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猪波形蛋白对PRRSV感染Marc-145细胞的抑制作用
被引量：
4
1
作者
马晓春
孔宁
+5 位作者
高继明
王彤彤
黄柏成
赵钦
肖一红
周恩民
《山东农业科学》
2012年第10期1-6,10,共7页
为了研究波形蛋白在介导猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染细胞过程中的作用,利用RT-PCR方法从PRRSV非易感细胞系猪肾细胞系PK-15细胞中扩增目的基因,克隆入pET-28a(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。表达的重组猪波形蛋白...
为了研究波形蛋白在介导猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染细胞过程中的作用,利用RT-PCR方法从PRRSV非易感细胞系猪肾细胞系PK-15细胞中扩增目的基因,克隆入pET-28a(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。表达的重组猪波形蛋白经SDS-PAGE和Western blot鉴定和纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。利用病毒抑制试验检测重组猪波形蛋白及多克隆抗体在PRRSV感染Marc-145细胞过程中的作用。结果表明,成功扩增猪波形蛋白基因并克隆入pET-28a载体,经诱导后得到高效表达,纯化后免疫兔子产生高价血清抗体(105)。病毒阻断结果表明,猪波形蛋白及多克隆抗体均能阻断PRRSV感染Marc-145细胞。这为以波形蛋白为基础的PRRSV受体阻断抑制剂的研究提供了实验依据。
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关键词
猪繁殖与呼吸综合征病毒
波形蛋白
病毒抑制
受体阻断
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职称材料
猪圆环病毒2型衣壳蛋白单克隆抗体的制备及鉴定
被引量：
3
2
作者
姚永红
崔然
+3 位作者
赵钦
王刚
肖一红
周恩民
《山东农业科学》
2012年第9期9-12,21,共5页
为获得猪圆环病毒2型(PCV2)衣壳蛋白单克隆抗体,将516 bp的ORF2基因片段克隆入pET-28a(+),转化入大肠杆菌,在IPTG的诱导下表达,用SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行鉴定。将纯化的重组蛋白免疫小鼠,制备单克隆抗体,叠加ELISA方法检...
为获得猪圆环病毒2型(PCV2)衣壳蛋白单克隆抗体,将516 bp的ORF2基因片段克隆入pET-28a(+),转化入大肠杆菌,在IPTG的诱导下表达,用SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行鉴定。将纯化的重组蛋白免疫小鼠,制备单克隆抗体,叠加ELISA方法检测两株单克隆抗体识别的抗原表位关系。SDS-PAGE和Western blot结果表明重组蛋白ORF2得到高效表达;筛选获得两株稳定分泌抗ORF2单克隆抗体的杂交瘤细胞系3H3和3F2,其分泌的单体均为IgG1亚型;且均具有较高的特异性和敏感性;叠加ELISA显示,两株单克隆抗体识别不同的抗原表位。本研究制备的单抗有较好的生物学特性,为PCV2的研究及快速准确诊断方法的建立提供了平台。
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关键词
猪圆环病毒2型
ORF2蛋白
单克隆抗体
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职称材料
题名
猪波形蛋白对PRRSV感染Marc-145细胞的抑制作用
被引量：
4
1
作者
马晓春
孔宁
高继明
王彤彤
黄柏成
赵钦
肖一红
周恩民
机构
山东农业
大学
动物
医学院
西北农林科技大学兽医免疫学研究所/西北农林科技大学动物医学院
出处
《山东农业科学》
2012年第10期1-6,10,共7页
基金
国家自然科学基金重点项目"猪蓝耳病病毒感染所致病的分子机理"(U0931003/L01)
国家自然科学基金项目"猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒通过胎盘屏障感染胎儿的受体机制"(30901063)
文摘
为了研究波形蛋白在介导猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染细胞过程中的作用,利用RT-PCR方法从PRRSV非易感细胞系猪肾细胞系PK-15细胞中扩增目的基因,克隆入pET-28a(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。表达的重组猪波形蛋白经SDS-PAGE和Western blot鉴定和纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。利用病毒抑制试验检测重组猪波形蛋白及多克隆抗体在PRRSV感染Marc-145细胞过程中的作用。结果表明,成功扩增猪波形蛋白基因并克隆入pET-28a载体,经诱导后得到高效表达,纯化后免疫兔子产生高价血清抗体(105)。病毒阻断结果表明,猪波形蛋白及多克隆抗体均能阻断PRRSV感染Marc-145细胞。这为以波形蛋白为基础的PRRSV受体阻断抑制剂的研究提供了实验依据。
关键词
猪繁殖与呼吸综合征病毒
波形蛋白
病毒抑制
受体阻断
Keywords
PRRSV
Vimentin
Virus inhibition
Receptor blocking
分类号
Q939.91 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
猪圆环病毒2型衣壳蛋白单克隆抗体的制备及鉴定
被引量：
3
2
作者
姚永红
崔然
赵钦
王刚
肖一红
周恩民
机构
山东农业
大学
动物
医学院
西北农林科技大学兽医免疫学研究所/西北农林科技大学动物医学院
中国农业科
学院
哈尔滨
兽医
研究所
/
兽医
生物技术国家重点实验室/
动物
疫病诊断中心
出处
《山东农业科学》
2012年第9期9-12,21,共5页
基金
国家公益性行业科技计划项目"动物卫生风险分析关键技术与应用研究"(200903055)
文摘
为获得猪圆环病毒2型(PCV2)衣壳蛋白单克隆抗体,将516 bp的ORF2基因片段克隆入pET-28a(+),转化入大肠杆菌,在IPTG的诱导下表达,用SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行鉴定。将纯化的重组蛋白免疫小鼠,制备单克隆抗体,叠加ELISA方法检测两株单克隆抗体识别的抗原表位关系。SDS-PAGE和Western blot结果表明重组蛋白ORF2得到高效表达;筛选获得两株稳定分泌抗ORF2单克隆抗体的杂交瘤细胞系3H3和3F2,其分泌的单体均为IgG1亚型;且均具有较高的特异性和敏感性;叠加ELISA显示,两株单克隆抗体识别不同的抗原表位。本研究制备的单抗有较好的生物学特性,为PCV2的研究及快速准确诊断方法的建立提供了平台。
关键词
猪圆环病毒2型
ORF2蛋白
单克隆抗体
Keywords
Porcine circovirus type2
ORF2 protein
Monoclonal antibodies
分类号
Q785 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪波形蛋白对PRRSV感染Marc-145细胞的抑制作用
马晓春
孔宁
高继明
王彤彤
黄柏成
赵钦
肖一红
周恩民
《山东农业科学》
2012
4
在线阅读
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职称材料
2
猪圆环病毒2型衣壳蛋白单克隆抗体的制备及鉴定
姚永红
崔然
赵钦
王刚
肖一红
周恩民
《山东农业科学》
2012
3
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