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雄性关中奶山羊胎儿生殖细胞增殖分化的研究
被引量：
3
1
作者
刘超
朱海鲸
+4 位作者
刘维帅
郑伟俊
王静
杨春荣
华进联
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第9期1328-1336,共9页
旨在阐明山羊胚性腺的发生规律,这对于山羊的繁殖育种、丰富胚胎学有关研究内容都具有重要意义。该研究对22枚从39日胎龄胎儿至初生奶山羊性腺进行石蜡组织切片,用组织学和免疫组化、免疫荧光方法对山羊胎儿性腺发育的组织学特点,山羊...
旨在阐明山羊胚性腺的发生规律,这对于山羊的繁殖育种、丰富胚胎学有关研究内容都具有重要意义。该研究对22枚从39日胎龄胎儿至初生奶山羊性腺进行石蜡组织切片,用组织学和免疫组化、免疫荧光方法对山羊胎儿性腺发育的组织学特点,山羊胎儿性腺发育过程中VASA及细胞增殖核抗原(PCNA)的表达规律进行了系统研究。结果表明:奶山羊性腺在39～47日胎龄时已出现精索和白膜,已发生性别分化,并可分辨出生殖细胞、支持细胞及间质细胞,细胞增殖率较高。在大约50日胎龄前生殖细胞可称作性原细胞,细胞为球形、核质比高。在51～59日胎龄,生殖细胞发生剧烈变化:体积增大、核质比降低。此后逐渐由性原细胞发育为前精原细胞,并且在此期间表达VASA的生殖细胞增多。50～90日胎龄,生殖细胞增殖率最高,生殖细胞所占比例也达到峰值。在90日胎龄后生殖细胞增殖率下降,比例下降,间质细胞大量退化。结果表明,山羊胎儿的生殖细胞在50日胎龄后由性原细胞发育为前精原细胞,生殖细胞在50～90日胎龄的增殖率最高,VASA可作为雄性山羊胎儿前精原细胞的标记。
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关键词
胎儿性腺
分化
雄性
奶山羊
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职称材料
微量牛卵中H1 foo CDS序列的克隆及其mRNA向卵内显微注射
被引量：
6
2
作者
云彦
吴苏君
+2 位作者
隋进强
胡勇策
雷安民
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第11期1630-1637,共8页
本研究旨在优化从微量卵中克隆基因的条件,并构建牛H1foo基因真核表达载体。首先将微量（1~5个）卵母细胞裂解后,用改进的RT-PCR方法扩增内参β-actin基因以检测该方法扩增基因的效率,结果表明单卵扩增成功率为80%以上（10/12）,3个、5...
本研究旨在优化从微量卵中克隆基因的条件,并构建牛H1foo基因真核表达载体。首先将微量（1~5个）卵母细胞裂解后,用改进的RT-PCR方法扩增内参β-actin基因以检测该方法扩增基因的效率,结果表明单卵扩增成功率为80%以上（10/12）,3个、5个卵扩增成功率均达100%。利用该体系从微量（5个）牛卵中克隆得到H1fooCDS全长序列,测序结果显示其与GenBank上公布序列同源性为100%。将牛H1fooCDS连接至pMD19-T载体上,经酶切、测序鉴定正确后定向亚克隆到真核表达载体pVenus上,鉴定正确后命名为pVenus-H1foo。利用脂质体2000将pVenus-H1foo转染Hela细胞,24 h后通过荧光显微镜观察、RT-PCR、Western Blotting分别检测表明其能够正确表达。将H1foo体外转录为mRNA后直接注射卵母细胞,其表达产物能准确定位于卵母细胞及极体的染色体上。结果,成功构建了牛H1foo真核表达载体pVenus-H1foo,为研究该基因在卵母细胞成熟及早期胚胎发育过程中的作用奠定了基础。
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关键词
微量卵母细胞
RT-PCR
牛H1
foo基因
体外转录
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职称材料
小鼠H1foo基因四环素诱导表达系统的构建与表达
被引量：
1
3
作者
李建
宁静
+2 位作者
陈西锐
宋成艳
雷安民
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第5期757-762,共6页
卵母细胞特异性连接组蛋白H1foo(Linker histone H1foo)是连接组蛋白H1(Histone 1)在卵母细胞中特异性表达的1个亚型,H1foo在卵母细胞减数分裂和成熟发育过程中起着不可替代的作用,而且H1foo也参与了重编程过程。为了在体细胞中进一步研...
卵母细胞特异性连接组蛋白H1foo(Linker histone H1foo)是连接组蛋白H1(Histone 1)在卵母细胞中特异性表达的1个亚型,H1foo在卵母细胞减数分裂和成熟发育过程中起着不可替代的作用,而且H1foo也参与了重编程过程。为了在体细胞中进一步研究H1foo的功能,本试验通过采用四环素诱导表达载体系统,用PCR的方法扩增了小鼠的H1foo基因和四环素诱导表达系统(Tet-on)的启动子区。用双酶切和连接等方法将上述元件连接到真核表达载体pVenus上,构建了重组质粒pVenus-tet-CMV-H1foo。双酶切和测序结果显示,片段连接正确,且全长测序正确。本试验所构建的四环素诱导的小鼠H1foo真核表达系统有助于人们在体细胞中更好地探讨H1foo在特定时间的作用和功能。
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关键词
小鼠
H1foo基因
四环素诱导表达系统
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职称材料
题名
雄性关中奶山羊胎儿生殖细胞增殖分化的研究
被引量：
3
1
作者
刘超
朱海鲸
刘维帅
郑伟俊
王静
杨春荣
华进联
机构
西北农林科技大学动物医学院陕西省干细胞工程技术研究中心陕西省农业分子生物学重点实验室
杨凌示范区医院病理科
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第9期1328-1336,共9页
基金
国家自然科学基金(30972097)
教育部新世纪优秀人才支持计划(NCET-09-0654)
文摘
旨在阐明山羊胚性腺的发生规律,这对于山羊的繁殖育种、丰富胚胎学有关研究内容都具有重要意义。该研究对22枚从39日胎龄胎儿至初生奶山羊性腺进行石蜡组织切片,用组织学和免疫组化、免疫荧光方法对山羊胎儿性腺发育的组织学特点,山羊胎儿性腺发育过程中VASA及细胞增殖核抗原(PCNA)的表达规律进行了系统研究。结果表明:奶山羊性腺在39～47日胎龄时已出现精索和白膜,已发生性别分化,并可分辨出生殖细胞、支持细胞及间质细胞,细胞增殖率较高。在大约50日胎龄前生殖细胞可称作性原细胞,细胞为球形、核质比高。在51～59日胎龄,生殖细胞发生剧烈变化:体积增大、核质比降低。此后逐渐由性原细胞发育为前精原细胞,并且在此期间表达VASA的生殖细胞增多。50～90日胎龄,生殖细胞增殖率最高,生殖细胞所占比例也达到峰值。在90日胎龄后生殖细胞增殖率下降,比例下降,间质细胞大量退化。结果表明,山羊胎儿的生殖细胞在50日胎龄后由性原细胞发育为前精原细胞,生殖细胞在50～90日胎龄的增殖率最高,VASA可作为雄性山羊胎儿前精原细胞的标记。
关键词
胎儿性腺
分化
雄性
奶山羊
Keywords
fetal gonad
differentiation
male
dairy goat
分类号
S827 [农业科学—畜牧学]
S852.16 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
微量牛卵中H1 foo CDS序列的克隆及其mRNA向卵内显微注射
被引量：
6
2
作者
云彦
吴苏君
隋进强
胡勇策
雷安民
机构
西北农林科技大学动物医学院陕西省干细胞工程技术研究中心陕西省农业分子生物学重点实验室
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第11期1630-1637,共8页
基金
2007年西北农林科技大学留学回国人员科研启动经费(Z111020723)
文摘
本研究旨在优化从微量卵中克隆基因的条件,并构建牛H1foo基因真核表达载体。首先将微量（1~5个）卵母细胞裂解后,用改进的RT-PCR方法扩增内参β-actin基因以检测该方法扩增基因的效率,结果表明单卵扩增成功率为80%以上（10/12）,3个、5个卵扩增成功率均达100%。利用该体系从微量（5个）牛卵中克隆得到H1fooCDS全长序列,测序结果显示其与GenBank上公布序列同源性为100%。将牛H1fooCDS连接至pMD19-T载体上,经酶切、测序鉴定正确后定向亚克隆到真核表达载体pVenus上,鉴定正确后命名为pVenus-H1foo。利用脂质体2000将pVenus-H1foo转染Hela细胞,24 h后通过荧光显微镜观察、RT-PCR、Western Blotting分别检测表明其能够正确表达。将H1foo体外转录为mRNA后直接注射卵母细胞,其表达产物能准确定位于卵母细胞及极体的染色体上。结果,成功构建了牛H1foo真核表达载体pVenus-H1foo,为研究该基因在卵母细胞成熟及早期胚胎发育过程中的作用奠定了基础。
关键词
微量卵母细胞
RT-PCR
牛H1
foo基因
体外转录
Keywords
trace bovine oocytes
RT-PCR
bovine H1 foo gene
transcription in vitro
分类号
Q785 [生物学—分子生物学]
Q336 [生物学—遗传学]
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职称材料
题名
小鼠H1foo基因四环素诱导表达系统的构建与表达
被引量：
1
3
作者
李建
宁静
陈西锐
宋成艳
雷安民
机构
西北农林科技大学动物医学院陕西省干细胞工程技术研究中心陕西省农业分子生物学重点实验室
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第5期757-762,共6页
基金
国家自然科学基金项目(31172280)
文摘
卵母细胞特异性连接组蛋白H1foo(Linker histone H1foo)是连接组蛋白H1(Histone 1)在卵母细胞中特异性表达的1个亚型,H1foo在卵母细胞减数分裂和成熟发育过程中起着不可替代的作用,而且H1foo也参与了重编程过程。为了在体细胞中进一步研究H1foo的功能,本试验通过采用四环素诱导表达载体系统,用PCR的方法扩增了小鼠的H1foo基因和四环素诱导表达系统(Tet-on)的启动子区。用双酶切和连接等方法将上述元件连接到真核表达载体pVenus上,构建了重组质粒pVenus-tet-CMV-H1foo。双酶切和测序结果显示,片段连接正确,且全长测序正确。本试验所构建的四环素诱导的小鼠H1foo真核表达系统有助于人们在体细胞中更好地探讨H1foo在特定时间的作用和功能。
关键词
小鼠
H1foo基因
四环素诱导表达系统
Keywords
mouse
H1foo gene
tetracycline-inducible expression system
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
雄性关中奶山羊胎儿生殖细胞增殖分化的研究
刘超
朱海鲸
刘维帅
郑伟俊
王静
杨春荣
华进联
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
微量牛卵中H1 foo CDS序列的克隆及其mRNA向卵内显微注射
云彦
吴苏君
隋进强
胡勇策
雷安民
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009
6
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
小鼠H1foo基因四环素诱导表达系统的构建与表达
李建
宁静
陈西锐
宋成艳
雷安民
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
1
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职称材料
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