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牛诱导性多能干细胞向心肌细胞的诱导分化
被引量：
2
1
作者
陈冬梅
吕长荣
+1 位作者
辛晓玲
窦忠英
《西北农林科技大学学报（自然科学版）》
CSCD
北大核心
2010年第10期1-6,共6页
【目的】研究牛诱导性多能干细胞(Bovine induced pluripotent stem cells,biPSCs)向心肌细胞的分化能力。【方法】将biPSCs悬浮培养制备类胚体,采用类胚体介导体外自由分化与定向诱导分化(添加RA、DMSO和RA+DMSO3种诱导物)的方法,使biP...
【目的】研究牛诱导性多能干细胞(Bovine induced pluripotent stem cells,biPSCs)向心肌细胞的分化能力。【方法】将biPSCs悬浮培养制备类胚体,采用类胚体介导体外自由分化与定向诱导分化(添加RA、DMSO和RA+DMSO3种诱导物)的方法,使biPSCs在体外分化,比较了biPSCs在3种不同心肌诱导条件下定向分化为心肌细胞的诱导效率;分别提取biPSCs、类胚体及不同诱导体系分化细胞的总RNA,用RT-PCR检测心肌细胞发育标志基因的表达。【结果】biPSCs在悬浮条件下培养7d,能够形成典型球形和囊腔样类胚体。类胚体再贴壁培养7d,经过免疫细胞化学检测,贴壁细胞大量分化为α-actin阳性的心肌样细胞。在体外诱导分化体系中,RA+DMSO共同诱导的效率较RA和DMSO单独诱导显著增高(P<0.05)。RT-PCR结果显示,各组分化后的细胞中心肌细胞发育特异性基因ACTA2与GATA4均有高水平表达。【结论】biPSCs在体外悬浮培养能够形成类胚体,类胚体贴壁培养后可以分化为α-actin阳性的心肌样细胞;分化形成的心肌样细胞均表达心肌特异性基因。
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关键词
诱导性多能干细胞
细胞分化
心肌细胞
牛
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职称材料
牛Klf4基因重组反转录病毒载体的构建及产毒细胞株的建立
被引量：
1
2
作者
辛晓玲
吕长荣
+1 位作者
陈冬梅
窦忠英
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第12期1636-1641,共6页
为了克隆牛Klf4基因并构建重组反转录病毒载体,得到稳定的产毒细胞株,本研究设计了带有酶切位点的一对引物,以接触抑制生长状态的MDBK细胞为材料,用RT-PCR方法克隆出牛Klf4基因的开放阅读框序列,将之插入干细胞反转录病毒载体pMSCVneo...
为了克隆牛Klf4基因并构建重组反转录病毒载体,得到稳定的产毒细胞株,本研究设计了带有酶切位点的一对引物,以接触抑制生长状态的MDBK细胞为材料,用RT-PCR方法克隆出牛Klf4基因的开放阅读框序列,将之插入干细胞反转录病毒载体pMSCVneo构成真核表达载体pMSCV-Klf4;采用脂质体法将pMSCV-Klf4转染包装细胞PT67,通过G418筛选得到稳定的产毒细胞株,电镜观察培养液上清中的病毒颗粒,同时病毒感染NIH3T3细胞测定其病毒滴度。结果表明,本研究克隆的牛Klf4基因开放阅读框序列与已发表序列(NM-001105385)比对有99.9%的高同源性;构建的重组载体质粒可正常包装,电镜下可观察到典型的病毒颗粒,筛选出的产毒细胞株病毒滴度达7.16×107CFU·mL-1。本研究成功构建的真核表达载体pMSCV-Klf4和得到的产毒细胞株,为进一步开展有关牛iPS细胞的研究奠定了基础。
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关键词
牛
Klf4基因
IPS细胞
反转录病毒载体
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职称材料
题名
牛诱导性多能干细胞向心肌细胞的诱导分化
被引量：
2
1
作者
陈冬梅
吕长荣
辛晓玲
窦忠英
机构
西北农林科技大学动物医学院陕西省农业分子生物学重点实验室国家干细胞工程技术研究中心陕西分中心
河南省
农业
科
学院
畜牧兽医
研究
所
出处
《西北农林科技大学学报（自然科学版）》
CSCD
北大核心
2010年第10期1-6,共6页
基金
国家自然科学基金项目(30671067)
陕西省重大科技项目(2006KZ05-G1)
文摘
【目的】研究牛诱导性多能干细胞(Bovine induced pluripotent stem cells,biPSCs)向心肌细胞的分化能力。【方法】将biPSCs悬浮培养制备类胚体,采用类胚体介导体外自由分化与定向诱导分化(添加RA、DMSO和RA+DMSO3种诱导物)的方法,使biPSCs在体外分化,比较了biPSCs在3种不同心肌诱导条件下定向分化为心肌细胞的诱导效率;分别提取biPSCs、类胚体及不同诱导体系分化细胞的总RNA,用RT-PCR检测心肌细胞发育标志基因的表达。【结果】biPSCs在悬浮条件下培养7d,能够形成典型球形和囊腔样类胚体。类胚体再贴壁培养7d,经过免疫细胞化学检测,贴壁细胞大量分化为α-actin阳性的心肌样细胞。在体外诱导分化体系中,RA+DMSO共同诱导的效率较RA和DMSO单独诱导显著增高(P<0.05)。RT-PCR结果显示,各组分化后的细胞中心肌细胞发育特异性基因ACTA2与GATA4均有高水平表达。【结论】biPSCs在体外悬浮培养能够形成类胚体,类胚体贴壁培养后可以分化为α-actin阳性的心肌样细胞;分化形成的心肌样细胞均表达心肌特异性基因。
关键词
诱导性多能干细胞
细胞分化
心肌细胞
牛
Keywords
induced pluripotent stem cells（iPSCs）
differentiation potential
cardiomyocytes
bovine
分类号
Q813 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
牛Klf4基因重组反转录病毒载体的构建及产毒细胞株的建立
被引量：
1
2
作者
辛晓玲
吕长荣
陈冬梅
窦忠英
机构
西北农林科技大学动物医学院陕西省农业分子生物学重点实验室国家干细胞工程技术研究中心陕西分中心
河南省
农业
科
学院
畜牧兽医
研究
所
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第12期1636-1641,共6页
基金
国家自然科学基金(30671067)
陕西省重大科技计划(2006KZ05-G1)资助
文摘
为了克隆牛Klf4基因并构建重组反转录病毒载体,得到稳定的产毒细胞株,本研究设计了带有酶切位点的一对引物,以接触抑制生长状态的MDBK细胞为材料,用RT-PCR方法克隆出牛Klf4基因的开放阅读框序列,将之插入干细胞反转录病毒载体pMSCVneo构成真核表达载体pMSCV-Klf4;采用脂质体法将pMSCV-Klf4转染包装细胞PT67,通过G418筛选得到稳定的产毒细胞株,电镜观察培养液上清中的病毒颗粒,同时病毒感染NIH3T3细胞测定其病毒滴度。结果表明,本研究克隆的牛Klf4基因开放阅读框序列与已发表序列(NM-001105385)比对有99.9%的高同源性;构建的重组载体质粒可正常包装,电镜下可观察到典型的病毒颗粒,筛选出的产毒细胞株病毒滴度达7.16×107CFU·mL-1。本研究成功构建的真核表达载体pMSCV-Klf4和得到的产毒细胞株,为进一步开展有关牛iPS细胞的研究奠定了基础。
关键词
牛
Klf4基因
IPS细胞
反转录病毒载体
Keywords
bovine
Klf4 gene
iPS cells
retrovirus vector
分类号
S813.3 [农业科学—畜牧学]
Q789 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
牛诱导性多能干细胞向心肌细胞的诱导分化
陈冬梅
吕长荣
辛晓玲
窦忠英
《西北农林科技大学学报（自然科学版）》
CSCD
北大核心
2010
2
在线阅读
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职称材料
2
牛Klf4基因重组反转录病毒载体的构建及产毒细胞株的建立
辛晓玲
吕长荣
陈冬梅
窦忠英
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
1
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