二氧化硅微球精准制备最新研究亮点

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作者 白泉 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期1103-1104,共2页

高效液相色谱(HPLC)被广泛用于生物、化工、制药、食品分析、环境保护等领域,是复杂样品分离分析的重要工具。众所周知,色谱分离的核心是色谱填料。二氧化硅微球具有机械强度高、比表面积大和表面易于修饰等优点,已成为应用最广泛的色... 高效液相色谱(HPLC)被广泛用于生物、化工、制药、食品分析、环境保护等领域,是复杂样品分离分析的重要工具。众所周知,色谱分离的核心是色谱填料。二氧化硅微球具有机械强度高、比表面积大和表面易于修饰等优点,已成为应用最广泛的色谱填料基质。目前,高性能的二氧化硅微球大多依赖进口,价格昂贵,且其制备技术多为商业机密。因此,开发简单、经济的HPLC级二氧化硅微球成为研究热点。 展开更多

关键词 二氧化硅微球 商业机密 色谱填料 样品分离 机械强度 色谱分离 研究热点

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色谱技术在抗体分离纯化中的应用进展 被引量：2

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作者 刘家玮 唐长伟 +1 位作者 夏一然 白泉 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期533-543,共11页

抗体作为一类重要的生物药物,在疾病诊断和治疗等方面拥有广阔的前景。抗体药物的需求逐年上升,生产规模不断扩大,下游抗体纯化已经成为抗体药物生产的瓶颈。色谱技术具有选择性好、分离效率高等优点,在抗体纯化领域占据主导地位。抗体... 抗体作为一类重要的生物药物,在疾病诊断和治疗等方面拥有广阔的前景。抗体药物的需求逐年上升,生产规模不断扩大,下游抗体纯化已经成为抗体药物生产的瓶颈。色谱技术具有选择性好、分离效率高等优点,在抗体纯化领域占据主导地位。抗体分离纯化流程一般包括样品的粗提、粗提物精制和抗体精纯3个步骤,每个步骤都涉及色谱分离技术。目前已有多种色谱技术(如亲和色谱、离子交换色谱、疏水作用色谱、混合模式色谱以及新型的温敏色谱等)应用于抗体的分离纯化。本文介绍了近年来国内外各种色谱技术在抗体分离纯化方面所取得的研究进展,并对抗体色谱分离技术的未来发展趋势进行了展望。 展开更多

关键词 抗体 色谱技术 分离纯化 亲和色谱 混合模式色谱 温敏色谱 综述

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胍变及脲变α-淀粉酶的研究 Ⅰ.用高效疏水色谱法研究变性机理和复性效率 被引量：7

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作者 白泉 卫引茂 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 1997年第4期284-287,共4页

用疏水性强弱不同的两种色谱柱对７．０ｍｏｌ／Ｌ盐酸胍及８．０ｍｏｌ／Ｌ脲变性的α－淀粉酶变体和在疏水色谱介质表面上折叠的中间体进行了分离和复性。通过研究和比较发现，两者的变性机理和形成折叠中间体的个数以及复性效率均不... 用疏水性强弱不同的两种色谱柱对７．０ｍｏｌ／Ｌ盐酸胍及８．０ｍｏｌ／Ｌ脲变性的α－淀粉酶变体和在疏水色谱介质表面上折叠的中间体进行了分离和复性。通过研究和比较发现，两者的变性机理和形成折叠中间体的个数以及复性效率均不相同。在用疏水性较弱的疏水色谱柱对脲变α－淀粉酶的折叠中间体进行分离时，得到了疏水性接近连续的、数目很多的中间体。用疏水性较强的疏水色谱柱对胍变α－淀粉酶进行复性的效果较好。还研究了柱温变化对其折叠、分离效果和复性效率的影响。 展开更多

关键词 高效疏水色谱 蛋白折叠 Α-淀粉酶 胍变 脲变

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用高效疏水色谱法对多种脲变α-淀粉酶折叠中间体的研究 被引量：6

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作者 白泉 卫引茂 +1 位作者 耿明晖 耿信笃 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 1997年第8期1291-1295,共5页

用高效疏水色谱法对用脲变性的α-淀粉酶的体外折叠中间体进行了分离，发现脲变α-淀粉酶折叠至少有19个中间体，而且，这些中间体在色谱流出液中可稳定一周．这一结论已由电泳、离子交换色谱和体积排阻色谱法证实．此外，还用紫外吸收... 用高效疏水色谱法对用脲变性的α-淀粉酶的体外折叠中间体进行了分离，发现脲变α-淀粉酶折叠至少有19个中间体，而且，这些中间体在色谱流出液中可稳定一周．这一结论已由电泳、离子交换色谱和体积排阻色谱法证实．此外，还用紫外吸收光谱和荧光发射光谱研究了这些折叠中间体与天然α-淀粉酶构象之间的差异． 展开更多

关键词 蛋白折叠 折叠中间体 Α淀粉酶 HPHIC α-Amy

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疏水色谱法的进展及其在生化研究中的应用 被引量：13

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作者 刘彤 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期30-34,共5页

着重评述了疏水色谱法的理论研究及疏水固定相中无机填料、有机填料、非多孔填料以及大孔膜的新发展，并对疏水色谱法在生物大分子的分离、纯化和生化研究中的应用，包括在蛋白质复性、折叠和分子构象变化等方面的应用作了介绍，全文包... 着重评述了疏水色谱法的理论研究及疏水固定相中无机填料、有机填料、非多孔填料以及大孔膜的新发展，并对疏水色谱法在生物大分子的分离、纯化和生化研究中的应用，包括在蛋白质复性、折叠和分子构象变化等方面的应用作了介绍，全文包括６２篇文献和一张表格。 展开更多

关键词 HIC 疏水色谱 固定相 生物大分子 分离

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用疏水色谱对还原型胍变性牛胰岛素的折叠特性研究 被引量：4

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作者 白泉 孔宇 耿信笃 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2002年第8期1483-1488,共6页

用疏水相互色谱 (HPHIC)对还原胍变性牛胰岛素在疏水界面上的折叠与复性进行了研究 .结果表明 ,采用普通流动相时 ,对还原胍变胰岛素的复性效果较差 ,而采用氧化型流动相可使其复性效率提高到 66% ,并用反相色谱 (RPLC)、紫外吸收光谱... 用疏水相互色谱 (HPHIC)对还原胍变性牛胰岛素在疏水界面上的折叠与复性进行了研究 .结果表明 ,采用普通流动相时 ,对还原胍变胰岛素的复性效果较差 ,而采用氧化型流动相可使其复性效率提高到 66% ,并用反相色谱 (RPLC)、紫外吸收光谱、荧光光谱及 MALDI-TOF对其复性效果进行了验证 .同时与体积排阻色谱 (SEC)和稀释法对还原胍变胰岛素的复性结果进行了比较 .结果表明 ,SEC根本无法使还原胍变胰岛素复性 ,而稀释法的复性效率仅有 2 % .这进一步表明 HPHIC是变性蛋白复性的有效工具 ,变性蛋白在疏水界面折叠过程中 ,蛋白质与固定相之间的疏水相互作用对蛋白折叠起着关键性的作用 。 展开更多

关键词 疏水色谱 还原型胍变性 牛胰岛素 折叠特性 蛋白 体积排阻色谱 稀释法 复性

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反相液相色谱中同系物体系实验点与预测方程参数间的匹配研究 被引量：4

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作者 王彦 张静 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期326-331,共6页

以波相色谱中溶质计量置换统一保留模型（SDM-R）的二参数、三参数和四参数方程为基础，研究了在预测同系物保留值时实验点与预测方程参数间的匹配关系。用两个实验点，分别以二、三和四参数方程对反相色谱中同系物保留值进行预测，发... 以波相色谱中溶质计量置换统一保留模型（SDM-R）的二参数、三参数和四参数方程为基础，研究了在预测同系物保留值时实验点与预测方程参数间的匹配关系。用两个实验点，分别以二、三和四参数方程对反相色谱中同系物保留值进行预测，发现预测值与实验值基本相符，但以二参数方程预测结果为最佳。又与其它保留方程的预测结果进行了比较，证实了上述结论。当实验点数增加到4～5个时，多参数方程预测同系物的准确度增加，且明显高于二参数方程。同时还讨论了方程中各参数与同系物碳数间的线性关系，发现二参数方程中的参数遵循同系物变化规律。然而无论实验点取多少，多参数方程均不服从这一规律。 展开更多

关键词 反相液相色谱 LC 预测 保留值 参数 同系物

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用于蛋白同时复性及纯化的制备型装置中流动相用量的优化研究 被引量：3

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作者 张养军 李翔 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期423-426,共4页

在生物大分子的高效液相色谱分离中 ,由计量置换保留模型可得出生物大分子在色谱柱上的保留行为取决于流动相中置换剂的浓度的结论。据此提出了用于蛋白同时复性及纯化的制备型装置 (USRPP)中最小流动相用量的估算公式 ,并进一步得出在... 在生物大分子的高效液相色谱分离中 ,由计量置换保留模型可得出生物大分子在色谱柱上的保留行为取决于流动相中置换剂的浓度的结论。据此提出了用于蛋白同时复性及纯化的制备型装置 (USRPP)中最小流动相用量的估算公式 ,并进一步得出在保持最小流动相用量不变的条件下 ,改变流动相流速和线性梯度时间几乎不影响制备型USRPP分离蛋白的分离度和复性效率的结论。该结论与实验结果一致。 展开更多

关键词 制备型高效液相色谱 计量置换保留模型 流动相 优化 生物大分子 分离 纯化 蛋白质

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醋酸水流动相体系中硅胶键合相上生物大分子保留行为的研究 被引量：2

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作者 张养军 申烨华 +1 位作者 张启东 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期487-490,共4页

提出了以醋酸 水作为流动相的体系中 ,在ODS柱上分离生物大分子的反相高效液相色谱 (RPLC)方法。实验结果表明 ,醋酸 水的洗脱能力强于甲醇 水 三氟醋酸体系 ,在一定程度上克服了色谱分离中一些蛋白质的不可逆吸附且具有便于冷冻干... 提出了以醋酸 水作为流动相的体系中 ,在ODS柱上分离生物大分子的反相高效液相色谱 (RPLC)方法。实验结果表明 ,醋酸 水的洗脱能力强于甲醇 水 三氟醋酸体系 ,在一定程度上克服了色谱分离中一些蛋白质的不可逆吸附且具有便于冷冻干燥的优点。用参数Z(1mol溶剂化溶质被溶剂化固定相吸附时从两者接触表面释放出置换剂的摩尔总数 ) ,logI(与 1mol溶质对固定相亲和势有关的常数 )和 j(与 1mol溶剂对固定相亲和势有关的常数 )对 9种蛋白质在此流动相体系中的保留进行了表征。该流动相使在RPLC中用于分离生物大分子的三元流动相体系成为二元流动相体系 ,更适合于理论研究。同时得出结论 :在醋酸 水体系中 ,蛋白质与固定相之间的作用力主要为非选择性作用力 ;蛋白质在醋酸 水和甲醇 水 展开更多

关键词 反相高效液相色谱法 生物大分子 保留行为 分离

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疏水界面上标准蛋白质吸附等温线的研究 被引量：6

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作者 边六交 耿信笃 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 1995年第2期201-205,共5页

测定了几种具有代表性的标准蛋白质在疏水色谱填料上的吸附等温线。除溶菌酶和牛血清白蛋白的吸附近似呈线性外，细胞色素－ｃ、肌红蛋白、胰岛素、α－淀粉酶和卵清蛋白均呈凸型吸附。用Ｌａｎｇｍｕｉｒ、计量置换吸附模型（ＳＤＭ－... 测定了几种具有代表性的标准蛋白质在疏水色谱填料上的吸附等温线。除溶菌酶和牛血清白蛋白的吸附近似呈线性外，细胞色素－ｃ、肌红蛋白、胰岛素、α－淀粉酶和卵清蛋白均呈凸型吸附。用Ｌａｎｇｍｕｉｒ、计量置换吸附模型（ＳＤＭ－Ａ）、ＢＥＴ和Ｊｏｖａｎｏｖｉｃ吸附模型对这些蛋白的吸附等温线拟合后发现，ＳＤＭ－Ａ关系式能够良好描述这７种蛋白的吸附，Ｌａｎｇｍｕｉｒ关系仅能较好地描述后５种蛋白质的吸附。而Ｊｏｖａｎｏｖｉｃ和ＢＥＴ关系式对上述两类蛋白质吸附的描述欠妥。实验发现对于不同盐浓度条件下卵清蛋白的吸附，用ＳＤＭ－Ａ和Ｌａｎｇｍｕｉｒ公式拟合所得的参数与盐浓度之间呈现出一定的规律性。 展开更多

关键词 吸附等温线 蛋白质 色谱

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高效疏水作用色谱法对还原变性溶菌酶的折叠研究 被引量：3

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作者 王彦 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期218-221,共4页

首次用高效疏水相互作用色谱(HPHIC)研究了还原变性溶菌酶(Lys)的复性。对还原变性Lys在3种疏水性不同的色谱柱上的复性情况进行了考察,发现还原变性Lys在疏水性最弱的XDM GM1型色谱柱上的复性效率最高,当Lys质量浓度为2 0g/L时,其复性... 首次用高效疏水相互作用色谱(HPHIC)研究了还原变性溶菌酶(Lys)的复性。对还原变性Lys在3种疏水性不同的色谱柱上的复性情况进行了考察,发现还原变性Lys在疏水性最弱的XDM GM1型色谱柱上的复性效率最高,当Lys质量浓度为2 0g/L时,其复性效率可达到94 6%。 展开更多

关键词 高效疏水相互作用色谱 还原变性 溶菌酶 蛋白质 折叠 复性

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用前沿色谱法测定蛋白质吸附等温线时增浓方式的研究 被引量：2

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作者 边六交 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 1995年第3期174-177,共4页

用连续前沿色谱法和断续前沿色谱法测定了七种标准蛋白在疏水色谱填料上的吸附等温线，两种方法之间存在着一定的差别。从流出曲线突跃处斜率测定的不确定性、色谱过程中动力学因素和实验方法本身存在的问题等几个方面探讨了误差的来源... 用连续前沿色谱法和断续前沿色谱法测定了七种标准蛋白在疏水色谱填料上的吸附等温线，两种方法之间存在着一定的差别。从流出曲线突跃处斜率测定的不确定性、色谱过程中动力学因素和实验方法本身存在的问题等几个方面探讨了误差的来源，指出了可能解决这一问题的途径。 展开更多

关键词 色谱法 疏水色谱 蛋白质 吸附等温线

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近期色谱研究的最新动态和进展 被引量：2

13

作者 白泉 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1117-1119,共3页

色谱是复杂样品分离分析的重要手段。当前复杂样品的分析对分离科学提出了越来越高的要求,而发展新型高效分离材料、分离模式和高灵敏度的检测方法是解决该问题的有效途径之一。本文依据2015年6至8月Analytical Chemistry新录用和在线... 色谱是复杂样品分离分析的重要手段。当前复杂样品的分析对分离科学提出了越来越高的要求,而发展新型高效分离材料、分离模式和高灵敏度的检测方法是解决该问题的有效途径之一。本文依据2015年6至8月Analytical Chemistry新录用和在线发表的有关论文,讨论色谱在样品前处理、固定相、手性拆分、分析检测、蛋白质组学等方面的最新研究动态和进展。 展开更多

关键词 手性拆分 蛋白质组学 分离科学 样品量 分子印迹 抗原决定基 模板分子 整体柱 蛋白质分离 磷酸化残基

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地椒绿色素的研究 被引量：1

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作者 申烨华 秦振平 周茂林 《延安大学学报（自然科学版）》 2000年第3期63-64,共2页

从地椒中提取出一种天然绿色素。初步研究了该色素的提取方法及理化性质 。

关键词 地椒 绿色素 稳定性 食品添加剂

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前沿洗脱色谱中溶质突破曲线的研究

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作者 边六交 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 1994年第5期317-319,共3页

考虑了溶质与色谱固定相间的相互作用和固定相表面上活性点总数不变以及溶质在柱内的质量平衡，推导出了描述溶质在前沿色谱中突破曲线的基本方程，对此方程的性质进行了初步讨论，并将实验测定的几种生物大分子的洗脱曲线与本文推导出... 考虑了溶质与色谱固定相间的相互作用和固定相表面上活性点总数不变以及溶质在柱内的质量平衡，推导出了描述溶质在前沿色谱中突破曲线的基本方程，对此方程的性质进行了初步讨论，并将实验测定的几种生物大分子的洗脱曲线与本文推导出的方程进行了比较，获得了结果的一致性。 展开更多

关键词 前沿色谱 突破曲线 溶质

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动力学因素对液相色谱分离整体蛋白的影响 被引量：3

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作者 闵一 陈刚 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期717-723,共7页

依据液相色谱分离整体蛋白的效果与色谱柱柱长基本无关的事实,研究了动力学因素对疏水相互作用色谱（HIC）分离整体蛋白的影响。首次提出了用于线性梯度洗脱条件下蛋白分离的“条件板高”（H）概念,并将其用于动力学因素对分离整体蛋白... 依据液相色谱分离整体蛋白的效果与色谱柱柱长基本无关的事实,研究了动力学因素对疏水相互作用色谱（HIC）分离整体蛋白的影响。首次提出了用于线性梯度洗脱条件下蛋白分离的“条件板高”（H）概念,并将其用于动力学因素对分离整体蛋白的影响的表征。分别用常用的色谱柱和色谱饼对标准蛋白进行了分离,绘制了类似于van Deemter的“条件板高”对流动相线速（u）的曲线图。发现对应于色谱柱最低“条件板高”的适合线速约为色谱饼的1/5～1/15,且色谱饼的适合线速范围也较色谱柱宽得多。据此,用装填有HIC填料的色谱饼（10mm×20mm i.d.）在12min内便可完全分离7种标准蛋白。还用装填有HIC填料的色谱饼对重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）进行了复性并同时纯化,在50min内,仅用一步色谱法就可获得纯度≥97%的rhG-CSF,其质量回收率为39%,比活〉1×10^8IU/mg。可以预计,装填极细颗粒的刚性色谱填料的色谱饼可在高负荷条件下进行整体蛋白的高速和高分离度的分离、纯化并同时复性,达到“三高”。 展开更多

关键词 疏水相互作用色谱 蛋白分离 分离度 色谱饼 动力学因素 生物工程 粒细胞集落刺激因子

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氨基己酸为配基的新型弱阳离子交换/疏水双功能色谱固定相对蛋白质的分离纯化 被引量：2

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作者 王建山 夏红军 +2 位作者 万广平 刘家玮 白泉 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1228-1233,共6页

以硅胶为基质、氨基己酸为配基制备了一种新型弱阳离子交换/疏水(WCX/HIC)双功能混合模式色谱固定相。该固定相配基具有一定的疏水性且含有羧基,在高盐浓度下表现为HIC的性质,可作为HIC固定相使用;在低盐浓度条件下表现为离子交换的性质... 以硅胶为基质、氨基己酸为配基制备了一种新型弱阳离子交换/疏水(WCX/HIC)双功能混合模式色谱固定相。该固定相配基具有一定的疏水性且含有羧基,在高盐浓度下表现为HIC的性质,可作为HIC固定相使用;在低盐浓度条件下表现为离子交换的性质,可作为WCX固定相使用。分别考察了该介质在WCX和HIC两种模式下对标准蛋白质的分离性能,并与商品柱进行比较。结果表明,所合成的WCX/HIC双功能固定相在WCX和HIC两种模式下对蛋白质均有较高的分离度和选择性,且分离能力与商品柱相当,两种模式下标准蛋白质的质量和活性回收率均大于93%,表明该柱具有"一柱二用"的功能,适于生物大分子的分离纯化。基于此双功能色谱柱构建的在线单柱二维液相色谱(2DLC-1C)可在60 min内实现8种蛋白质的快速分离。在70 min内完成了对蛋清中溶菌酶的二维纯化,纯度可达到98.3%。该技术中一根色谱柱可当作两根色谱柱使用,对蛋白质组学研究和重组蛋白药物的生产具有重要的应用价值。 展开更多

关键词 固定相 混合模式色谱 离子交换色谱 疏水色谱 二维液相色谱

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溶菌酶在疏水表面吸附的研究 被引量：1

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作者 吴雅妮 耿信鹏 +2 位作者 陈立成 耿信笃 邢建伟 《纺织高校基础科学学报》 CAS 2005年第1期1-6,共6页

采用摇床法,通过改变盐酸胍浓度和溶菌酶浓度测定不同温度下的变性溶菌酶(Lys)在疏水色谱填料PEG 600表面的吸附等温线.研究发现,25℃,35℃和45℃吸附达平衡所需时间分别为5h,4h和2h.原因可能是25℃时包覆作用显著,温度升高时,包覆作用... 采用摇床法,通过改变盐酸胍浓度和溶菌酶浓度测定不同温度下的变性溶菌酶(Lys)在疏水色谱填料PEG 600表面的吸附等温线.研究发现,25℃,35℃和45℃吸附达平衡所需时间分别为5h,4h和2h.原因可能是25℃时包覆作用显著,温度升高时,包覆作用消失,吸附容易达到平衡.改变盐酸胍浓度时,吸附量的变化与三种作用力,即去水合作用、亲合力及分子构象作用力的相对大小有关.0.8mol/LGuHCl吸附量达最大值,暗示蛋白可能发生了构象突变(至少是微扰).以吸附计量置换模型(SDM A)对溶菌酶的吸附等温线进行拟合的线性关系很好,表明SDM A适用于溶菌酶在液固界面上的吸附.SDM A热力学研究表明,变性溶菌酶折叠吸附过程中总的自由能ΔGP为负值,净吸附自由能ΔGA均比相应条件下的ΔGP的负值更大,而净解吸附自由能ΔGD均为正值.说明上述自发过程是由ΔGA作为驱动力的结果,符合吸附过程的一般规律. 展开更多

关键词 溶菌酶 疏水填料 吸附 吸附计量置换模型(SDM-A) 热力学

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牛胰腺中活性蛋白质的液相色谱分离纯化方法进展 被引量：1

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作者 杨晓明 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期199-204,共6页

牛胰腺中含有多种活性蛋白,其中许多蛋白已被开发为有利于人类健康的药物。从牛胰腺中分离纯化得到的蛋白药物是一种有高附加值的高技术产品。现代生物技术中所用的大多数有价值的活性蛋白产品的制备仍然依赖于不同的液相色谱法。本文... 牛胰腺中含有多种活性蛋白,其中许多蛋白已被开发为有利于人类健康的药物。从牛胰腺中分离纯化得到的蛋白药物是一种有高附加值的高技术产品。现代生物技术中所用的大多数有价值的活性蛋白产品的制备仍然依赖于不同的液相色谱法。本文综述了牛胰腺中活性蛋白质的提取方法以及以色谱分离为主的分离与纯化技术,为开展从天然产品中提取并应用蛋白质提供一定的参考。 展开更多

关键词 色谱 制备色谱 分离与纯化 蛋白药物 牛胰腺

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嵌段共聚温敏亲和色谱固定相的制备及其对抗体的分离纯化 被引量：1

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作者 郭冬梅 夏一然 +3 位作者 Mujeeb ur RAHMAN 王建忠 刘家玮 白泉 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期1045-1051,共7页

抗体药物在癌症治疗和免疫诊断中起着重要作用,但抗体的分离纯化通常采用酸性洗脱,易导致抗体聚集失活等问题。本研究以硅胶为基质,以温敏嵌段聚合物聚[(N-异丙基丙烯酰胺)-b-4-乙烯基吡啶](P[NIPAM-b-4VP])为间隔臂,以4-巯基乙基吡啶(M... 抗体药物在癌症治疗和免疫诊断中起着重要作用,但抗体的分离纯化通常采用酸性洗脱,易导致抗体聚集失活等问题。本研究以硅胶为基质,以温敏嵌段聚合物聚[(N-异丙基丙烯酰胺)-b-4-乙烯基吡啶](P[NIPAM-b-4VP])为间隔臂,以4-巯基乙基吡啶(MEP)为配基,制备了一种嵌段共聚温敏亲和色谱固定相SiO_(2)-P[NIPAM-b-4VP]-MEP,并以牛血清白蛋白(BSA)和γ-球蛋白为模型蛋白,对制备的温敏亲和色谱固定相的色谱性能进行了表征。分别考察了流动相盐浓度和温度对二者分离性能的影响。结果表明,在40℃时该固定相只选择性保留γ-球蛋白,而不保留BSA;在5℃时采用含0.6 mol/L NaCl的Tris-HCl(pH 8.0)缓冲溶液进行洗脱,γ-球蛋白的质量回收率为92.7%。该固定相对γ-球蛋白的吸附量为(71.5±2.1)mg/g(n=3),是传统温敏亲和色谱固定相SiO_(2)-PNIPAM-MEP的2倍。将该固定相用于人血清中IgG的分离纯化,仅通过改变流动相温度和盐浓度即可一步实现对抗体的分离纯化,纯度大于97.4%±0.7%。上述结果表明该温敏亲和色谱固定相不仅对抗体具有特异的选择性,而且洗脱条件温和,绿色环保,从根本上解决了传统亲和色谱采用酸性洗脱易使抗体蛋白变性失活的难题。该技术在抗体药物的分离纯化和工业生产中具有重要的应用价值。 展开更多

关键词 温敏色谱 亲和色谱 抗体分离 聚(N-异丙基丙烯酰胺) 4-乙烯基吡啶

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