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大肠杆菌裂解性噬菌体内溶素的表达与活性研究
被引量：
1
1
作者
赵铖
吴慧蓉
+6 位作者
唐艺彤
李小申
赵婷芳
高翠翠
杨海
胡意
唐青海
《中国预防兽医学报》
CSCD
北大核心
2024年第11期1191-1195,共5页
为制备大肠杆菌裂解性噬菌体内溶素(Endolysin)并分析其抑菌活性,本研究利用PCR扩增endolysin基因,克隆至低温表达载体pCold GST、转化Rosetta(DE3)感受态细胞构建重组表达菌株pCold-endolysin/Rosetta(DE3),酶切及测序鉴定结果显示与...
为制备大肠杆菌裂解性噬菌体内溶素(Endolysin)并分析其抑菌活性,本研究利用PCR扩增endolysin基因,克隆至低温表达载体pCold GST、转化Rosetta(DE3)感受态细胞构建重组表达菌株pCold-endolysin/Rosetta(DE3),酶切及测序鉴定结果显示与预期一致,插入序列正确。将该重组菌经终浓度0.2 mmol/L IPTG诱导2 h表达重组endolysin蛋白(r-endolysin),采用GST蛋白纯化试剂盒纯化目的蛋白、经SDS-PAGE和western blot检测,采用Bradford法测定r-endolysin浓度。经滴板计数后采用活菌稀释计数法测定r-endolysin蛋白对大肠杆菌的体外裂解活性。SDS-PAGE和western blot检测结果显示,r-endolysin分子量约35 ku,且主要以可溶性形式表达,经纯化后获得35 ku单一目的条带,蛋白浓度经测定为0.54 mg/mL。体外抑菌活性试验结果显示,与其他组相比,EDTA+r-endolysin组的抑菌效果极显著增强(P<0.0001),且呈时间依赖性,EDTA+PBS组的抑菌效果优于r-endolysin+PBS组。本研究所制备的r-endolysin蛋白抑菌活性较好,这为进一步开发致病性大肠杆菌的新型抑菌制剂奠定了扎实基础。
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关键词
大肠杆菌
噬菌体
内溶素
原核表达
抑菌活性
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职称材料
题名
大肠杆菌裂解性噬菌体内溶素的表达与活性研究
被引量：
1
1
作者
赵铖
吴慧蓉
唐艺彤
李小申
赵婷芳
高翠翠
杨海
胡意
唐青海
机构
衡阳师范学院生命科学学院/南岳山区生物资源保护与利用湖南省重点实验室
出处
《中国预防兽医学报》
CSCD
北大核心
2024年第11期1191-1195,共5页
基金
国家级大学创新创业训练项目(cxcy2022015、cxcy2022001)
湖南省教育厅科学研究项目重点项目(21A0442)
+2 种基金
衡阳市科技创新项目(202250045230)
中央引导地方科技发展资金项目(2022ZYC091)
湖南省普通高等学校教学改革研究项目重点项目(HNJG-20230871)。
文摘
为制备大肠杆菌裂解性噬菌体内溶素(Endolysin)并分析其抑菌活性,本研究利用PCR扩增endolysin基因,克隆至低温表达载体pCold GST、转化Rosetta(DE3)感受态细胞构建重组表达菌株pCold-endolysin/Rosetta(DE3),酶切及测序鉴定结果显示与预期一致,插入序列正确。将该重组菌经终浓度0.2 mmol/L IPTG诱导2 h表达重组endolysin蛋白(r-endolysin),采用GST蛋白纯化试剂盒纯化目的蛋白、经SDS-PAGE和western blot检测,采用Bradford法测定r-endolysin浓度。经滴板计数后采用活菌稀释计数法测定r-endolysin蛋白对大肠杆菌的体外裂解活性。SDS-PAGE和western blot检测结果显示,r-endolysin分子量约35 ku,且主要以可溶性形式表达,经纯化后获得35 ku单一目的条带,蛋白浓度经测定为0.54 mg/mL。体外抑菌活性试验结果显示,与其他组相比,EDTA+r-endolysin组的抑菌效果极显著增强(P<0.0001),且呈时间依赖性,EDTA+PBS组的抑菌效果优于r-endolysin+PBS组。本研究所制备的r-endolysin蛋白抑菌活性较好,这为进一步开发致病性大肠杆菌的新型抑菌制剂奠定了扎实基础。
关键词
大肠杆菌
噬菌体
内溶素
原核表达
抑菌活性
Keywords
Escherichia coli
bacteriophages
endolysin
prokaryotic expression
bacteriostatic activity
分类号
S852.61 [农业科学—基础兽医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
大肠杆菌裂解性噬菌体内溶素的表达与活性研究
赵铖
吴慧蓉
唐艺彤
李小申
赵婷芳
高翠翠
杨海
胡意
唐青海
《中国预防兽医学报》
CSCD
北大核心
2024
1
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