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PEG介导的棉花枯萎病菌原生质体转化体系的建立
被引量：
18
1
作者
徐齐君
胡小平
+1 位作者
陈婷
赵俊兴
《棉花学报》
CSCD
北大核心
2012年第3期222-228,共7页
通过酶解尖孢镰刀菌萎蔫专化型(Fusarium oxysporum f.sp.vasinfectum)FOV1和FOV4菌株幼嫩菌丝的细胞壁产生原生质体,PEG8000介导外源DNA随机插入的方法,分别获得具有抗潮霉素及荧光信号的转化子27个和39个,转化效率(以单位质量的DNA的...
通过酶解尖孢镰刀菌萎蔫专化型(Fusarium oxysporum f.sp.vasinfectum)FOV1和FOV4菌株幼嫩菌丝的细胞壁产生原生质体,PEG8000介导外源DNA随机插入的方法,分别获得具有抗潮霉素及荧光信号的转化子27个和39个,转化效率(以单位质量的DNA的转化子数计)分别为1350 mg-1和1950 mg-1。选取FOV1和FOV4菌株的代表性转化子各3株,经过5代继代培养后,其产孢量、荧光稳定性和致病性均无明显变化。因此,可以认为棉花枯萎菌原生质体的这种转化方法是一种比较稳定高效的遗传转化体系。
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关键词
GFP
尖孢镰刀菌
原生质体
转化
荧光信号检测
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职称材料
陕西烟区烟草脉带花叶病毒外壳蛋白基因的克隆和原核表达
被引量：
1
2
作者
刘萍
纪玲玲
+2 位作者
郝兴安
吴云锋
成巨龙
《中国烟草学报》
EI
CAS
CSCD
2011年第5期87-89,95,共4页
根据烟草脉带花叶病毒(TVBMV)CP序列合成上下游引物,利用RT-PCR方法获得了(TVBMV)CP基因。序列分析表明,TVBMV CP基因全长813nt,编码271个氨基酸;与GenBank中已报道的9个分离CP基因相比,其核苷酸及氨基酸序列同源性分别为90.28%-98.15%...
根据烟草脉带花叶病毒(TVBMV)CP序列合成上下游引物,利用RT-PCR方法获得了(TVBMV)CP基因。序列分析表明,TVBMV CP基因全长813nt,编码271个氨基酸;与GenBank中已报道的9个分离CP基因相比,其核苷酸及氨基酸序列同源性分别为90.28%-98.15%和97.05%-100%。将TVBMV CP基因经BamHI/NotI双酶切定向插入到pET30a载体中,构建了原核表达载体pET30-TVBMV CP,重组质粒经BamHI和NotI双酶切鉴定及基因测序验证正确后,用IPTG进行诱导表达。结果表明:TVBMV CP在大肠杆菌中获得了高效表达,表达产物的分子量为37 kD。用表达产物为抗原免疫家兔制备了特异性抗血清,其效价为1/2048。用Western-blot检测田间样品,其结果表明,制备的抗血清可用于检测田间的发病植株。
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关键词
烟草脉带花叶病毒
外壳蛋白
原核表达
抗血清
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职称材料
题名
PEG介导的棉花枯萎病菌原生质体转化体系的建立
被引量：
18
1
作者
徐齐君
胡小平
陈婷
赵俊兴
机构
西北农林科技大学植保学院与旱区作物逆境生物学国家重点实验室
西北农林科技大学
农
学院
棉花研究所
出处
《棉花学报》
CSCD
北大核心
2012年第3期222-228,共7页
基金
陕西省自然科学基金(No.2010JM3018)
高等学校学科创新引智计划项目(B07049)
+1 种基金
教育部新世纪优秀人才支持计划项目(NCET-07-0698)
中央高校基本科研业务费专项资金(QN2009034)
文摘
通过酶解尖孢镰刀菌萎蔫专化型(Fusarium oxysporum f.sp.vasinfectum)FOV1和FOV4菌株幼嫩菌丝的细胞壁产生原生质体,PEG8000介导外源DNA随机插入的方法,分别获得具有抗潮霉素及荧光信号的转化子27个和39个,转化效率(以单位质量的DNA的转化子数计)分别为1350 mg-1和1950 mg-1。选取FOV1和FOV4菌株的代表性转化子各3株,经过5代继代培养后,其产孢量、荧光稳定性和致病性均无明显变化。因此,可以认为棉花枯萎菌原生质体的这种转化方法是一种比较稳定高效的遗传转化体系。
关键词
GFP
尖孢镰刀菌
原生质体
转化
荧光信号检测
Keywords
GFP
Fusarium oxysporum
protoplast
transformation
fluorescence signal detection
分类号
S435.621 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
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职称材料
题名
陕西烟区烟草脉带花叶病毒外壳蛋白基因的克隆和原核表达
被引量：
1
2
作者
刘萍
纪玲玲
郝兴安
吴云锋
成巨龙
机构
西北农林科技大学植保学院与旱区作物逆境生物学国家重点实验室
陕西省烟草研究所
出处
《中国烟草学报》
EI
CAS
CSCD
2011年第5期87-89,95,共4页
基金
中国烟草总公司科技重点项目(110200902046)
陕西省烟草公司科学研究与技术开发项目(KJ-19-2008)
高等学校学科创新引智计划(No.B07049)
文摘
根据烟草脉带花叶病毒(TVBMV)CP序列合成上下游引物,利用RT-PCR方法获得了(TVBMV)CP基因。序列分析表明,TVBMV CP基因全长813nt,编码271个氨基酸;与GenBank中已报道的9个分离CP基因相比,其核苷酸及氨基酸序列同源性分别为90.28%-98.15%和97.05%-100%。将TVBMV CP基因经BamHI/NotI双酶切定向插入到pET30a载体中,构建了原核表达载体pET30-TVBMV CP,重组质粒经BamHI和NotI双酶切鉴定及基因测序验证正确后,用IPTG进行诱导表达。结果表明:TVBMV CP在大肠杆菌中获得了高效表达,表达产物的分子量为37 kD。用表达产物为抗原免疫家兔制备了特异性抗血清,其效价为1/2048。用Western-blot检测田间样品,其结果表明,制备的抗血清可用于检测田间的发病植株。
关键词
烟草脉带花叶病毒
外壳蛋白
原核表达
抗血清
Keywords
tobacco vein banding mosaic virus
coat protein
prokaryotic expression
antiserum
分类号
S435.72 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
PEG介导的棉花枯萎病菌原生质体转化体系的建立
徐齐君
胡小平
陈婷
赵俊兴
《棉花学报》
CSCD
北大核心
2012
18
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
陕西烟区烟草脉带花叶病毒外壳蛋白基因的克隆和原核表达
刘萍
纪玲玲
郝兴安
吴云锋
成巨龙
《中国烟草学报》
EI
CAS
CSCD
2011
1
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职称材料
已选择
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参考文献
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