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题名胎儿角膜上皮细胞分离方法的研究
被引量：3
- 1
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作者
屈雷
敬晓棋
闫海龙
窦忠英
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机构
榆林学院生命科学研究中心
西北农林科技大学陕西省干细胞工程技术研究中心
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出处
《国际眼科杂志》
CAS
2009年第2期250-253,共4页
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基金
中国国家自然科学基金项目(No.39970363)
中国国家重点基础研究发展规划项目(No.G1999054300)~~
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文摘
目的:为了利用流产儿角膜组织体外培养获取角膜上皮细胞,做为构建组织工程化角膜上皮的种子细胞。方法:收集30例(60个角膜)人流产胎儿,分别采用酶消化法、酶消化法结合组织块法和组织块法3种方法分离并培养人胎儿角膜上皮细胞。结果:用Dispase和胰蛋白酶冷消化角膜上皮后,在获取细胞总数、细胞活力和原代培养成功率上没有明显差异,但用Dispase消化后原代细胞容易成活,传代可得到纯化的上皮细胞;酶消化法结合组织块法培养时加入角膜缘组织块可以缩短细胞形成单层的时间,增加传代后细胞的活力;组织块法培养时,在胎儿全角膜组织培养时可得到角膜上皮细胞,角膜组织切割后培养不能获得纯化的角膜上皮细胞。结论:体外构建组织工程化角膜上皮时,种子细胞的获取可以采用流产儿角膜组织为材料分离并培养角膜上皮细胞。
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关键词
人胎儿
角膜细胞
分离
培养
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Keywords
abortive fetus
corneal cells
isolate
cultivate
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分类号
R772
[医药卫生—眼科]
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题名山羊核移植胚胎干细胞的分离培养
被引量：1
- 2
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作者
葛秀国
李吉霞
窦忠英
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机构
天津农学院动物科学系
西北农林科技大学陕西省干细胞工程技术研究中心
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出处
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2011年第7期4012-4014,共3页
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基金
国家高技术研究与发展项目(2005AA219050)
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文摘
比较了不同发育阶段山羊核移植胚胎分离培养胚胎干细胞(NT-ESCs)的情况。结果表明,各阶段山羊核移植胚胎均可分离出NT-ESCs,其中孵化胚的NT-ESCs克隆形成率最高(38%),与囊胚(26%)差异显著,与桑葚胚(18%)差异极显著。所分离的NT-ESCs细胞形态与正常ESCs相似,均具有碱性磷酸酶活性,可表达多能性基因Oct-4和表面标志抗原SSEA-1。
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关键词
山羊
核移植
胚胎干细胞
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Keywords
Goat
Nuclear transplantation
Embryonic stem cells
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分类号
S826.94
[农业科学—畜牧学]
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题名免疫外科法分离山羊囊胚内细胞团的研究
- 3
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作者
杨炜峰
葛秀国
华进联
窦忠英
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机构
西北农林科技大学陕西省干细胞工程技术研究中心
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出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第6期560-565,共6页
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基金
科技部"863"项目(2005AA219050)
教育部重大项目(03160)
陕西省重点项目资助
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文摘
分别用关中奶山羊脾脏细胞和胎儿成纤维细胞,免疫新西兰白兔各2只,共4只.通过3次静脉注射,每次注射4×108个细胞,间隔10 d,最后一次注射10 d后心脏采血制备抗血清,结果获得的4份抗血清均具有细胞毒性,由脾脏细胞免疫获得的抗血清溶解细胞的效价稍高.超排关中奶山羊24只和波尔山羊3只,6～9 d采胚共获得胚胎240枚,其中囊胚106枚,结果显示配种后7～9 d胚胎的发育阶段适宜于分离内细胞团（ICM）.细胞毒性试验表明,抗血清对关中奶山羊红细胞、囊胚和波尔山羊囊胚均具有细胞毒性作用.通过比较抗血清50%溶解山羊红细胞效价与溶解囊胚滋养层细胞效价的差异,发现后者的适宜效价是抗血清50%溶解山羊红细胞效价的22～23倍,表明采用易于获得的山羊红细胞作预试验可以为免疫外科分离山羊ICM提供抗血清稀释比例参考.免疫外科法分离ICM采用两步法进行,获得最佳参数如下：抗血清稀释比例为1∶4～1∶15,补体稀释比例为1∶20,先在抗血清中作用30 min,再在补体中作用20～30 min,吹打除去溶解的滋养层细胞后即可获得ICM.分离得到的ICM形态特征与胚胎质量密切相关.山羊ICM接种于丝裂霉素处理过的小鼠胎儿成纤维细胞饲养层后,2 d内贴壁.4～7 d后,ICM增殖为胚胎干细胞样集落,其周围出现大量空泡样细胞.
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关键词
山羊
抗血清
补体
免疫外科
内细胞团
细胞毒性
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Keywords
goat
antiserum
complement
immunosurgery
inner cell mass
cytotoxicity
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分类号
S826.3
[农业科学—畜牧学]
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题名人类胚胎干细胞标准的建立
- 4
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作者
杨玉艾
华进联
马勇江
窦忠英
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机构
西北农林科技大学陕西省干细胞工程技术研究中心
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出处
《动物医学进展》
CSCD
2004年第1期129-130,共2页
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文摘
人类胚胎干细胞 (HESCs)在人类发育生物学研究及再生医学中具有重要的应用前景。人们在 HESCs建系及其分化研究上已取得一些进展 ,但各个细胞系的生物学特性有一定差异 ,文章讨论了有关 HESCs的标准及相关问题。
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关键词
人类胚胎干细胞
发育生物学
再生医学
HESCs建系
生物学特性
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分类号
Q987
[生物学—遗传学]
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题名牛胚胎生殖细胞的分离与培养
被引量：5
- 5
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作者
葛秀国
徐小明
华进联
杨继建
窦忠英
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机构
西北农林科技大学陕西干细胞工程技术研究中心
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出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第12期1275-1280,共6页
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基金
国家自然科学基金资助项目(30070374302000137)
国家863项目(2002AA216161)
教育部重大项目(03160)
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文摘
以牛胎儿为材料,从原始生殖细胞(PGC)分离培养出胚胎生殖细胞(EG),并进行传代和鉴定,对影响胚胎生殖细胞分离与培养的因素进行了探讨,研究发现以共培养方式培养牛原始生殖细胞时,原代培养都可以出现大量形态较好的EG细胞集落,说明同源的体细胞可以很好地支持PGC的生长和增殖,组织块培养细胞克隆数目较少,PGC很难增殖,不能形成典型的集落,传代也不理想,只传了一代。同时比较了不同传代方法对牛胚胎生殖细胞细胞传代的影响,发现消化+机械分离法和消化+吹打法都可以用于EG细胞的传代。消化+吹打法操作简单,省时省力,也能够很好的保持细胞的增殖活力。原代培养的牛原代胚胎生殖细胞进行了细胞表面标志抗原SSEA-1,3,4鉴定,呈弱阳性。细胞体外培养可以分化为成纤维样细胞、上皮样细胞和类胚体。
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关键词
牛
原始生殖细胞
胚胎干细胞
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Keywords
bovine
embryonic stem cell
primordial germ cell
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分类号
S858.27
[农业科学—临床兽医学]
S858.23
[农业科学—临床兽医学]
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