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小鼠NR1D1基因过表达载体的构建及其生物信息学分析 被引量：2
1
作者 董浩 江海圳 +3 位作者 李超 高登科 靳亚平 陈华涛 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期94-103,共10页
目的:构建小鼠核受体亚家族1组D成员1(NR1D1)基因的过表达载体,分析小鼠NR1D1蛋白的基本特征。方法:从小鼠肝脏组织中提取总RNA,反转录后获得cDNA,采用PCR技术扩增得到小鼠NR1D1基因的编码区片段,经同源重组与pcDNA3.1载体相连接,将酶... 目的:构建小鼠核受体亚家族1组D成员1(NR1D1)基因的过表达载体,分析小鼠NR1D1蛋白的基本特征。方法:从小鼠肝脏组织中提取总RNA,反转录后获得cDNA,采用PCR技术扩增得到小鼠NR1D1基因的编码区片段,经同源重组与pcDNA3.1载体相连接,将酶切鉴定和测序正确的重组质粒命名为pcDNA3.1-NR1D1。将pcDNA3.1空质粒和pcDNA3.1-NR1D1重组质粒分别转染至HEK293T细胞中,分别为对照组和pcDNA3.1-NR1D1转染组,48 h后提取总RNA和总蛋白样品,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Westernblotting法检测2组细胞中NR1D1 mRNA和蛋白表达水平。使用DNAStar和MEGA7软件对小鼠与其他物种的NR1D1基因编码区序列(CDS)进行相似性分析,并构建系统进化树;利用ExPASy、ProtScale、SingalP5.0、TMHMM-2.0、PhosphoSitePlus®、SOPMA和SWISS-MODEL等在线工具分析NR1D1蛋白的氨基酸组成、亲/疏水性、跨膜区域、信号肽、二级结构和三级结构。结果:酶切鉴定和测序结果均表明过表达载体pcDNA3.1-NR1D1构建成功。与对照组比较,pcDNA3.1-NR1D1转染组细胞中NR1D1 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。生物信息学分析,小鼠NR1D1 CDS区与人、大鼠、中国仓鼠、黑猩猩、兔、犬、猪、马、牛、绵羊、山羊、家猫和斑马鱼的相似性分别为90.0%、94.8%、86.5%、90.0%、89.6%、88.3%、89.7%、89.8%、88.8%、89.1%、89.1%、89.7%和65.1%。系统进化树分析,小鼠NR1D1基因与中国仓鼠和大鼠的遗传距离最近,与斑马鱼的遗传距离最远。小鼠NR1D1蛋白是一种疏水性碱性蛋白质,不属于分泌蛋白和跨膜蛋白,含有12个磷酸化位点和10个泛素化位点;二级结构中无规则卷曲占54.63%,α-螺旋占26.50%,延伸链占12.68%,β-转角占6.18%;三级结构预测,小鼠与人的NR1D1蛋白相似度大,差异较小。结论:成功构建了小鼠NR1D1基因过表达载体pcDNA3.1-NR1D1,验证了其在HEK293T细胞中的过表达效果,为进一步研究NR1D1基因及其蛋白的功能提供了依据。 展开更多
关键词 小鼠 ICR 核受体亚家族1组D成员1 生物钟 过表达载体 生物信息学
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不同集约化猪场猪群内毒素水平及免疫相关因子的监测 被引量：4
2
作者 李中央 田甜 +3 位作者 强煜云 王圣翔 赵宝玉 吴晨晨 《猪业科学》 2019年第11期74-78,共5页
内毒素蓄积是规模化猪场猪群亚健康的主要原因之一,其使猪群呈现免疫抑制状态。那么长期内毒素蓄积是如何影响猪群的免疫状态?试验主要选择了生物安全执行较好和较差的2个不同集约化猪场,应用ELISA方法分析各个生理阶段猪群血液内毒素、... 内毒素蓄积是规模化猪场猪群亚健康的主要原因之一,其使猪群呈现免疫抑制状态。那么长期内毒素蓄积是如何影响猪群的免疫状态?试验主要选择了生物安全执行较好和较差的2个不同集约化猪场,应用ELISA方法分析各个生理阶段猪群血液内毒素、sIgA和炎性因子水平。结果发现严格执行生物安全的猪场(猪场-I),各个生理阶段的猪群体内蓄积内毒素的含量,显著低于执行力较差的猪场(猪场-II);而猪场-I各个生理阶段猪群血液sIgA含量,显著高于猪场-II的猪群;猪场-I各个生理阶段猪群血液中部分促炎因子含量,显著高于猪场-II的猪群。由此得出生物安全执行力较好的猪场可自身净化内毒素,而生物安全执行力较差猪场,随着饲养时间的延长,猪只体内蓄积的内毒素越多,免疫性能越低下,引发猪群处于亚健康状态。 展开更多
关键词 内毒素 生物安全 规模化猪场 炎性因子 SIGA
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应用于PCR性别鉴定的朱鹮粪便基因组提取方法的建立 被引量：3
3
作者 张漫慧 赵泓淙 +4 位作者 王彩霞 王小雨 侯佳 张军风 徐光岚 《湖北畜牧兽医》 2020年第8期5-7,14,共4页
使用无损伤采样的方法收集朱鹮(Nipponin nippon)的粪便样品,结合硫氰酸胍-硅珠法(GuSCN-SiO2)研究出了一种朱鹮粪便基因组提取的试剂配方和操作程序。结果表明,可应用于PCR性别鉴定的朱鹮粪便基因组提取方法的提取效率为85.11%。这种... 使用无损伤采样的方法收集朱鹮(Nipponin nippon)的粪便样品,结合硫氰酸胍-硅珠法(GuSCN-SiO2)研究出了一种朱鹮粪便基因组提取的试剂配方和操作程序。结果表明,可应用于PCR性别鉴定的朱鹮粪便基因组提取方法的提取效率为85.11%。这种稳定有效的朱鹮粪便基因组提取试剂与提取方法可以有效解决目前朱鹮性别鉴定的困难,保证朱鹮人工种群在繁殖季节合理配对。 展开更多
关键词 朱鹮(Nipponin nippon) 鸟类繁殖 性别鉴定 粪便基因组
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