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山羊子宫内膜基质细胞的分离培养及鉴定 被引量：9
1
作者 吴庆侠 丰艳妮 +3 位作者 楚元奎 吴瑞 崔贞亮 靳亚平 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2007年第4期11-14,18,共5页
对山羊子宫内膜基质细胞进行分离与体外培养,研究其生长特性,并对其进行免疫细胞化学染色鉴定。结果表明,山羊子宫内膜在37℃条件下,以2 g／L的胶原酶Ⅰ型消化3～4 h效果最好;采用过滤—低速离心—沉降相结合的方法分离山羊子宫内膜基... 对山羊子宫内膜基质细胞进行分离与体外培养,研究其生长特性,并对其进行免疫细胞化学染色鉴定。结果表明,山羊子宫内膜在37℃条件下,以2 g／L的胶原酶Ⅰ型消化3～4 h效果最好;采用过滤—低速离心—沉降相结合的方法分离山羊子宫内膜基质细胞效果较好,所得细胞在培养后0．5 h开始贴壁,培养12 h后,可见梭形和多角形2种形态的细胞,3～4 d呈网状铺满皿底,有明显的重叠生长现象;免疫细胞化学染色显示这2种形态的细胞均表达波形蛋白,阳性率可达95％以上,不表达角蛋白。说明采用本文所述的消化和分离方法可获得高纯度的子宫内膜基质细胞。 展开更多
关键词 山羊 子宫内膜 基质细胞 免疫细胞化学
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家兔子宫内膜细胞和平滑肌细胞的分离培养及鉴定 被引量：7
2
作者 李瑞梅 陈秀荔 +1 位作者 王海滨 靳亚平 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2007年第6期19-23,共5页
为了建立一种高效的子宫细胞分离培养方法,用酶消化、过滤、离心与差速贴壁纯化相结合的方法分离培养家兔子宫细胞,分别以上皮细胞角蛋白、波形蛋白、α-平滑肌肌动蛋白等为抗原的免疫荧光对分离培养的细胞进行鉴定,并采用流式细胞仪分... 为了建立一种高效的子宫细胞分离培养方法,用酶消化、过滤、离心与差速贴壁纯化相结合的方法分离培养家兔子宫细胞,分别以上皮细胞角蛋白、波形蛋白、α-平滑肌肌动蛋白等为抗原的免疫荧光对分离培养的细胞进行鉴定,并采用流式细胞仪分析细胞纯度。结果表明,家兔子宫内膜上皮细胞培养24 h后大部分贴壁,培养3 d左右形成单层细胞集落,呈角蛋白阳性,细胞圆形或椭圆形,胞质呈红色,核呈蓝色,纯度达96%以上;子宫内膜基质细胞培养0.5 h后即有贴壁,培养2 d后呈单层细胞集落状生长,呈波形蛋白阳性,细胞多边形或梭形,胞质呈红色,核呈蓝色,纯度达95%以上;平滑肌细胞培养24 h后大部分贴壁,6-7 d融合成片,呈α-平滑肌肌动蛋白阳性,细胞大都长梭形,胞质呈红色,核呈蓝色,纯度达98%以上。说明该方法能够成功分离并得到高产量、高纯度、高增殖能力的子宫内膜细胞及平滑肌细胞。 展开更多
关键词 动物细胞培养 子宫内膜上皮细胞 子宫内膜基质细胞 子宫平滑肌细胞 家兔
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醋酸铅对小鼠精子发生毒性研究 被引量：3
3
作者 马保华 宋小飞 +2 位作者 艾小云 王有柱 郝捷 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2005年第6期49-52,共4页
　采用腹腔注射染毒法,将体重(16±1)g的性成熟期公鼠随机分为高剂量(1/10LD50)、中剂量(1/50LD50)、低剂量(1/250LD50)染毒组和溶剂对照组,每组10只,高、中、低剂量染毒组于试验的第0,3,6,9和12天以0.01mL/g注射量,分别腹腔注射1.2... 　采用腹腔注射染毒法,将体重(16±1)g的性成熟期公鼠随机分为高剂量(1/10LD50)、中剂量(1/50LD50)、低剂量(1/250LD50)染毒组和溶剂对照组,每组10只,高、中、低剂量染毒组于试验的第0,3,6,9和12天以0.01mL/g注射量,分别腹腔注射1.20,0.24,0.048g/L的醋酸铅[Pb(CH3COO)2·3H2O]溶液,对照组注射灭菌蒸馏水。30d后,处死小鼠,采集输精管精子,研究醋酸铅对小鼠精子的发生毒性。结果表明:(1)各试验组公鼠的睾丸、附睾湿重及其与体重的比值均无明显差异(P>0.05);(2)采用输精管精子进行精子发生毒性检验是可行的;(3)各试验组公鼠精子相对密度及精子活力无统计学差异(P>0.05);(4)各染毒组公鼠畸形精子比率显著高于对照组(P<0.01);(5)高剂量和中剂量试验公鼠输精管顶体异常精子比率与对照组之间差异显著(P<0.05)。说明本试验所用醋酸铅剂量未明显影响性成熟期公鼠的性腺发育及精子密度和活力,各剂量醋酸铅染毒显著影响了精子的形态发生和顶体形成。 展开更多
关键词 醋酸铅 精子发生 毒性 小鼠
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Aroclor 1254对小鼠精子受精能力与受精卵发育的毒性研究 被引量：2
4
作者 马保华 王建华 +4 位作者 史志诚 严兴荣 冯若鹏 冉林武 王志东 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2005年第5期1-4,共4页
采用腹腔注射染毒法研究了Aroclor1254对公鼠精子受精能力及受精卵发育的毒性。将体重(18±3)g的性成熟期公鼠随机分为1/10LD50,1/50LD50,1/250LD50和1/1250LD504个染毒组及稀释剂对照组,染毒组公鼠于试验的第0,3,6天,按照0.01mL/g... 采用腹腔注射染毒法研究了Aroclor1254对公鼠精子受精能力及受精卵发育的毒性。将体重(18±3)g的性成熟期公鼠随机分为1/10LD50,1/50LD50,1/250LD50和1/1250LD504个染毒组及稀释剂对照组,染毒组公鼠于试验的第0,3,6天,按照0.01mL/g的注射量,分别注射用灭菌花生油稀释的20,4,0.8,0.16mg/mLAroclor1254溶液,稀释剂对照组注射灭菌花生油。试验开始40d后,用各组公鼠对未染毒的超排母鼠配种。结果表明,用高剂量Aroclor1254染毒公鼠对超排的正常母鼠进行配种时,会显著降低受精卵比例(P<0.01)和受精卵的卵裂率(P<0.05),并出现受精卵首次卵裂延迟。在受精卵的进一步发育中,随着公鼠染毒剂量的增加,发育到桑椹胚和囊胚的比例显著降低,发育延迟胚及发育中退化变性胚比率显著升高。据此认为,Aroclor1254能明显影响小鼠精子受精能力,并影响受精卵的进一步发育。 展开更多
关键词 受精力 胚胎发育 毒性 多氯联苯 小鼠
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培养液中血清或其替代物对牛体外受精卵体外发育的影响 被引量：3
5
作者 刘赛 陈静波 +3 位作者 原巨强 海丽且木 赵晓娥 马保华 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2007年第12期3556-3557,3613,共3页
探讨在牛体外受精卵体外培养液中添加血清替代品对体外受精卵发育的影响,确定血清在SOF培养液中合适的添加浓度及添加时期,以筛选优良的牛体外受精卵体外培养液。在SOF液中分别添加10%血清(NBS)8、mg/ml牛血清白蛋白(BSA)和1 mg/ml聚乙... 探讨在牛体外受精卵体外培养液中添加血清替代品对体外受精卵发育的影响,确定血清在SOF培养液中合适的添加浓度及添加时期,以筛选优良的牛体外受精卵体外培养液。在SOF液中分别添加10%血清(NBS)8、mg/ml牛血清白蛋白(BSA)和1 mg/ml聚乙烯醇(PVA)进行牛体外受精卵的全程培养,添加NBS组的卵裂率(66.3%)显著高于添加BSA组(51.0%)(P<0.05),极显著高于添加PVA组(47.6%)(P<0.01);添加NBS组的囊胚发育率(30.9%)显著高于添加PVA组(20.7%)(P<0.05),极显著高于添加BSA组(13.6%)(P<0.01)。在培养液中添加不同浓度(10%、5%)的NBS及无血清培养液全程培养时,3组之间卵裂率(65.6%、60.0%、58.0%)差异不显著(P>0.05);10%NBS组囊胚发育率(30.0%)极显著高于5%NBS组(17.6%)和无血清组(6.0%)(P<0.01)。5%NBS组的囊胚发育率极显著地高于无血清组(P<0.01)。在受精卵培养的最初48 h用5%NBS,之后用10%NBS培养液时,卵裂率(58.6%)和囊胚发育率(29.3%)与SOF+10%NBS全程培养组(66.3%、30.9%)差异都不显著(P>0.05)。试验结果表明,SOF培养液中添加PVA、BSA替代血清时卵裂率和囊胚发育率都明显下降,可能SOF培养液中添加血清比添加PVA或BSA更有利于牛体外受精卵的体外发育。体外培养时在SOF培养液中添加一定浓度的血清以及改变血清的添加方式,可提高牛体外受精卵体外发育效果。 展开更多
关键词 体外受精 牛血清白蛋白 聚乙烯醇 血清 体外培养 牛
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NRID主成分在山羊体内的释放规律 被引量：1
6
作者 马保华 杨亚提 +7 位作者 田秀娥 王志东 于志峰 黄建锋 张红 李键 陈玉林 王永军 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2007年第12期53-56,62,共5页
为了分析NRID主成分炔诺酮在山羊体内的释放规律,春季在甘肃天水用本地山羊、秋季在四川成都用关中奶山羊各108只进行体内试验。试验羊在同一天阴道放置羊用NRID,以放置NRID当天为0 d,从放置NRID的次日(1 d)起,每天分别随机取出6只羊的N... 为了分析NRID主成分炔诺酮在山羊体内的释放规律,春季在甘肃天水用本地山羊、秋季在四川成都用关中奶山羊各108只进行体内试验。试验羊在同一天阴道放置羊用NRID,以放置NRID当天为0 d,从放置NRID的次日(1 d)起,每天分别随机取出6只羊的NRID,直到18 d全部回收结束。在实验室用丙酮溶解,并用紫外线分光光度仪测定每枚NRID内炔诺酮剩余量,计算每枚NRID内炔诺酮释放量,模拟分析NRID主成分炔诺酮在山羊体内的释放规律。结果表明,在春季和秋季,山羊体内放置的NRID中,炔诺酮的总释放规律是前期释放速度较快,之后释放速度逐渐降低,并呈现缓慢持续释放的特点。由此可以估测山羊阴道内每天NRID中炔诺酮的释放量,并可为建立NRID的应用程序提供理论依据。 展开更多
关键词 炔诺酮 体内释放 炔诺酮阴道缓慢释放装置 山羊
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不同因素对牛卵母细胞胞质内精子注射效果的影响 被引量：1
7
作者 原巨强 陈静波 +3 位作者 刘赛 海里且木 赵晓娥 马保华 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期8-13,共6页
采用胞质内精子注射法(ICSI)构建牛显微受精胚胎,探讨卵母细胞成熟培养时间、精子状态及精子操作液中聚乙烯吡咯烷酮(PVP)浓度对牛卵母细胞胞质内显微受精(ICSI)卵体外发育的影响。结果显示:成熟培养20 h、24 h和28 h的卵母细胞用于ICSI... 采用胞质内精子注射法(ICSI)构建牛显微受精胚胎,探讨卵母细胞成熟培养时间、精子状态及精子操作液中聚乙烯吡咯烷酮(PVP)浓度对牛卵母细胞胞质内显微受精(ICSI)卵体外发育的影响。结果显示:成熟培养20 h、24 h和28 h的卵母细胞用于ICSI时,ICSI卵的形态完整率分别为94.6%(175/185)、97.2%(173/178)和96.4%(189/196)(P>0.05);成熟培养24 h和28 h的卵母细胞,其ICSI卵的卵裂率(73.4%和70.9%)和囊胚发育率(31.8%和29.6%)显著高于成熟培养20 h的卵母细胞(61.1%和20.6%)(P<0.05)。对成熟培养24 h的卵母细胞注射获能精子时,ICSI卵的卵裂率和囊胚发育率(72.7%和31.4%)高于未获能精子组(69.4%和29.3%)和不运动精子组(71.5%和30.4%),但无统计学差异(P>0.05)。采用含5%,10%和15%PVP的精子操作液处理获能精子后对成熟培养24 h的卵母细胞进行ICSI操作,PVP浓度为5%和10%时,ICSI卵的卵裂率(73.2%和66.9%)和囊胚发育率(32.7%和29.7%)差异不显著(P>0.05),但二者均显著高于15%PVP浓度组的卵裂率和囊胚发育率(51.0%和16.3%)(P<0.01)。结论认为,选用获能精子,并使用含5%PVP的精子操作液进行处理,对成熟培养24 h的牛卵母细胞进行ICSI操作,有利于ICSI卵的体外发育。 展开更多
关键词 显微受精 卵母细胞体外成熟 精子状态 聚乙烯吡咯烷酮 ICSI卵体外培养 牛
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E_2、P_4、OT和PGF_(2α)对猪PBMC活性的影响
8
作者 吴瑞 楚元奎 +2 位作者 丰艳妮 吴庆侠 靳亚平 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期52-54,66,共4页
应用MTT比色法,以四因素四水平L16(45)的正交试验测定E2、P4、OT和PGF2α四种激素对猪的外周血单个核细胞(PBMC)的转化效果。结果显示,所选的4种激素在不同浓度组合时刺激PBMC转化的作用不同。这4种激素对PBMC的转化影响的强度依次为:P... 应用MTT比色法,以四因素四水平L16(45)的正交试验测定E2、P4、OT和PGF2α四种激素对猪的外周血单个核细胞(PBMC)的转化效果。结果显示,所选的4种激素在不同浓度组合时刺激PBMC转化的作用不同。这4种激素对PBMC的转化影响的强度依次为:PGF2α、OT、E2、P4。在试验剂量范围内,E20.1 pg/mL、P41 ng/mL、OT 10 pg/mL、PGF2α100 ng/mL时,其共同作用对PBMC转化活性最强。提示在不同生理时期,由于机体内各种激素浓度变化不同,免疫系统也发生相应的变化。 展开更多
关键词 激素 淋巴细胞 正交试验
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间接ELISA法检测促卵泡素抗体方法的建立
9
作者 李红飞 崔贞亮 靳亚平 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2006年第17期4223-4224,4226,共3页
建立了检测促卵泡素(FSH)抗体的间接ELISA方法,用该法检测由FSH-BSA免疫BaLb/c小鼠所分离的5份待检血清,结果均为阳性。通过反复试验,确立间接ELISA检测FSH抗体的最佳反应条件,即酶标二抗工作浓度为1∶1 200,抗原包被浓度10μg/mL,待测... 建立了检测促卵泡素(FSH)抗体的间接ELISA方法,用该法检测由FSH-BSA免疫BaLb/c小鼠所分离的5份待检血清,结果均为阳性。通过反复试验,确立间接ELISA检测FSH抗体的最佳反应条件,即酶标二抗工作浓度为1∶1 200,抗原包被浓度10μg/mL,待测血清最佳稀释度为1∶500,封闭液为1.0%的脱脂奶粉,同时设置抗原阻断试验对结果进行验证。 展开更多
关键词 促卵泡素 完全抗原 酶联免疫吸附试验
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