相关;越来越多的研究证实ANXA2在多种病毒复制周期的不同阶段发挥着重要作用。对ANXA2在病毒感染过程中的作用进行综述,为阐... 膜联蛋白A2(Annexin A2,ANXA2)是一类由Ca 2+调控的具有磷脂结合特性的膜联蛋白,与多种细胞生理过程和临床疾病相关;越来越多的研究证实ANXA2在多种病毒复制周期的不同阶段发挥着重要作用。对ANXA2在病毒感染过程中的作用进行综述,为阐明ANXA2与病毒感染之间的相互作用提供参考。 展开更多

关键词 膜联蛋白A2(ANXA2) 人乳头瘤病毒 人免疫缺陷病毒-1 丙型肝炎病毒

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脑心肌炎病毒VP1蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及验证 被引量：2

16

作者 谢晶莹 冯若飞 +4 位作者 徐雷 张海霞 李向茸 侯兰新 马忠仁 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期198-202,共5页

为筛选与脑心肌炎病毒VP1蛋白相互作用的靶细胞cDNA文库蛋白,构建VP1蛋白的诱饵载体pDHB1-VP1。扩增EMCV的VP1基因并克隆至pMD18-T载体中,经测序验证正确后定向克隆至酵母双杂交诱饵载体pDHB1。将重组pDHB1-VP1载体进行酶切验证和测序分... 为筛选与脑心肌炎病毒VP1蛋白相互作用的靶细胞cDNA文库蛋白,构建VP1蛋白的诱饵载体pDHB1-VP1。扩增EMCV的VP1基因并克隆至pMD18-T载体中,经测序验证正确后定向克隆至酵母双杂交诱饵载体pDHB1。将重组pDHB1-VP1载体进行酶切验证和测序分析,并转化酵母报告菌株NMY51,检测其在酵母细胞中有无表达和自激活作用。结果表明,构建的p DHB1-VP1基因可以在酵母细胞中正确表达,产物大小约66 kD,而且可以与兔抗EMCV血清发生特异性结合,有较好免疫原性。成功构建了诱饵载体pDHB1-VP1,可以在酵母细胞中表达且其对报告基因无自激活作用,可以应用于酵母双杂交筛选试验中。 展开更多

关键词 脑心肌炎病毒 VP1蛋白 酵母双杂交 诱饵蛋白

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与脑心肌炎病毒衣壳蛋白相互作用宿主蛋白的筛选 被引量：1

17

作者 谢晶莹 邓盈盈 +4 位作者 韩玉梅 张海霞 李向茸 李琼毅 冯若飞 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期20-24,共5页

应用Dual hunter酵母双杂交系统,以脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)衣壳蛋白VP1、VP2和VP3为诱饵,通过对BHK-21细胞cDNA文库的筛选,共得到24个互作蛋白。经过生物信息学分析,发现其功能包括蛋白结合、催化活性、转运活... 应用Dual hunter酵母双杂交系统,以脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)衣壳蛋白VP1、VP2和VP3为诱饵,通过对BHK-21细胞cDNA文库的筛选,共得到24个互作蛋白。经过生物信息学分析,发现其功能包括蛋白结合、催化活性、转运活性和结构分子活性;参与生物调节、细胞形成、细胞代谢、发育过程、细胞定位和免疫反应等多个生理过程,并参考文献资料分析这些蛋白在病毒复制中可能起到的作用,为研究EMCV感染及其致病机理提供参考。 展开更多

关键词 脑心肌炎病毒 衣壳蛋白 宿主蛋白 筛选

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细胞程序性死亡通路的研究进展 被引量：5

18

作者 敏云馨 马忠仁 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期20-23,共4页

细胞程序性死亡(programmed cell death,PCD)一直被看做是细胞凋亡(apoptosis)。随着细胞生物学研究的深入,新的细胞死亡途径逐渐被揭示出来,如胀亡、自噬、副凋亡等。这些通路有些是caspase依赖的,有些不依赖于caspase途径。在细胞程... 细胞程序性死亡(programmed cell death,PCD)一直被看做是细胞凋亡(apoptosis)。随着细胞生物学研究的深入,新的细胞死亡途径逐渐被揭示出来,如胀亡、自噬、副凋亡等。这些通路有些是caspase依赖的,有些不依赖于caspase途径。在细胞程序性死亡过程中,各种通路不是单独起作用的,而是相互交联的,有彼此重叠的机制出现。目前,Clarke形态学分类法是得到大多数学者认可的细胞程序性死亡的分类方式。按照该分类法,可将PCD分为3大类,即:Ⅰ型细胞程序性死亡、Ⅱ型细胞程序性死亡和Ⅲ型细胞程序性死亡。 展开更多

关键词 Ⅰ型细胞程序性死亡 Ⅱ型细胞程序性死亡 Ⅲ型细胞程序性死亡

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高压酶解卵清蛋白的工艺优化及其在BHK-21细胞培养中的初步应用 被引量：1

19

作者 张健 李明生 +4 位作者 靳冬武 张磊 郑荣 马忠仁 冯玉萍 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1443-1448,1453,共7页

采用高压技术水解卵清蛋白,以水解度为指标,对6种酶的水解效果进行比较,筛选出最佳水解用酶;在单因素实验的基础上,采用正交实验的方法对高压酶解卵清蛋白的工艺进行优化,并对酶解产物在BHK-21细胞培养中的应用进行了初步探讨。结果表... 采用高压技术水解卵清蛋白,以水解度为指标,对6种酶的水解效果进行比较,筛选出最佳水解用酶;在单因素实验的基础上,采用正交实验的方法对高压酶解卵清蛋白的工艺进行优化,并对酶解产物在BHK-21细胞培养中的应用进行了初步探讨。结果表明:6种酶中胰酶的水解效果最好,水解最佳工艺为:压力120 MPa、温度50℃、p H值7.0和酶/底物(E/S)=1∶2.5(质量比),水解度达到45.13%;用酶解产物培养BHK-21细胞,细胞生长形态良好,在培养168 h后,试验组细胞最大密度达到6.69×105cells/m L,是对照组的1.56倍,细胞数量增大了33.45倍,说明卵清蛋白酶解产物有明显的促细胞生长效果,为其在细胞培养中的应用提供了理论依据。 展开更多

关键词 高压 酶解 卵清蛋白 细胞培养

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胰蛋白酶的制备及其在细胞培养中的应用研究 被引量：1

20

作者 李明生 李倬 +5 位作者 乔自林 冯若飞 马忠仁 冯玉萍 侯兰新 张福梅 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 2009年第6期1011-1014,共4页

无菌采集健康牛胰脏,用0.125mol/L的硫酸对牛胰脏进行预处理和保存,并对原材料的细菌、真菌、内毒素、支原体、噬菌体和一些病毒外源因子进行检测,筛选合格原料。通过盐析、CM-Sepharose-FF层析、超滤等方法对胰蛋白酶进行提取和纯化。... 无菌采集健康牛胰脏,用0.125mol/L的硫酸对牛胰脏进行预处理和保存,并对原材料的细菌、真菌、内毒素、支原体、噬菌体和一些病毒外源因子进行检测,筛选合格原料。通过盐析、CM-Sepharose-FF层析、超滤等方法对胰蛋白酶进行提取和纯化。结果表明:经筛选原料提纯的胰蛋白酶通过细胞传代实验240h后,细胞生长良好,形态正常,而未经筛选直接提取的胰蛋白酶通过细胞传代实验144h后,细胞出现拉丝、病变等异常情况。 展开更多

关键词 胰蛋白酶 原料 控制

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