动力学因素对液相色谱分离整体蛋白的影响 被引量：3

1

作者 闵一 陈刚 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期717-723,共7页

依据液相色谱分离整体蛋白的效果与色谱柱柱长基本无关的事实,研究了动力学因素对疏水相互作用色谱（HIC）分离整体蛋白的影响。首次提出了用于线性梯度洗脱条件下蛋白分离的“条件板高”（H）概念,并将其用于动力学因素对分离整体蛋白... 依据液相色谱分离整体蛋白的效果与色谱柱柱长基本无关的事实,研究了动力学因素对疏水相互作用色谱（HIC）分离整体蛋白的影响。首次提出了用于线性梯度洗脱条件下蛋白分离的“条件板高”（H）概念,并将其用于动力学因素对分离整体蛋白的影响的表征。分别用常用的色谱柱和色谱饼对标准蛋白进行了分离,绘制了类似于van Deemter的“条件板高”对流动相线速（u）的曲线图。发现对应于色谱柱最低“条件板高”的适合线速约为色谱饼的1/5～1/15,且色谱饼的适合线速范围也较色谱柱宽得多。据此,用装填有HIC填料的色谱饼（10mm×20mm i.d.）在12min内便可完全分离7种标准蛋白。还用装填有HIC填料的色谱饼对重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）进行了复性并同时纯化,在50min内,仅用一步色谱法就可获得纯度≥97%的rhG-CSF,其质量回收率为39%,比活〉1×10^8IU/mg。可以预计,装填极细颗粒的刚性色谱填料的色谱饼可在高负荷条件下进行整体蛋白的高速和高分离度的分离、纯化并同时复性,达到“三高”。 展开更多

关键词 疏水相互作用色谱 蛋白分离 分离度 色谱饼 动力学因素 生物工程 粒细胞集落刺激因子

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氨基己酸为配基的新型弱阳离子交换/疏水双功能色谱固定相对蛋白质的分离纯化 被引量：2

2

作者 王建山 夏红军 +2 位作者 万广平 刘家玮 白泉 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1228-1233,共6页

以硅胶为基质、氨基己酸为配基制备了一种新型弱阳离子交换/疏水(WCX/HIC)双功能混合模式色谱固定相。该固定相配基具有一定的疏水性且含有羧基,在高盐浓度下表现为HIC的性质,可作为HIC固定相使用;在低盐浓度条件下表现为离子交换的性质... 以硅胶为基质、氨基己酸为配基制备了一种新型弱阳离子交换/疏水(WCX/HIC)双功能混合模式色谱固定相。该固定相配基具有一定的疏水性且含有羧基,在高盐浓度下表现为HIC的性质,可作为HIC固定相使用;在低盐浓度条件下表现为离子交换的性质,可作为WCX固定相使用。分别考察了该介质在WCX和HIC两种模式下对标准蛋白质的分离性能,并与商品柱进行比较。结果表明,所合成的WCX/HIC双功能固定相在WCX和HIC两种模式下对蛋白质均有较高的分离度和选择性,且分离能力与商品柱相当,两种模式下标准蛋白质的质量和活性回收率均大于93%,表明该柱具有"一柱二用"的功能,适于生物大分子的分离纯化。基于此双功能色谱柱构建的在线单柱二维液相色谱(2DLC-1C)可在60 min内实现8种蛋白质的快速分离。在70 min内完成了对蛋清中溶菌酶的二维纯化,纯度可达到98.3%。该技术中一根色谱柱可当作两根色谱柱使用,对蛋白质组学研究和重组蛋白药物的生产具有重要的应用价值。 展开更多

关键词 固定相 混合模式色谱 离子交换色谱 疏水色谱 二维液相色谱

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疏水型色谱饼对人血清蛋白质组学样品的快速分离与制备

3

作者 李瑛 白泉 +1 位作者 陈刚 王骊丽 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期331-334,共4页

建立了疏水型色谱饼(10mm×20mm i.d.)与反相色谱(RPLC)离线二维色谱快速分离制备人血清蛋白质组学样品,并用基体辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)进行检测的方法。以4种标准蛋白质的稀溶液为模型进行分离富集,得到细胞... 建立了疏水型色谱饼(10mm×20mm i.d.)与反相色谱(RPLC)离线二维色谱快速分离制备人血清蛋白质组学样品,并用基体辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)进行检测的方法。以4种标准蛋白质的稀溶液为模型进行分离富集,得到细胞色素c(Cyt-c)与肌红蛋白(Myo)的检出限均为1pmol/μL,溶菌酶(Lys)和胰岛素(Ins)的检出限为0.1pmol/μL。将此方法用于人血清蛋白质组学样品的分离与制备,随着血清处理量的增大,质谱可检出的组分数目与信号强度均增加,当血清处理量达到1.0mL时,可检出低丰度蛋白质或多肽285个(相对分子质量均在15000以下)。研究中将1μgCyt-c加入到0.5mL血清中,用上述方法在分离富集低丰度Cyt-c上取得了很好的效果。结果表明,采用疏水型色谱饼与反相色谱联用技术不仅可对血清样品中低丰度蛋白质进行有效的分离和富集,而且一次样品的处理量大,可显著提高低丰度蛋白质的分析、检测水平。 展开更多

关键词 二维液相色谱 基体辅助激光解吸电离飞行时间质谱 色谱饼 蛋白质组学 人血清

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用疏水色谱对还原型胍变性牛胰岛素的折叠特性研究 被引量：4

4

作者 白泉 孔宇 耿信笃 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2002年第8期1483-1488,共6页

用疏水相互色谱 (HPHIC)对还原胍变性牛胰岛素在疏水界面上的折叠与复性进行了研究 .结果表明 ,采用普通流动相时 ,对还原胍变胰岛素的复性效果较差 ,而采用氧化型流动相可使其复性效率提高到 66% ,并用反相色谱 (RPLC)、紫外吸收光谱... 用疏水相互色谱 (HPHIC)对还原胍变性牛胰岛素在疏水界面上的折叠与复性进行了研究 .结果表明 ,采用普通流动相时 ,对还原胍变胰岛素的复性效果较差 ,而采用氧化型流动相可使其复性效率提高到 66% ,并用反相色谱 (RPLC)、紫外吸收光谱、荧光光谱及 MALDI-TOF对其复性效果进行了验证 .同时与体积排阻色谱 (SEC)和稀释法对还原胍变胰岛素的复性结果进行了比较 .结果表明 ,SEC根本无法使还原胍变胰岛素复性 ,而稀释法的复性效率仅有 2 % .这进一步表明 HPHIC是变性蛋白复性的有效工具 ,变性蛋白在疏水界面折叠过程中 ,蛋白质与固定相之间的疏水相互作用对蛋白折叠起着关键性的作用 。 展开更多

关键词 疏水色谱 还原型胍变性 牛胰岛素 折叠特性 蛋白 体积排阻色谱 稀释法 复性

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用于蛋白同时复性及纯化的制备型装置中流动相用量的优化研究 被引量：3

5

作者 张养军 李翔 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期423-426,共4页

在生物大分子的高效液相色谱分离中 ,由计量置换保留模型可得出生物大分子在色谱柱上的保留行为取决于流动相中置换剂的浓度的结论。据此提出了用于蛋白同时复性及纯化的制备型装置 (USRPP)中最小流动相用量的估算公式 ,并进一步得出在... 在生物大分子的高效液相色谱分离中 ,由计量置换保留模型可得出生物大分子在色谱柱上的保留行为取决于流动相中置换剂的浓度的结论。据此提出了用于蛋白同时复性及纯化的制备型装置 (USRPP)中最小流动相用量的估算公式 ,并进一步得出在保持最小流动相用量不变的条件下 ,改变流动相流速和线性梯度时间几乎不影响制备型USRPP分离蛋白的分离度和复性效率的结论。该结论与实验结果一致。 展开更多

关键词 制备型高效液相色谱 计量置换保留模型 流动相 优化 生物大分子 分离 纯化 蛋白质

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醋酸水流动相体系中硅胶键合相上生物大分子保留行为的研究 被引量：2

6

作者 张养军 申烨华 +1 位作者 张启东 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期487-490,共4页

提出了以醋酸 水作为流动相的体系中 ,在ODS柱上分离生物大分子的反相高效液相色谱 (RPLC)方法。实验结果表明 ,醋酸 水的洗脱能力强于甲醇 水 三氟醋酸体系 ,在一定程度上克服了色谱分离中一些蛋白质的不可逆吸附且具有便于冷冻干... 提出了以醋酸 水作为流动相的体系中 ,在ODS柱上分离生物大分子的反相高效液相色谱 (RPLC)方法。实验结果表明 ,醋酸 水的洗脱能力强于甲醇 水 三氟醋酸体系 ,在一定程度上克服了色谱分离中一些蛋白质的不可逆吸附且具有便于冷冻干燥的优点。用参数Z(1mol溶剂化溶质被溶剂化固定相吸附时从两者接触表面释放出置换剂的摩尔总数 ) ,logI(与 1mol溶质对固定相亲和势有关的常数 )和 j(与 1mol溶剂对固定相亲和势有关的常数 )对 9种蛋白质在此流动相体系中的保留进行了表征。该流动相使在RPLC中用于分离生物大分子的三元流动相体系成为二元流动相体系 ,更适合于理论研究。同时得出结论 :在醋酸 水体系中 ,蛋白质与固定相之间的作用力主要为非选择性作用力 ;蛋白质在醋酸 水和甲醇 水 展开更多

关键词 反相高效液相色谱法 生物大分子 保留行为 分离

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高效疏水作用色谱法对还原变性溶菌酶的折叠研究 被引量：3

7

作者 王彦 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期218-221,共4页

首次用高效疏水相互作用色谱(HPHIC)研究了还原变性溶菌酶(Lys)的复性。对还原变性Lys在3种疏水性不同的色谱柱上的复性情况进行了考察,发现还原变性Lys在疏水性最弱的XDM GM1型色谱柱上的复性效率最高,当Lys质量浓度为2 0g/L时,其复性... 首次用高效疏水相互作用色谱(HPHIC)研究了还原变性溶菌酶(Lys)的复性。对还原变性Lys在3种疏水性不同的色谱柱上的复性情况进行了考察,发现还原变性Lys在疏水性最弱的XDM GM1型色谱柱上的复性效率最高,当Lys质量浓度为2 0g/L时,其复性效率可达到94 6%。 展开更多

关键词 高效疏水相互作用色谱 还原变性 溶菌酶 蛋白质 折叠 复性

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近期色谱研究的最新动态和进展 被引量：2

8

作者 白泉 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1117-1119,共3页

色谱是复杂样品分离分析的重要手段。当前复杂样品的分析对分离科学提出了越来越高的要求,而发展新型高效分离材料、分离模式和高灵敏度的检测方法是解决该问题的有效途径之一。本文依据2015年6至8月Analytical Chemistry新录用和在线... 色谱是复杂样品分离分析的重要手段。当前复杂样品的分析对分离科学提出了越来越高的要求,而发展新型高效分离材料、分离模式和高灵敏度的检测方法是解决该问题的有效途径之一。本文依据2015年6至8月Analytical Chemistry新录用和在线发表的有关论文,讨论色谱在样品前处理、固定相、手性拆分、分析检测、蛋白质组学等方面的最新研究动态和进展。 展开更多

关键词 手性拆分 蛋白质组学 分离科学 样品量 分子印迹 抗原决定基 模板分子 整体柱 蛋白质分离 磷酸化残基

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反相液相色谱中溶质保留参数间的定量关系研究

9

作者 郭鸿 张养军 +1 位作者 高娟 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期1-4,共4页

比较了Snyder经验公式中的K0w 与S和溶质计量置换保留模型 (SDM R)中溶质保留参数Z(1mol溶剂化溶质被溶剂化固定相吸附时 ,在其接触表面处释放出溶剂或置换剂的总摩尔数 )与lgI(与 1mol溶质对固定相的亲和势有关的常数 )之间的定量关系... 比较了Snyder经验公式中的K0w 与S和溶质计量置换保留模型 (SDM R)中溶质保留参数Z(1mol溶剂化溶质被溶剂化固定相吸附时 ,在其接触表面处释放出溶剂或置换剂的总摩尔数 )与lgI(与 1mol溶质对固定相的亲和势有关的常数 )之间的定量关系。SDM R中的两个参数间不仅对同系物溶质可以有很好的线性关系 ,而且对非同系物溶质也有很好的线性关系。其线性关系的好坏主要取决于这两个参数数值范围的大小 ,与文献中报告的线性关系取决于是否单因素影响溶质的保留和完全由统计学规律决定的结论不同。与Snyder经验公式中相对应的参数进行了比较 ,SDM R保留参数的线性范围比Snyder公式中参数的线性范围宽。 展开更多

关键词 反相高效液相色谱 溶质保留参数 溶质计量 置换保留模型 同系物 非同系物 定量关系 线性关系

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Z及logI对离子交换色谱中脲变溶菌酶分子构象变化的表征 被引量：3

10

作者 李敏 王彦 +1 位作者 龚波林 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期214-217,共4页

以溶菌酶(Lys)为目标蛋白,用计量置换保留理论(SDT R)中的参数Z和logI对弱阳离子交换色谱(WCX)中"准天然态"和脲变还原与非还原的两种变性状态的Lys的分子构象变化进行了表征。发现在流动相中含有脲时,蛋白的保留仍服从SDT理... 以溶菌酶(Lys)为目标蛋白,用计量置换保留理论(SDT R)中的参数Z和logI对弱阳离子交换色谱(WCX)中"准天然态"和脲变还原与非还原的两种变性状态的Lys的分子构象变化进行了表征。发现在流动相中含有脲时,蛋白的保留仍服从SDT理论,可以准确测定在特定脲浓度条件下Lys的Z及logI值。结果表明,3种分子构象状态的Lys的Z值均随脲浓度改变呈现不连续变化;"准天然态"Lys在同一脲浓度条件下的Z值比变性状态的大,logI比变性状态的小,而非还原变性态和"准天然态"Lys的Z和logI值比较接近。还对不同脲浓度条件下Lys的活性回收率与Z值之间的关系进行了研究。 展开更多

关键词 离子交换色谱 脲 溶菌酶 分子构象 蛋白质 复性 表征 计量置换保留理论

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重组人干扰素-γ的制备与鉴定 被引量：3

11

作者 吴丹 高栋 +1 位作者 白泉 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期206-211,共6页

用聚乙二醇200疏水相互作用色谱固定相(PEG200-STHIC)分别在色谱柱和色谱饼上完成了一步复性并同时纯化来源于大肠杆菌(E.coli)表达的重组人干扰素-γ(rhIFN-γ)。为了能使色谱分离方法用于不同来源的rhIFN-γ的纯化,对rhIFN-γ在反相... 用聚乙二醇200疏水相互作用色谱固定相(PEG200-STHIC)分别在色谱柱和色谱饼上完成了一步复性并同时纯化来源于大肠杆菌(E.coli)表达的重组人干扰素-γ(rhIFN-γ)。为了能使色谱分离方法用于不同来源的rhIFN-γ的纯化,对rhIFN-γ在反相色谱、离子交换色谱、固定化镍离子亲和色谱上的保留行为也进行了研究。色谱柱纯化的rhIFN-γ收集液经排阻色谱除盐和冷冻干燥得到rhIFN-γ干粉。用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对rhIFN-γ干粉进行了测定,rhIFN-γ单体的相对分子质量为17184.0,二聚体的相对分子质量为34204.4。用细胞病变抑制法(CPEI)测定rhIFN-γ干粉的比活性为9.5×108IU/mg。用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定rhIFN-γ干粉的纯度高于95%。用色谱柱复性并同时纯化rhIFN-γ的质量回收率达到93.7%,纯度高于95%,比活性为4.3×107IU/mg。结果表明,采用PEG200-STHIC色谱柱复性并同时纯化rhIFN-γ是一种十分高效的方法。 展开更多

关键词 重组人干扰素-γ 蛋白折叠液相色谱法 高效疏水色谱 复性 纯化

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伴刀豆球蛋白亲和色谱柱的制备及其在糖蛋白核糖核酸酶B结构分析中的应用 被引量：2

12

作者 陈刚 白泉 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期425-431,共7页

通过对硅胶基质进行化学改性键合伴刀豆球蛋白(C on A),制备了对糖蛋白具有特异亲和作用的亲和色谱固定相;该固定相非特异性吸附弱,对于糖蛋白和糖肽的分离效果良好。对亲和色谱的分离条件进行了优化,以标准糖蛋白核糖核酸酶B(RN ase B... 通过对硅胶基质进行化学改性键合伴刀豆球蛋白(C on A),制备了对糖蛋白具有特异亲和作用的亲和色谱固定相;该固定相非特异性吸附弱,对于糖蛋白和糖肽的分离效果良好。对亲和色谱的分离条件进行了优化,以标准糖蛋白核糖核酸酶B(RN ase B)为模型,对其进行了纯化;用糖苷酶切除糖链,并对切除糖链前后的RN ase B用胰蛋白酶酶解;用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALD I-TO F M S)对亲和色谱分离得到的糖蛋白、糖链及糖肽进行了分析,确定了RN ase B的一级结构、糖含量、糖基化位点及糖连接方式。该方法快速准确,适于糖蛋白和糖肽的分离表征。将其应用于血清中糖蛋白及酶解后血清中糖肽的分离富集,取得了很好的效果。 展开更多

关键词 伴刀豆球蛋白 亲和色谱 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 糖蛋白 核糖核酸酶B 蛋白质组学

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蛋白折叠液相色谱法中流动相对重组人干扰素-γ质量回收率的影响 被引量：2

13

作者 吴丹 王超展 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期197-202,共6页

蛋白折叠液相色谱法(PFLC)用于变性蛋白质复性并同时纯化时对流动相组成及其洗脱条件的要求远较通常的液相色谱法高。用端基为PEG-200的高效疏水作用色谱固定相对重组人干扰素-γ(rhIFN-γ)进行纯化并同时复性,详细研究了流动相组成、... 蛋白折叠液相色谱法(PFLC)用于变性蛋白质复性并同时纯化时对流动相组成及其洗脱条件的要求远较通常的液相色谱法高。用端基为PEG-200的高效疏水作用色谱固定相对重组人干扰素-γ(rhIFN-γ)进行纯化并同时复性,详细研究了流动相组成、梯度洗脱模式和流速对rhIFN-γ质量回收率和活性的影响。分别以3.0mol/L(NH4)2SO4+0.05mol/L KH2PO4(pH7.0)和0.05mol/L KH2PO4(pH7.0)为流动相A和B,采用35min非线性梯度洗脱时,所得rhIFN-γ的质量回收率最高。 展开更多

关键词 高效疏水作用色谱法 流动相组成 梯度洗脱模式 纯化 复性 质量回收率 重组人干扰素-γ

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疏水作用色谱中流动相组成对溶质保留行为的影响 被引量：1

14

作者 赵建国 姚丛 +1 位作者 卫引茂 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期481-484,共4页

首次研究了疏水作用色谱 (HIC)中芳香醇同系物在不同种类盐流动相中的保留行为。以计量置换保留模型中的参数Z分析了HIC中小分子与生物大分子保留行为的差别 ,以及不同流动相组成对两种类型溶质的洗脱范围及洗脱能力的影响。与反相色谱... 首次研究了疏水作用色谱 (HIC)中芳香醇同系物在不同种类盐流动相中的保留行为。以计量置换保留模型中的参数Z分析了HIC中小分子与生物大分子保留行为的差别 ,以及不同流动相组成对两种类型溶质的洗脱范围及洗脱能力的影响。与反相色谱相似 ,芳香醇在HIC中的保留仍存在同系物规律。比较了小分子和生物大分子在不同盐溶液中的Z值变化 ,表明流动相中的盐仅改变小分子与固定相的水合程度 ,而对生物大分子 ,除改变其和固定相水合程度外 。 展开更多

关键词 疏水作用色谱 芳香醇同系物 生物大分子 保留行为 分离 流动相 蛋白质 保留机理

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用于变性蛋白质复性及同时纯化的简易型色谱柱的研制及其应用(英文) 被引量：1

15

作者 柯从玉 白泉 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期394-398,共5页

研制出一种简易型色谱柱并通过装填大颗粒的疏水色谱填料对色谱柱的性能进行了考察 ,该柱的外形和操作如同传统的液相色谱柱 ,但它却在生物大分子分离方面有着和高效液相色谱相似的分辨率。另外 ,只要给该柱装填合适的固定相 ,比如疏水... 研制出一种简易型色谱柱并通过装填大颗粒的疏水色谱填料对色谱柱的性能进行了考察 ,该柱的外形和操作如同传统的液相色谱柱 ,但它却在生物大分子分离方面有着和高效液相色谱相似的分辨率。另外 ,只要给该柱装填合适的固定相 ,比如疏水相互作用色谱固定相 ,便可用于蛋白质的复性及同时纯化。实验考察了该色谱柱的结构、操作和性能 ,包括柱压、柱寿命及对蛋白质的分辨率等。以溶菌酶为模型蛋白质 ,实验测得其在初始浓度为5 0 0g/L时的质量回收率和活性回收率分别为 (96 6± 1 3) %和 (10 1 1± 6 0 ) %。这种简易型色谱柱价格低廉、易操作 ,且可在低压条件下对蛋白质进行纯化 ,表明其在对蛋白质药物的大规模纯化和复性方面有着很大的应用潜力。 展开更多

关键词 液相色谱 柱技术 溶菌酶 蛋白质 复性 纯化

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计量置换参数Z值分量的测定(英文)

16

作者 王彦 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期481-485,共5页

以计量置换吸附理论(SDT A)为基础,从理论上推导出计量吸附模型中表征溶质对固定相亲合势大小的参数βa值与流动相中强置换剂浓度的对数呈线性关系。计量置换模型中的参数n和q(n和q分别代表1摩尔溶剂化溶质被吸附时,从吸附剂表面和从溶... 以计量置换吸附理论(SDT A)为基础,从理论上推导出计量吸附模型中表征溶质对固定相亲合势大小的参数βa值与流动相中强置换剂浓度的对数呈线性关系。计量置换模型中的参数n和q(n和q分别代表1摩尔溶剂化溶质被吸附时,从吸附剂表面和从溶质分子表面所释放出的溶剂的物质的量)是计量置换参数Z值的分量,是两个非常有用的参数,可以从这个定量关系中直接获得。推导出的方程用苯的衍生物进行了实验验证,获得了较满意的结果。将这种方法计算得到的分量值与SDT A与计量置换保留模型(SDT R)相结合的方法得到的分量值进行了比较,发现两种方法所得到的分量值符合较好,且n和q都遵循同系物碳数规律。同时也发现当溶质在液 固表面吸附时,从吸附剂上释放出的溶剂分子要比从溶质表面释放出的溶剂分子多(n>q)。 展开更多

关键词 Z值分量 测定 计量置换吸附理论 吸附亲合势 计量置换参数 体相组成 同系物规律 苯

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用疏水色谱法从猪心中快速制备高纯度的细胞色素C(英文) 被引量：3

17

作者 姚丛 柯从玉 +2 位作者 白泉 卫引茂 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期399-402,共4页

提出了一种从猪心中快速制备高纯度细胞色素C的方法。使用一种装有大颗粒疏水填料的简易型疏水色谱柱在实验室规模对细胞色素C进行了纯化 ,通过反相色谱、紫外光谱及铁含量对样品的纯度进行了检验。与经典方法相比 ,此方法纯化工艺简单... 提出了一种从猪心中快速制备高纯度细胞色素C的方法。使用一种装有大颗粒疏水填料的简易型疏水色谱柱在实验室规模对细胞色素C进行了纯化 ,通过反相色谱、紫外光谱及铁含量对样品的纯度进行了检验。与经典方法相比 ,此方法纯化工艺简单、操作时间短 ,细胞色素C的质量回收率高 ,纯度好。 展开更多

关键词 疏水色谱 细胞色素C 纯化 柱技术

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分析型色谱饼对人血清白蛋白的快速纯化 被引量：4

18

作者 姚文兵 吴丹 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期121-123,共3页

采用分析型色谱饼对标准蛋白混合物进行了分离,结果表明装填有小颗粒填料的色谱饼在高流速条件下仍然具有良好的分离能力。在较大流速(5mL/min)条件下,在10min内对人血清白蛋白样品进行了快速纯化,其纯化后的人血清白蛋白的纯度大于85%... 采用分析型色谱饼对标准蛋白混合物进行了分离,结果表明装填有小颗粒填料的色谱饼在高流速条件下仍然具有良好的分离能力。在较大流速(5mL/min)条件下,在10min内对人血清白蛋白样品进行了快速纯化,其纯化后的人血清白蛋白的纯度大于85%,回收率为65%,说明分析型色谱饼可以用于快速分离纯化生物大分子。 展开更多

关键词 人血清白蛋白 快速纯化 分析型色谱饼 分离

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还原变性核糖核酸酶在疏水性液-固界面上的复性

19

作者 毕晶 白泉 +1 位作者 王军 王骊丽 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期786-789,共4页

采用疏水相互作用色谱(HIC)对还原变性核糖核酸酶A(RNaseA)在疏水性液-固界面上的复性进行了研究。详细讨论了流动相中脲的浓度、还原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽(GSH/GSSG)的比例、流动相pH和变性蛋白质浓度对还原变性RNaseA复性效率和... 采用疏水相互作用色谱(HIC)对还原变性核糖核酸酶A(RNaseA)在疏水性液-固界面上的复性进行了研究。详细讨论了流动相中脲的浓度、还原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽(GSH/GSSG)的比例、流动相pH和变性蛋白质浓度对还原变性RNaseA复性效率和质量回收率的影响。结果表明,在最优化的复性条件(流动相中含有2.0mol/L脲,GSH/GSSG的浓度比为8∶1,流动相pH为8.0)下,还原变性RNaseA能完全复性。当变性蛋白质质量浓度为5.0mg/mL时,还原脲变性RNaseA的活性回收率和质量回收率分别为98.0%和61.9%,还原胍变性RNaseA分别为100.1%和66.8%。研究表明HIC是还原变性蛋白质复性的有力工具之一,可为蛋白质复性研究提供新方法和新思路。 展开更多

关键词 蛋白质复性 疏水作用色谱 还原变性 核糖核酸酶A

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