静置培养MDCK细胞的生长及代谢动力学研究 被引量：1

1

作者 暴艳敏 王家敏 +4 位作者 马祺 令世鑫 马卫国 马忠仁 乔自林 《黑龙江农业科学》 2015年第6期71-74,共4页

为研究MDCK细胞的生长及代谢动力学特征,试验采用低密度静置培养,每天测定细胞生长密度和活力,并利用多参数生化分析仪测定培养液中Gluc、Lac、Gln和NH4+的含量,计算细胞指数生长期的比代谢速率。结果表明:MDCK细胞生长曲线呈"S&qu... 为研究MDCK细胞的生长及代谢动力学特征,试验采用低密度静置培养,每天测定细胞生长密度和活力,并利用多参数生化分析仪测定培养液中Gluc、Lac、Gln和NH4+的含量,计算细胞指数生长期的比代谢速率。结果表明:MDCK细胞生长曲线呈"S"型,最大增殖密度为53.8×104 upf·mL-1,倍增时间为24.2h;对数生长期Gluc和Gln的比代谢(消耗速率为-2.20 mg·(106cells·d)-1和-3.85μmol·(106cells·d)-1,Lac和NH4+的比生成)速率为2.25mg·(106cells·d)-1和2.22μmol·(106cells·d)-1。 展开更多

关键词 MDCK细胞 生长特征 代谢动力学

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酶解大豆蛋白的制备工艺研究及其在细胞培养中的应用研究 被引量：4

2

作者 郑荣 何云富 +7 位作者 张邵博 李倬 冶眩青 程浩 丁功涛 冯玉萍 马忠仁 李明生 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期1627-1633,1654,共8页

采用两种非动物源性蛋白酶水解大豆蛋白,以水解度为指标,对不同比例4种酶两两组合测试其水解度,选出水解最佳用酶;在单因素试验基础上,采用正交试验对酶解大豆蛋白的工艺条件进行优化,并将产物进行动物细胞的生长进行检测。结果表明:复... 采用两种非动物源性蛋白酶水解大豆蛋白,以水解度为指标,对不同比例4种酶两两组合测试其水解度,选出水解最佳用酶;在单因素试验基础上,采用正交试验对酶解大豆蛋白的工艺条件进行优化,并将产物进行动物细胞的生长进行检测。结果表明:复合蛋白酶与碱性蛋白酶以等比例进行混合,其水解效果最佳;水解最佳工艺为:温度60℃、p H值7. 0和酶/底物(E/S)=1∶4(质量比),水解时间为4 h,其水解度为43. 7%。将酶解产物培养BHK-21细胞,并与Hypep1510进行对比,细胞生长状态良好,其细胞密度在120 h时最大,为3. 96×10~5cells/mL,与Hypep1510相比,最大细胞密度并无明显差异,其倍增时间为26. 2 h,高于阴性对照组与阳性对照组,且细胞形态基本未发生改变,表明酶解大豆蛋白所的产物能够缩短细胞倍增的时间,且具有一定的促细胞生长作用,为其在动物细胞大规模培养中的应用提供了理论依据。 展开更多

关键词 酶解 非动物源性 大豆蛋白 细胞培养

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静置培养BHK-21细胞生长及代谢动力学研究 被引量：1

3

作者 付智财 王家敏 +3 位作者 沈武玲 令世鑫 马忠仁 乔自林 《黑龙江农业科学》 2014年第2期62-64,共3页

为研究BHK-21细胞的生长及代谢动力学特征,试验采用低密度静置培养方法,每天测定细胞生长密度和活力,并利用多参数生化分析仪测定培养液中Gluc、Lac、Gln和NH4+的含量,计算细胞指数生长期的比代谢速率。结果表明:BHK-21细胞生长曲线呈S... 为研究BHK-21细胞的生长及代谢动力学特征,试验采用低密度静置培养方法,每天测定细胞生长密度和活力,并利用多参数生化分析仪测定培养液中Gluc、Lac、Gln和NH4+的含量,计算细胞指数生长期的比代谢速率。结果表明:BHK-21细胞生长曲线呈S型,最大增殖密度为50.3×104 upf·mL-1,倍增时间为21.1h;对数生长期Gluc和Gln的比消耗速率为-3.79mg·(106 cells)-1·d-1和-9.95μmol·(106 cells)-1·d-1,Lac和NH4+的比生成速率为2.81mg·(106 cells)-1·d-1和6.30μmol·(106 cells)-1·d-1。 展开更多

关键词 BHK-21细胞 生长特征 代谢动力学 比代谢速率 比消耗速率 比生成速率

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自噬相关蛋白参与抗病原感染机制的研究进展 被引量：3

4

作者 马鹏 常秋燕 +5 位作者 李林杰 郭富城 李凌浩 张德荣 马忠仁 马晓霞 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1079-1083,共5页

细胞自噬(Autophage),是细胞在自噬相关基因(Autophagy—related gene,ATG)的调控下利用溶酶体降解自身受损的细胞器和大分子物质的过程。细胞自噬与细胞凋亡、细胞衰老相似,是十分重要的生物学现象,参与生物的发育、生长等多种生命过程。

关键词 自噬 感染机制 生物学现象 病原 白参 大分子物质 细胞器 相关基因

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猪繁殖与呼吸综合征疫苗的研究进展 被引量：3

5

作者 马花 马桂兰 +3 位作者 马祺 马忠仁 柏家林 乔自林 《甘肃畜牧兽医》 2016年第19期60-62,68,共4页

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是一种猪的高致病性和高死亡率的疫病,给养猪业带来了严重损失,目前尚无特别有效的免疫预防措施,接种疫苗仍是预防本病的最重要措施。灭活疫苗安全但保护力低,弱毒活疫苗有散毒风险但是保护力相对较高,DNA疫苗... 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是一种猪的高致病性和高死亡率的疫病,给养猪业带来了严重损失,目前尚无特别有效的免疫预防措施,接种疫苗仍是预防本病的最重要措施。灭活疫苗安全但保护力低,弱毒活疫苗有散毒风险但是保护力相对较高,DNA疫苗、亚单位疫苗、活载体疫苗和基因缺失疫苗等新型疫苗研究都有较好进展。预防控制和消灭PRRS任重道远。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征 灭活疫苗 弱毒活疫苗 基因工程疫苗

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兰州黑白花奶牛肾组织细胞系的建立 被引量：2

6

作者 令世鑫 徐水林 +5 位作者 马伟 马桂兰 马花 王家敏 马忠仁 乔自林 《甘肃畜牧兽医》 2016年第5期68-69,72,共3页

目的：通过体细胞分离培养和保存,在细胞水平上保存兰州黑白花奶牛的种质资源.方法：采用胰蛋白酶热消化分离培养兰州黑白花奶牛的肾组织细胞,传代扩大培养后液氮保存,对保存的细胞进行了复苏活力、形态、生长特性、微生物和内外源病毒... 目的：通过体细胞分离培养和保存,在细胞水平上保存兰州黑白花奶牛的种质资源.方法：采用胰蛋白酶热消化分离培养兰州黑白花奶牛的肾组织细胞,传代扩大培养后液氮保存,对保存的细胞进行了复苏活力、形态、生长特性、微生物和内外源病毒因子检查.结果：保存的兰州黑白花奶牛肾细胞复苏活力达94%,生长良好,形态以梭形和上皮形为主,生长曲线呈近＂S＂型,最大增殖浓度3.89×105/ml,倍增时间为27.15 h,无菌、支原体和内外源病毒因子检查为阴性.结论：成功建立了兰州黑白花奶牛肾组织细胞系,使种质资源在细胞水平上得以长期保存. 展开更多

关键词 兰州黑白花奶牛 肾细胞 种质资源

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环介导恒温扩增技术在食品检测中的应用 被引量：8

7

作者 赵彩红 高强 +1 位作者 李明生 徐红伟 《农业科技与信息》 2017年第22期26-28,共3页

食品安全问题是每个人关注的问题,为了维护消费者的利益,提高生活质量,实现监管部门对食品质量的现场快速检测是十分有必要的。环介导恒温扩增技术以核酸为靶标进行有效扩增,具有高特异性、高灵敏度、快速且高效等特点,因此针对食品的... 食品安全问题是每个人关注的问题,为了维护消费者的利益,提高生活质量,实现监管部门对食品质量的现场快速检测是十分有必要的。环介导恒温扩增技术以核酸为靶标进行有效扩增,具有高特异性、高灵敏度、快速且高效等特点,因此针对食品的快速检测具有一定的可操作意义。本文针对环介导恒温扩增技术的概要以及在食品领域的掺假问题、转基因成分的检测和食源性病原菌检测等方面进行了综述,以期为食品领域的现场快速检测提供一定的理论基础。 展开更多

关键词 环介导恒温扩增技术 食品安全 现场检测

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禽流感病毒H9N2与新城疫病毒在鸡成纤维细胞中共感染对病毒复制的影响 被引量：5

8

作者 谢军 孙英杰 +3 位作者 周昌娈 朱善元 丁铲 柏家林 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期2521-2528,共8页

临床上禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)与新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)共同感染情况经常发生。为研究AIV与NDV在鸡成纤维细胞DF-1中的共感染对病毒复制的相互影响,首先对NDV和H9N2亚型AIV单独感染DF-1细胞时病毒的... 临床上禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)与新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)共同感染情况经常发生。为研究AIV与NDV在鸡成纤维细胞DF-1中的共感染对病毒复制的相互影响,首先对NDV和H9N2亚型AIV单独感染DF-1细胞时病毒的复制情况进行了分析,设定以NDV和AIV共感染细胞后12和24h作为样品采集点,通过Western blot、间接免疫荧光和实时荧光定量PCR检测了两种病毒共感染与单独感染对病毒NP蛋白表达的相互影响。结果显示:Western blot分析表明共感染12和24h,NDV NP蛋白的表达分别下调了70.6%(P<0.001)和45.7%(P<0.001),AIV NP蛋白的表达分别下调了61.5%(P<0.001)和82.8%(P<0.001);免疫荧光分析显示共感染组细胞中NDV和AIV的NP蛋白丰度在感染12h时间点分别下调81.1%(P<0.001)和65.5%(P<0.001),24h时则分别下调41.2%(P<0.05)和47.4%(P<0.001);qPCR结果也证实共感染12和24h组NDV NP的mRNA表达水平分别下调了64.3%(P<0.001)和64.4%(P<0.05),AIV NP的mRNA表达水平分别下调了61.5%(P<0.001)和63.0%(P<0.001)。本研究证明AIV与NDV共感染在细胞水平上可引起病毒复制的相互抑制,为研究NDV和AIV共感染机制在细胞水平上奠定了基础。 展开更多

关键词 禽流感病毒 新城疫病毒 鸡成纤维细胞DF-1 共感染 病毒复制

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病毒感染激活TLRs和RLRs介导的IFN信号通路研究进展 被引量：2

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作者 常秋燕 周小凯 +2 位作者 马鹏 马晓霞 冯玉萍 《动物医学进展》 北大核心 2017年第7期87-91,共5页

在病毒侵染机体的过程中,机体的多数组织器官可以高效产生干扰素。近些年的研究发现,能够有效识别病毒侵染机体过程中的相关模式分子(例如病毒复制中间产物双链RNA)的细胞受体是产生干扰素的主要感受器,这些细胞受体(例如Toll样受体和R... 在病毒侵染机体的过程中,机体的多数组织器官可以高效产生干扰素。近些年的研究发现,能够有效识别病毒侵染机体过程中的相关模式分子(例如病毒复制中间产物双链RNA)的细胞受体是产生干扰素的主要感受器,这些细胞受体(例如Toll样受体和RIG-Ⅰ样受体)能够诱发一系列的信号级联反应,并且被激活的感受器可以启动干扰素相关基因的转录活性,从而产生特定的干扰素。值得注意的是,不同种类的病毒能够倾向性地去激活特定的细胞感受器,并且产生特定的信号转导通路。论文主要从Toll样受体和RIG-Ⅰ样受体的结构入手,讨论宿主细胞模式受体在干扰素抗病毒过程中行使的功能,并简单介绍干扰素在抗病毒过程中的信号级联反应。 展开更多

关键词 RNA病毒 干扰素 感受器 TOLL样受体 RIG—Ⅰ样受体 信号通路

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BHK-21细胞库的建立及其生物学特性鉴定 被引量：3

10

作者 付智财 王家敏 +8 位作者 令世鑫 沈武玲 平玲 魏园园 马桂兰 暴艳敏 徐水林 马忠仁 乔自林 《山西农业科学》 2013年第8期808-812,共5页

从美国典型培养物保藏中心(ATCC)和中国兽医药品监察所(中监所)引进2株BHK-21细胞系,传代扩增培养后液氮冻存,建立相应的细胞库;复苏细胞后对活力、形态、生长曲线、微生物污染、染色体核型及荧光蛋白质粒转染表达等特性进行研究。结果... 从美国典型培养物保藏中心(ATCC)和中国兽医药品监察所(中监所)引进2株BHK-21细胞系,传代扩增培养后液氮冻存,建立相应的细胞库;复苏细胞后对活力、形态、生长曲线、微生物污染、染色体核型及荧光蛋白质粒转染表达等特性进行研究。结果显示,2个来源的BHK-21细胞系均呈成纤维型,生长状态良好;生长曲线呈S型;细菌、真菌、支原体及外源病毒检查均为阴性;染色体为21对,二倍体均占主体;外源质粒在该2株细胞系中能进行复制和表达。这可为开展BHK-21细胞系及口蹄疫疫苗的研究与开发提供基础理论依据和细胞资源。 展开更多

关键词 BHK-21细胞系 细胞库 生物学特性

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Hi5-SF悬浮细胞系的建立及鉴定 被引量：1

11

作者 马伟 王家敏 +5 位作者 马桂兰 马祺 马花 乔自林 马忠仁 冯玉萍 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期173-178,共6页

从中国典型培养物保藏中心(CCTCC)引进High Five细胞并对其进行驯化,获得无血清悬浮驯化株(Hi5-SF)。依据《中华人民共和国药典(2010年版三部)》对其进行细胞生物学特性研究、微生物污染、病毒外源因子及细胞致瘤性检测。结果发现,Hi5-S... 从中国典型培养物保藏中心(CCTCC)引进High Five细胞并对其进行驯化,获得无血清悬浮驯化株(Hi5-SF)。依据《中华人民共和国药典(2010年版三部)》对其进行细胞生物学特性研究、微生物污染、病毒外源因子及细胞致瘤性检测。结果发现,Hi5-SF细胞复苏活力76.3%,生长曲线呈"S"型,最大增殖密度可达3.50×10~6 mL^(-1),群体倍增时间为26.2h;细菌、真菌及支原体检查均为阴性;血细胞吸附试验、致细胞病变试验和特异性病毒荧光抗体结合物检查结果均为阴性;致瘤性检查结果也为阴性。说明该细胞株符合兽用疫苗生产用细胞质量要求,可以在疫苗研究与生产中应用。 展开更多

关键词 HIGH five细胞 悬浮培养 质量评价

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60Coγ-射线辐照新生牛血清对BHK21培养细胞的影响 被引量：2

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作者 窦晓霞 马桂兰 +2 位作者 王家敏 乔自林 李倬 《甘肃畜牧兽医》 2019年第3期66-70,共5页

目的:研究新生牛血清(newborn calf serum NBCS)γ-射线辐照后对BHK21细胞培养的影响。方法:用20kGyγ-射线辐照NBCS后培养BHK21细胞,通过连续传代培养和低密度生长曲线比较辐照前后的细胞生长效果。结果:NBCS辐照后连续传代培养10代,... 目的:研究新生牛血清(newborn calf serum NBCS)γ-射线辐照后对BHK21细胞培养的影响。方法:用20kGyγ-射线辐照NBCS后培养BHK21细胞,通过连续传代培养和低密度生长曲线比较辐照前后的细胞生长效果。结果:NBCS辐照后连续传代培养10代,每代细胞生长良好,48 h内形成致密单层,与辐照前没有明显区别。NBCS辐照前后低密度培养BHK21细胞第5代平均最大增殖密度为51.35×104/ml、51.20×104/ml、倍增时间21.89 h、22.59 h;第10代为52.25×104/ml、52.73×104/ml和21.95 h、21.62 h,生长曲线基本一致。结论:NBCS 20kGyγ-射线辐照后不影响BHK21细胞的培养效果。 展开更多

关键词 新生牛血清 γ-射线 BHK21细胞

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丙型肝炎病毒对ISG产物及干扰素的影响研究进展

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作者 王悦萦 马鹏 +5 位作者 李林杰 常秋燕 郭富城 李凌浩 马晓霞 马忠仁 《动物医学进展》 北大核心 2018年第10期78-82,共5页

哺乳动物通过启动细胞内的先天免疫反应来抗击丙型肝炎病毒(HCV)的侵袭和复制。天然免疫防御系统的特点是可以通过病原体识别受体信号介导抗病毒基因产物的表达,包括干扰素和干扰素刺激基因的产生以及感染部位其他促炎细胞因子的分泌来... 哺乳动物通过启动细胞内的先天免疫反应来抗击丙型肝炎病毒(HCV)的侵袭和复制。天然免疫防御系统的特点是可以通过病原体识别受体信号介导抗病毒基因产物的表达,包括干扰素和干扰素刺激基因的产生以及感染部位其他促炎细胞因子的分泌来抗击HCV的感染。HCV在人体内持续感染的能力与病毒克服宿主免疫系统的逃避机制有关,HCV还可抵御干扰素治疗的抗病毒反应。对HCV与宿主相互作用的研究揭示了HCV逃避宿主的免疫调节及宿主对HCV免疫调控的机制。论文主要论述在感染HCV的过程中ISG产物的抗病毒作用、HCV对干扰素上、下游的影响及病毒对宿主的逃避机制。 展开更多

关键词 先天免疫 丙型肝炎病毒 病原体识别受体分子 信号 干扰素 干扰素诱导基因

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蛛丝蛋白基因重组表达研究进展 被引量：1

14

作者 王娟 马桂兰 +1 位作者 王家敏 乔自林 《甘肃畜牧兽医》 2017年第3期24-25,46,共3页

蛛丝是一种具有特殊蛋白序列结构和超强收缩性能的天然蛋白纤维,有独特力学性能和实用价值的高性能生物材料。本文概述了蛛丝蛋白的理化性能、力学性能、分子基础和基因重组表达的研究进展。

关键词 蛛丝蛋白 理化性质 基因重组

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奥斯特亚科(圆线目:毛圆科)线虫系统分类学研究概况

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作者 刘振斌 杨学财 +2 位作者 万雪梅 杜江龙 蔡葵蒸 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期54-63,共10页

文章介绍奥斯特亚科线虫种属鉴别特征及系统分类学研究进展。根据系统分类学最新成果,结合我国该亚科发现的叶氏奥斯特、熊氏奥斯特、异刺奥斯特、斯氏奥斯特、吴兴奥斯特、念青唐古拉奥斯特、中华奥斯特、西藏奥斯特、甘肃奥斯特、宁... 文章介绍奥斯特亚科线虫种属鉴别特征及系统分类学研究进展。根据系统分类学最新成果,结合我国该亚科发现的叶氏奥斯特、熊氏奥斯特、异刺奥斯特、斯氏奥斯特、吴兴奥斯特、念青唐古拉奥斯特、中华奥斯特、西藏奥斯特、甘肃奥斯特、宁陕奥斯特、矛形奥斯特、短肋奥斯特、新疆马歇尔、天山马歇尔、塔里木马歇尔、青海马歇尔、短尾马歇尔、粗刺马歇尔、祁连马歇尔、拉萨马歇尔和四川斯纳线虫21个新种,就系统分类学展开评述并结合国内该领域研究现状提出建议。 展开更多

关键词 毛圆科 奥斯特亚科 系统分类 线虫

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兰州黑白花奶牛耳缘组织细胞系的建立

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作者 徐水林 马伟 +3 位作者 马桂兰 马花 马卫国 乔自林 《甘肃畜牧兽医》 2016年第5期65-67,共3页

目的：通过耳缘组织细胞的分离培养和保存,在细胞水平上保存兰州黑白花奶牛的种质资源.方法：采用植块法培养兰州黑白花奶牛的耳缘组织原代细胞,经传代扩大培养后在液氮中冷冻保存,并对保存的耳缘组织细胞系进行了复苏活力、形态、生长... 目的：通过耳缘组织细胞的分离培养和保存,在细胞水平上保存兰州黑白花奶牛的种质资源.方法：采用植块法培养兰州黑白花奶牛的耳缘组织原代细胞,经传代扩大培养后在液氮中冷冻保存,并对保存的耳缘组织细胞系进行了复苏活力、形态、生长特性、微生物和内、外源病毒因子检查.结果：兰州黑白花奶牛耳缘组织植块培养时第4天可见细胞从植块边缘生长,第6天消化传代后生长变快,形态以上皮型为主.冷冻保存的兰州黑白花奶牛耳缘细胞系复苏活力达95%,生长良好,生长曲线呈近＂S＂型,最大增殖浓度3.36×105/ml,对数生长期倍增时间为24 h,无菌、支原体和内、外源病毒因子检查为阴性.结论：成功建立了兰州黑白花奶牛耳缘组织细胞系,使这一物种的种质资源在细胞水平上得以长期保存. 展开更多

关键词 兰州黑白花奶牛 耳缘组织 细胞系

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一株白牦牛源牛病毒性腹泻病毒E0基因的原核表达与序列分析 被引量：4

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作者 马鹏 李林杰 +3 位作者 常秋燕 王悦萦 马晓霞 马忠仁 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第9期1961-1968,共8页

【目的】本研究旨在对来源于白牦牛的牛病毒性腹泻病毒(BVDV) GSTZ株的E0基因进行分析,并利用E0基因对GSTZ进行基因分型。【方法】通过提取牛病毒性腹泻病毒(BVDV) RNA,使用RT-PCR技术扩增BVDV E0基因,将其插入到pET-28a中,构建pET-28a... 【目的】本研究旨在对来源于白牦牛的牛病毒性腹泻病毒(BVDV) GSTZ株的E0基因进行分析,并利用E0基因对GSTZ进行基因分型。【方法】通过提取牛病毒性腹泻病毒(BVDV) RNA,使用RT-PCR技术扩增BVDV E0基因,将其插入到pET-28a中,构建pET-28a-E0原核表达载体,转化BL21(DE3)感受态细胞,筛选阳性克隆,鉴定及测序。IPTG诱导后使用BVDV阳性血清作一抗,经western blot鉴定。根据E0基因的序列进行同源性分析以及构建E0基因系统发育进化树。利用DNAstar预测E0蛋白的抗原表位。【结果】本研究表达的E0蛋白大小与预期结果相符且该蛋白具有良好的抗原性。通过对E0基因序列的同源性分析以及构建E0基因系统发育进化树,说明牛病毒性腹泻病毒GSTZ株基因型可能属于牛病毒性腹泻病毒-1a亚型,也可能是其他基因亚型发生较大突变产生变异。通过预测E0蛋白B细胞的抗原表位主要位于:7-12、22-26、62-63、94-97、101-105、115-119、127-128、138-140、185-187、215-219位氨基酸残基; T细胞潜在优势抗原区域主要位于:10-14、19-31、36-43、52-58、77-86、96-98、137-140、148-150、167-191、209-211位氨基酸残基。【结论】E0蛋白具有良好的抗原性,通过对抗原表位预测以及对GSTZ进行基因分型,为后续基因工程疫苗和BVDV检测试剂盒的开发提供了理论依据。 展开更多

关键词 牛病毒性腹泻病毒 E0基因 原核表达 序列分析 抗原表位

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PPRV Nigeria75/1 H蛋白原核表达及抗原表位预测 被引量：5

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作者 李林杰 常秋燕 +3 位作者 马鹏 王悦萦 马晓霞 柏家林 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期111-116,共6页

克隆并原核表达小反刍兽疫病毒弱毒疫苗株血凝素蛋白(H)全长基因,并通过生物信息学的方法预测其B抗原表位。根据NCBI中PPRV基因组序列中H基因序列(GenBank X74443)设计一对引物,采用RT-PCR方法扩增其全长;将扩增产物克隆至原核表达载体p... 克隆并原核表达小反刍兽疫病毒弱毒疫苗株血凝素蛋白(H)全长基因,并通过生物信息学的方法预测其B抗原表位。根据NCBI中PPRV基因组序列中H基因序列(GenBank X74443)设计一对引物,采用RT-PCR方法扩增其全长;将扩增产物克隆至原核表达载体pET-32a后,转化至大肠杆菌E. coli Rosetta,经IPTG 37℃诱导表达目的蛋白;表达的目的蛋白经带His标签的镍离子蛋白纯化柱纯化后,进行Western Blot鉴定。利用DNAStar软件采用生物信息学的方法预测其H蛋白潜在的抗原表位。结果显示,质粒pET-32a-H经双酶切鉴定及测序后可证明构建正确;表达的目的蛋白相对分子质量约67 ku,能被抗His标签抗体识别,主要以包涵体形式存在,有少量可溶性表达。通过生物信息学软件DNAStar成功找到H蛋白的潜在抗原表位5-8,14-16,73-75,83-90,125-131,142-147,170-177,236-245,281-285,312-317,360-363,370-379,388-391,445-449,487-489,503-505,520-522,532-535,544-551,592-595。试验成功构建阳性质粒pET-32a-H,表达目的蛋白,并成功预测出H蛋白潜在的抗原表位。为早日消除PPRV研制新型亚单位疫苗提供参考。 展开更多

关键词 小反刍兽疫病毒 H蛋白 原核表达 B细胞抗原表位

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BVDV SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法与RT-PCR方法的建立与应用 被引量：4

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作者 马鹏 李林杰 +5 位作者 常秋燕 王悦萦 郭富城 刘萍 马晓霞 马忠仁 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2017年第A01期49-53,共5页

利用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法和RT-PCR方法建立2种有效地实验室检测牛病毒性腹泻病毒的方法。根据Gen Bank中登录的牛病毒性腹泻病毒基因序列,选取14株BVDVⅠ型和7株BVDVⅡ型,经序列比对后,设计合成1对特异性引物,建立了检测BVDV的R... 利用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法和RT-PCR方法建立2种有效地实验室检测牛病毒性腹泻病毒的方法。根据Gen Bank中登录的牛病毒性腹泻病毒基因序列,选取14株BVDVⅠ型和7株BVDVⅡ型,经序列比对后,设计合成1对特异性引物,建立了检测BVDV的RT-PCR方法和SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法。通过对RT-PCR方法和SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的特异性、灵敏性和重复性进行检测。结果显示,该方法可从BVDV标准毒株Oregon C24V中扩增出250 bp的特异性片段,对牛细小病毒、牛副流感病毒、牛腺病毒、呼肠孤病毒的扩增结果均为阴性,对BVDV C24V株、GSTZ株、Av69株、S183株和BVDVⅡ型扩增结果为阳性。经对标准毒株的细胞毒进行检测,RT-PCR的灵敏性为10-1TCID_(50)/mL,SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的灵敏性为3.4×102copies/μL。应用2种方法对临床血清样本进行检测,结果比病毒分离方法更为敏感,操作简便。表明建立的RT-PCR方法和SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法具有特异、灵敏、高效、快速的特点,可用于BVDV的流行病学监测、实验室检测以及诊断。 展开更多

关键词 牛病毒性腹泻病毒(BVDV) RT-PCR SYBR GreenⅠ荧光定量PCR 应用

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缺氧诱导因子-1在病毒感染中的作用 被引量：4

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作者 李琼毅 冯若飞 +1 位作者 乔自林 马忠仁 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2014年第1期88-91,共4页

缺氧诱导因子-1(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)是一种由β亚单位和α亚单位组成的异二聚体转录因子,其表达产物参与细胞的许多生理过程。越来越多的研究提示HIF-1在病毒感染中发挥着重要作用。通过检索相关文献,对人病毒感染中HIF-... 缺氧诱导因子-1(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)是一种由β亚单位和α亚单位组成的异二聚体转录因子,其表达产物参与细胞的许多生理过程。越来越多的研究提示HIF-1在病毒感染中发挥着重要作用。通过检索相关文献,对人病毒感染中HIF-1活性改变及其在病毒感染中的作用进行了综述,为研究HIF-1在病毒感染中的作用提供参考。 展开更多

关键词 缺氧诱导因子-1(HIF-1) 人免疫缺陷病毒-1 丙型肝炎病毒 戊型肝炎病毒 呼吸道合胞病毒

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