狂犬病病毒实验室检测方法研究进展 被引量：2

1

作者 杨妍梅 冯若飞 马忠仁 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第8期102-106,共5页

狂犬病病毒(RV)属于人畜共患的急性直接接触性传染病病毒,近年来又有感染上升的趋势。因此,急需一种快速、准确、灵敏的检测RV的实验室诊断方法。现就酶联免疫吸附试验(ELISA)、荧光抗体方法(FAT)、快速荧光抑制灶技术(RFFIT)、反转录-... 狂犬病病毒(RV)属于人畜共患的急性直接接触性传染病病毒,近年来又有感染上升的趋势。因此,急需一种快速、准确、灵敏的检测RV的实验室诊断方法。现就酶联免疫吸附试验(ELISA)、荧光抗体方法(FAT)、快速荧光抑制灶技术(RFFIT)、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、荧光定量RT-PCR,环介导等温扩增技术(LAMP)和基因芯片技术等狂犬病病毒实验室诊断方法做一综述,为更好地开展实验室诊断提供参考。 展开更多

关键词 狂犬病病毒 检测方法 研究进展

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天祝白牦牛肾组织成纤维细胞系的建立与生物学特性研究 被引量：9

2

作者 冯若飞 马忠仁 +4 位作者 关伟军 李明生 乔自林 冯玉萍 周雪雁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期726-732,共7页

采集天祝白牦牛胚胎肾组织,用胰蛋白酶热消化法制备原代细胞,通过差速消化和差速贴壁法继代培养和细胞纯化,扩增至F3代后冷冻保存,并对复苏细胞的形态、活力、生长曲线、荧光蛋白质粒转染表达、核型以及乳酸脱氢酶同工酶等生物学特性进... 采集天祝白牦牛胚胎肾组织,用胰蛋白酶热消化法制备原代细胞,通过差速消化和差速贴壁法继代培养和细胞纯化,扩增至F3代后冷冻保存,并对复苏细胞的形态、活力、生长曲线、荧光蛋白质粒转染表达、核型以及乳酸脱氢酶同工酶等生物学特性进行了分析。结果显示,原代和传代细胞生长形态良好,群体倍增时间为27.2 h;染色体2n=60;二倍体为74%,占主体;乳酸脱氢酶同工酶电泳图谱有明显特征,LDH5浓度较高,活性较强;外源质粒在该细胞中能进行复制和表达;细菌、真菌、病毒、支原体检测呈阴性。表明本研究已成功建立天祝白牦牛肾组织成纤维细胞系,该细胞系的建立,使天祝白牦牛这一国家重要种质资源在细胞水平上得以保存,也为基因组文库和体细胞克隆等研究提供了理想的生物材料。 展开更多

关键词 天祝白牦牛 肾组织 成纤维细胞系 生物学特性

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岷县黑裘皮羊肾组织成纤维细胞系的建立及其生物学特性研究

3

作者 冯若飞 马忠仁 +3 位作者 乔自林 李明生 冯玉萍 关伟军 《中国草食动物》 2011年第1期5-9,共5页

采集岷县黑裘皮羊肾组织,用胰蛋白酶热消化法制备原代细胞,通过差速消化和差速贴壁法进行继代培养和细胞纯化,并对复苏细胞的形态、活力、生长曲线、荧光蛋白质粒转染表达、核型以及乳酸脱氢酶同工酶等生物学特性进行了分析。结果显示:... 采集岷县黑裘皮羊肾组织,用胰蛋白酶热消化法制备原代细胞,通过差速消化和差速贴壁法进行继代培养和细胞纯化,并对复苏细胞的形态、活力、生长曲线、荧光蛋白质粒转染表达、核型以及乳酸脱氢酶同工酶等生物学特性进行了分析。结果显示:原代和传代细胞生长形态均好,群体倍增时间为28.3 h;染色体2 n=54,二倍体占主体(84%)乳酸脱氢酶同工酶电泳图谱有明显特征,未见LDH4、LDH5谱带,与其它羊有明显区别;外源性荧光蛋白转染质粒在该细胞中能进行复制和表达;细菌、真菌、病毒、支原体检测呈阴性。表明该研究已成功建立岷县黑裘皮羊肾组织成纤维细胞系,为在细胞水平上保存岷县黑裘皮羊种质资源以及进行相关研究提供了理想的生物材料。 展开更多

关键词 岷县黑裘皮羊 肾组织 成纤维细胞系 生物学特性

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日本脑炎诊断技术研究进展 被引量：1

4

作者 裴国顺 冯若飞 侯兰新 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第9期85-89,共5页

日本脑炎是一种严重危害养猪业以及人类健康的虫媒病,每年造成大量的经济损失。为了更好地控制与预防该病,及时的诊断尤为重要。用于日本脑炎诊断的技术主要有病毒分离与鉴定、血清学诊断技术及分子生物学技术等。由于每种诊断技术都有... 日本脑炎是一种严重危害养猪业以及人类健康的虫媒病,每年造成大量的经济损失。为了更好地控制与预防该病,及时的诊断尤为重要。用于日本脑炎诊断的技术主要有病毒分离与鉴定、血清学诊断技术及分子生物学技术等。由于每种诊断技术都有其优势和不足之处,所以应根据具体情况选择合适的诊断方法。论文就各种诊断技术的原理、特点进行概述,并对日本脑炎诊断技术的发展趋势进行展望。 展开更多

关键词 日本脑炎 免疫荧光 诊断 聚合酶链反应 酶联免疫吸附试验

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电子鼻和电子舌信号联用方法分析及其在食品品质检测中的应用 被引量：14

5

作者 田晓静 王俊 +3 位作者 裘姗姗 杨具田 马忠仁 陆会宁 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期386-389,共4页

电子鼻和电子舌模拟哺乳动物的嗅觉和味觉实现了食品感官品质的客观评定,但味觉和嗅觉信息并不是独立存在的,而是相互作用影响形成综合信息。本文主要综述了电子鼻和电子舌信息联用常用方法直接合并、分别提取特征值后合并和分别建模后... 电子鼻和电子舌模拟哺乳动物的嗅觉和味觉实现了食品感官品质的客观评定,但味觉和嗅觉信息并不是独立存在的,而是相互作用影响形成综合信息。本文主要综述了电子鼻和电子舌信息联用常用方法直接合并、分别提取特征值后合并和分别建模后重组有效信息的方法,为综合的电子感官信息客观反映食品的感官品质提供有效的工具。 展开更多

关键词 电子鼻 电子舌 信号联用 应用

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再生丝素蛋白膜的性能及其细胞培养特性研究 被引量：4

6

作者 龙仕和 李明生 +7 位作者 靳冬武 崔梦楠 马素娟 徐水林 柏家林 李倬 冯玉萍 马忠仁 《材料导报》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第6期65-70,共6页

研究了温度梯度法所制再生丝素蛋白膜的溶失率、抗酶能力和动物细胞体外培养特性。以紫外分光光度法检测丝素蛋白膜在水中的溶失率;再用质量体积浓度0.25%和0.5%的胰蛋白酶液分别消化丝素蛋白膜2d,以膜的结构和质量是否发生明显变化为指... 研究了温度梯度法所制再生丝素蛋白膜的溶失率、抗酶能力和动物细胞体外培养特性。以紫外分光光度法检测丝素蛋白膜在水中的溶失率;再用质量体积浓度0.25%和0.5%的胰蛋白酶液分别消化丝素蛋白膜2d,以膜的结构和质量是否发生明显变化为指标,判断膜抗胰蛋白酶的能力;最后在丝素蛋白膜上培养BHK-21细胞和Vero细胞,再用0.25%和0.5%胰蛋白酶液分别消化膜上细胞并进行传代培养,观察细胞形态和生长状况。实验结果表明,温度梯度法直接所制丝素蛋白膜48h内的溶失率低于0.2%,再经25%甲醇处理后溶失率为0,2d内膜仍保持完整结构且质量无明显变化;BHK-21细胞和Vero细胞在丝素蛋白膜上生长良好,形态正常;0.25%和0.5%的胰蛋白酶液均可在4min内将膜上两种细胞消化脱落且细胞连续传代培养5代,细胞形态正常。 展开更多

关键词 再生丝素蛋白膜 溶失率 消化 细胞培养基质

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甘肃省猪日本脑炎血清学调查 被引量：4

7

作者 冯若飞 马忠仁 +5 位作者 乔自林 李明生 李佳 冯玉萍 龙玲 林学仕 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第2期118-121,共4页

为了解甘肃省猪日本脑炎病毒(JEV)的感染情况,采用间接ELISA法对甘肃省部分地区的1258份猪血清样本进行了猪日本脑炎抗体检测。结果显示,抗体总阳性率为73.3%,其中3月龄以下抗体阳性率为63.7%,3月龄以上为78.1%,且抗体滴度高于3月龄以... 为了解甘肃省猪日本脑炎病毒(JEV)的感染情况,采用间接ELISA法对甘肃省部分地区的1258份猪血清样本进行了猪日本脑炎抗体检测。结果显示,抗体总阳性率为73.3%,其中3月龄以下抗体阳性率为63.7%,3月龄以上为78.1%,且抗体滴度高于3月龄以下猪群,通过t检验,二者阳性率存在显著性差异。不同地区中,陇南、天水为最高,甘南最低。甘肃省猪群存在JEV感染,且感染率较高。 展开更多

关键词 酶联免疫吸附试验 日本脑炎病毒 猪

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盖他病毒研究进展 被引量：7

8

作者 韦鹏建 冯若飞 马忠仁 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第8期97-100,共4页

盖他病毒是披盖病毒科甲病毒属成员的一种单链线形RNA病毒,广泛分布于亚洲及澳大利亚北部的太平洋沿岸地区,其原型株为MM2021。病毒对去氧胆酸盐和氯仿等一些有机溶剂及酸敏感,主要侵害马和猪,易感的细胞系有Vero、BHK-21、C6/36、MA-10... 盖他病毒是披盖病毒科甲病毒属成员的一种单链线形RNA病毒,广泛分布于亚洲及澳大利亚北部的太平洋沿岸地区,其原型株为MM2021。病毒对去氧胆酸盐和氯仿等一些有机溶剂及酸敏感,主要侵害马和猪,易感的细胞系有Vero、BHK-21、C6/36、MA-104、Hmlu和RK-13等。目前,关于盖他病毒的研究还较少,很多机理尚未清楚,其危害程度亦不可预知。因此,论文就盖他病毒的特性做了一些简要总结概括,为建立和完善人畜共患病公共卫生体系和早期预警机制提供一些知识贮备。 展开更多

关键词 盖他病毒 人畜共患病 蚊虫媒介

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胰蛋白酶激活条件优化及其在细胞培养中的应用 被引量：2

9

作者 李明生 靳冬武 +5 位作者 张健 冯玉萍 郑荣 张磊 李倬 马忠仁 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1304-1310,共7页

基于猪胰脏提取胰蛋白酶,以酶活力为衡量指标,在单因素试验的基础上通过正交试验探讨了胰蛋白酶原的激活条件,并通过离子交换层析纯化胰蛋白酶,最后探讨胰蛋白酶对BHK-21和Vero两种贴壁依赖性细胞的消化效果。结果表明,胰蛋白酶原最佳... 基于猪胰脏提取胰蛋白酶,以酶活力为衡量指标,在单因素试验的基础上通过正交试验探讨了胰蛋白酶原的激活条件,并通过离子交换层析纯化胰蛋白酶,最后探讨胰蛋白酶对BHK-21和Vero两种贴壁依赖性细胞的消化效果。结果表明,胰蛋白酶原最佳的激活条件为:激活剂浓度0.2 mol/L,pH 8.5,16℃下激活1.5 h,酶活力达到2 953.68 U/mg。通过DEAE sepharose FF纯化后其酶活力达到3 980.42 U/mg,纯化倍数达到2.26;细胞消化结果表明,用其消化BHK-21细胞和Vero细胞并连续10代,平均消化时间和细胞增殖浓度与Hyclone和Gibco产品没有明显的差异(p>0.05),每代细胞形态良好,生长正常。该工艺简单,激活耗时短,易于产业化,为胰蛋白酶的国产化和进一步研究奠定理论依据。 展开更多

关键词 胰蛋白酶 激活条件 酶活力 细胞培养

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枸杞子掺伪检测方法的研究进展 被引量：2

10

作者 田晓静 马忠仁 王彩霞 《食品安全质量检测学报》 CAS 2015年第10期3911-3916,共6页

枸杞子以其药用价值和营养品质深受消费者的青睐,广泛应用于食品和保健品行业。但是市场上枸杞子恶意掺杂、掺假现象日益严重,此行为严重影响枸杞子品质、危害消费者健康、损害消费者权益、扰乱市场正常秩序,如何正确鉴别枸杞子真伪成... 枸杞子以其药用价值和营养品质深受消费者的青睐,广泛应用于食品和保健品行业。但是市场上枸杞子恶意掺杂、掺假现象日益严重,此行为严重影响枸杞子品质、危害消费者健康、损害消费者权益、扰乱市场正常秩序,如何正确鉴别枸杞子真伪成为广大消费者普遍关注的问题。本文对枸杞子的主要掺伪现象进行了综述,并介绍了性状鉴别、显微鉴别、化学成分分析鉴别、分子生物学技术鉴别和基于红外光谱、近红外光谱和拉曼光谱法、机器视觉和电子舌等技术的快速检测方法在枸杞子品种和产地掺伪检测中的应用情况,对不同检测方法的优缺点进行对比分析。通过对枸杞子掺伪主要检测方法的比较,为市场监督枸杞子的品质提供理论基础和研究依据。 展开更多

关键词 枸杞子 掺假 产地区分 品种鉴别

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3-(4′-吡啶基)/苯基-6-芳基-1,2,4-三唑并[3,4-b]-1,3,4-噻二唑的合成及电化学性质表征 被引量：1

11

作者 谈春霞 冯若飞 《应用化学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1332-1336,共5页

由化合物3-(4′-吡啶基)/苯基-4氨基-5-巯基-1,2,4-三唑与芳香酸在三氯氧磷作用下脱水、闭环得到3-(4′-吡啶基)/苯基-6-芳基-1,2,4-三唑并[3,4-b]-1,3,4-噻二唑类新型化合物,产率为42%~72%。该化合物具有较大的共轭平面,其结构经红外... 由化合物3-(4′-吡啶基)/苯基-4氨基-5-巯基-1,2,4-三唑与芳香酸在三氯氧磷作用下脱水、闭环得到3-(4′-吡啶基)/苯基-6-芳基-1,2,4-三唑并[3,4-b]-1,3,4-噻二唑类新型化合物,产率为42%~72%。该化合物具有较大的共轭平面,其结构经红外光谱、核磁共振氢谱、元素分析测试技术确证。电化学测试的工作窗口为-1.4~1.0V,负向扫描,循环伏安图中显示标题化合物均有还原峰,还原起始电位为-0.35^-0.95V。借鉴有机材料能带表征的方法,结合其紫外-可见光谱计算出了被测化合物的电子亲和势、电离势、带隙等电化学参数。结果表明,与常用的有机电子传输材料PBD相比,标题化合物具有较高的电子亲和势(3.79~4.39eV)和电离势(6.95~7.84eV),较高的电子亲和势有利于电子的传输。 展开更多

关键词 均三唑并噻二唑 循环伏安 电子传输

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羔羊血清促细胞生长效果的研究

12

作者 马忠仁 冯若飞 +5 位作者 李明生 乔自林 周雪雁 李倬 冯玉萍 侯兰新 《中国草食动物》 2007年第3期17-19,共3页

为研究羔羊血清促细胞生长的效果,用羔羊血清以及羔羊与新生牛混合血清来培养VERO、BHK-21细胞,同时培养SP2/0-Ag14细胞并进行计数。结果表明:羔羊血清促细胞生长效应明显低于新生牛血清,但是与牛血清以不同比例混合后,促细胞生长效应... 为研究羔羊血清促细胞生长的效果,用羔羊血清以及羔羊与新生牛混合血清来培养VERO、BHK-21细胞,同时培养SP2/0-Ag14细胞并进行计数。结果表明:羔羊血清促细胞生长效应明显低于新生牛血清,但是与牛血清以不同比例混合后,促细胞生长效应有明显的提高,比例在4∶6和5∶5时,促细胞生长能力与牛血清接近。因此,在细胞培养过程中,把羔羊血清和新生牛血清按1∶1混合使用,既可降低成本,又具有良好的促细胞生长效果,使羔羊血清得到了充分利用,并产生一定的经济效益和社会效益。 展开更多

关键词 羔羊血清 VERO细胞 BHK-21细胞 最大增殖浓度 倍增时间

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禽流感病毒H9N2与新城疫病毒在鸡成纤维细胞中共感染对病毒复制的影响 被引量：5

13

作者 谢军 孙英杰 +3 位作者 周昌娈 朱善元 丁铲 柏家林 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期2521-2528,共8页

临床上禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)与新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)共同感染情况经常发生。为研究AIV与NDV在鸡成纤维细胞DF-1中的共感染对病毒复制的相互影响,首先对NDV和H9N2亚型AIV单独感染DF-1细胞时病毒的... 临床上禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)与新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)共同感染情况经常发生。为研究AIV与NDV在鸡成纤维细胞DF-1中的共感染对病毒复制的相互影响,首先对NDV和H9N2亚型AIV单独感染DF-1细胞时病毒的复制情况进行了分析,设定以NDV和AIV共感染细胞后12和24h作为样品采集点,通过Western blot、间接免疫荧光和实时荧光定量PCR检测了两种病毒共感染与单独感染对病毒NP蛋白表达的相互影响。结果显示:Western blot分析表明共感染12和24h,NDV NP蛋白的表达分别下调了70.6%(P<0.001)和45.7%(P<0.001),AIV NP蛋白的表达分别下调了61.5%(P<0.001)和82.8%(P<0.001);免疫荧光分析显示共感染组细胞中NDV和AIV的NP蛋白丰度在感染12h时间点分别下调81.1%(P<0.001)和65.5%(P<0.001),24h时则分别下调41.2%(P<0.05)和47.4%(P<0.001);qPCR结果也证实共感染12和24h组NDV NP的mRNA表达水平分别下调了64.3%(P<0.001)和64.4%(P<0.05),AIV NP的mRNA表达水平分别下调了61.5%(P<0.001)和63.0%(P<0.001)。本研究证明AIV与NDV共感染在细胞水平上可引起病毒复制的相互抑制,为研究NDV和AIV共感染机制在细胞水平上奠定了基础。 展开更多

关键词 禽流感病毒 新城疫病毒 鸡成纤维细胞DF-1 共感染 病毒复制

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膜连蛋白A2基因实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用 被引量：4

14

作者 张海霞 马玉梅 +5 位作者 包晓婧 徐雷 李向茸 谢晶莹 马忠仁 冯若飞 《动物医学进展》 北大核心 2015年第10期15-19,共5页

为建立膜连蛋白A2(AnxA2)基因SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法,根据GenBank中公布的AnxA2基因序列设计并合成引物,经过条件优化,建立了AnxA2SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法。该方法线性关系较好,以质粒标准品构建的标准曲线... 为建立膜连蛋白A2(AnxA2)基因SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法,根据GenBank中公布的AnxA2基因序列设计并合成引物,经过条件优化,建立了AnxA2SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法。该方法线性关系较好,以质粒标准品构建的标准曲线相关系数R2为0.999;灵敏性好,比普通PCR灵敏100倍。应用建立的方法对随机选取的几种哺乳动物细胞进行检测。结果表明,建立的方法能成功检出不同细胞中AnxA2含量。表明本研究建立的AnxA2SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法灵敏性高,重复性好,可用于AnxA2的检测及定量分析。 展开更多

关键词 膜连蛋白A2 SYBR GreenⅠ实时荧光定量聚合酶链反应 检测

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病毒受体研究进展 被引量：6

15

作者 徐雷 冯若飞 马忠仁 《动物医学进展》 北大核心 2015年第2期88-92,共5页

病毒受体是由宿主细胞自主编码、调控和表达的一类特殊的蛋白质,是宿主细胞膜的重要组成部分之一,它能够介导病毒与靶细胞特异性结合,并促进病毒侵入或感染宿主细胞。病毒受体不仅有着其正常的生理功能,还是病毒致病性的关键因素之一,... 病毒受体是由宿主细胞自主编码、调控和表达的一类特殊的蛋白质,是宿主细胞膜的重要组成部分之一,它能够介导病毒与靶细胞特异性结合,并促进病毒侵入或感染宿主细胞。病毒受体不仅有着其正常的生理功能,还是病毒致病性的关键因素之一,与病毒的入侵途径、扩散方式及发病特点等有着密切的关系。由于病毒受体研究起步较晚,许多病毒感染宿主细胞的机制至今仍不明确,所以,病毒受体的研究已成为相当活跃的研究领域。近年来,随着人们对各种病毒研究的不断深入,其受体的发现越来越多,但其种类繁多,分类复杂,为相关的研究工作带来了许多不便,在此,通过对近年来发现的受体进行系统的阐述,以方便更多的人更好地了解病毒受体。 展开更多

关键词 病毒 细胞膜 受体

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牦牛胰酶的制备及其在水解乳蛋白中的应用研究

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作者 靳冬武 李明生 +7 位作者 龙仕和 崔梦楠 马素娟 张健 张磊 李倬 冯玉萍 马忠仁 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2015年第15期202-207,共6页

基于牦牛胰脏提取胰酶,以酶活力和收率作为衡量指标,在单因素实验的基础上通过正交实验,确定牦牛胰酶制备的最佳工艺,最后探讨胰酶水解酪蛋白制备水解乳蛋白的效果。结果表明,牦牛胰酶最佳制备工艺为牦牛胰脏∶25%乙醇(提取剂)=1∶1,提... 基于牦牛胰脏提取胰酶,以酶活力和收率作为衡量指标,在单因素实验的基础上通过正交实验,确定牦牛胰酶制备的最佳工艺,最后探讨胰酶水解酪蛋白制备水解乳蛋白的效果。结果表明,牦牛胰酶最佳制备工艺为牦牛胰脏∶25%乙醇(提取剂)=1∶1,提取激活时间为5h,激活p H=6.8,75%乙醇沉淀8h。所得胰酶中胰蛋白酶、胰淀粉酶和胰脂肪酶的酶活力分别为1867、16298和5683 U/g,收率达9.7%;用其在温度40℃,p H7.5,酶与底物比例为1∶5的条件下水解酪蛋白4 h后所得的水解乳蛋白与Hyclone的水解乳蛋白相比较,有19种相同的氨基酸,且氨基酸总含量高于Hyclone的水解乳蛋白,分别为36.111%和27.725%。综上可知,该工艺简单,耗时短,易于产业化,在水解蛋白质领域中具有良好的应用前景。 展开更多

关键词 牦牛胰脏 胰酶 酶活力 收率 水解乳蛋白

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