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犬ELF4基因原核表达及其卵黄抗体的制备
被引量：
1
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作者
喻娇
曹馨
+6 位作者
唐青海
侯鑫军
高翠翠
韩涛涛
黎露
刘会敬
唐斯萍
《南方农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第8期2359-2372,共14页
【目的】克隆犬转录因子ELF4基因(cELF4),体外表达重组c ELF4蛋白(rcELF4)并制备抗该蛋白的卵黄抗体(IgY),为深入探究犬ELF4蛋白功能提供基础材料。【方法】采用RT-PCR扩增cELF4基因,将目的基因克隆至pMD19-T载体构建重组质粒并测序,运...
【目的】克隆犬转录因子ELF4基因(cELF4),体外表达重组c ELF4蛋白(rcELF4)并制备抗该蛋白的卵黄抗体(IgY),为深入探究犬ELF4蛋白功能提供基础材料。【方法】采用RT-PCR扩增cELF4基因,将目的基因克隆至pMD19-T载体构建重组质粒并测序,运用生物信息学软件分析其核苷酸序列及编码的氨基酸序列特征。将c ELF4基因克隆至原核表达载体pET-28a,构建重组表达质粒pET28a-cELF4,分别转化大肠杆菌BL21(DE3)和Rosetta(DE3)感受态细胞,诱导表达后对表达产物进行SDS-PAGE检测和Western blotting鉴定。将rcELF4蛋白分别与3种免疫佐剂(ISA 15AVG、ISA 71VG、ISA 201VG)乳化制备免疫原,通过免疫蛋鸡检测抗体滴度和IgY含量。构建真核重组表达载体pEGFP-cELF4,转染细胞后,利用免疫过氧化物酶细胞单层试验(IPMA)分析c ELF4特异性IgY的免疫活性。【结果】cELF4基因(GenBank登录号MZ198105)的开放阅读框(ORF)为1992 bp,编码663个氨基酸残基。cELF4基因与狐ELF4基因的核苷酸相似性最高(99.3%),而与小鼠的相似性最低(81.5%)。结合系统进化结果发现,c ELF4基因与狐、大熊猫、欧洲雪貂、北美水獭等动物ELF4基因的亲缘关系较近,而与人和猴等灵长类动物及啮齿类鼠ELF4基因的亲缘关系相对较远。rcELF4蛋白分子量大小约100 kD,可刺激鸡产生相应抗体,ISA 15AVG、ISA 71VG和ISA201VG组血清抗体滴度均在首免后38 d达峰值,其中ISA 201VG组效价最高(>128000倍),且3组rcELF4特异性IgY抗体均在首免后14 d转阳,首免后35 d达峰值,其中ISA 201VG组血清抗体滴度最高,为256000倍。3组鸡蛋卵黄中所提取的IgY含量最高值为4.09 mg/10 mL卵黄液,与rcELF4蛋白呈特异性反应、且与人ELF4蛋白存在交叉反应。rcELF4蛋白定位在细胞核。【结论】rcELF4蛋白在大肠杆菌中成功表达,且存在翻译后修饰现象,不同类型的免疫佐剂对rcELF4蛋白的免疫原性产生不同的影响,所制备rcELF4抗体免疫活性良好,且与人ELF4蛋白存在交叉反应。
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关键词
犬ELF4蛋白
原核表达
真核表达
佐剂
卵黄抗体
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职称材料
一株仔猪产肠毒素大肠杆菌分离鉴定、耐药性分析及其卵黄抗体的制备
被引量：
2
2
作者
尹家银
喻娇
+6 位作者
唐青海
滕威
阳坤
曹馨
徐晴
刘博
李泽
《湖北农业科学》
2023年第4期127-134,共8页
为诊断某规模化养猪场仔猪腹泻病原,并制备其特异性卵黄抗体,采用细菌分离培养、生化试验、16SrRNA PCR鉴定及系统进化树分析、药敏试验等方法对病料进行研究,并利用全菌体灭活和超声波破碎法制备抗原,将其分别与不同佐剂(ISA 71VG、ISA...
为诊断某规模化养猪场仔猪腹泻病原,并制备其特异性卵黄抗体,采用细菌分离培养、生化试验、16SrRNA PCR鉴定及系统进化树分析、药敏试验等方法对病料进行研究,并利用全菌体灭活和超声波破碎法制备抗原,将其分别与不同佐剂(ISA 71VG、ISA201VG和15AVG)配伍乳化制备疫苗免疫蛋鸡、聚乙二醇法提取高免卵黄抗体、SDS-PAGE电泳和Bradford法鉴定抗体质量及浓度、双向琼脂扩散试验测定抗体效价。结果表明,分离菌株的形状、大小及生化特性均与大肠杆菌相符。分离株的主要毒力基因E.coli-estb和elt基因分别为113、272 bp;分离株elt和estb基因与美国流行毒株如UMNK88处于同一分支,亲缘关系较近;与丹麦株CFSAN018748、瑞士株14OD0056处于不同分支,亲缘关系较远。分离菌株对头孢噻肟、诺氟沙星和复方新诺明敏感,对头孢曲松和多黏菌素B中介,对多西环素、呋喃唑酮以及多种氨基糖苷类和喹诺酮类抗菌药物耐药。各组卵黄抗体的重链(约70 ku)和轻链(约25 ku)均明显,纯度高。首免后56 d 0.2%甲醛处理的菌液与ISA 15AVG配伍所致疫苗的卵黄抗体蛋白含量最高(1.462 mg/g卵黄),超声波破碎处理的菌液与ISA 71VG配合所制疫苗的卵黄抗体蛋白含量次之(1.459 mg/g卵黄)。血清抗体与菌体抗原反应性良好,超声波破碎抗原与ISA 71VG配伍所制疫苗的血清抗体、卵黄抗体效价分别高达1∶16、1∶4。
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关键词
猪致病性大肠杆菌(Escherichia
coli)
分离培养
进化分析
耐药性分析
卵黄抗体
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职称材料
题名
犬ELF4基因原核表达及其卵黄抗体的制备
被引量：
1
1
作者
喻娇
曹馨
唐青海
侯鑫军
高翠翠
韩涛涛
黎露
刘会敬
唐斯萍
机构
衡阳师范学院生命科学与环境学院/南岳山区生物资源保护与利用湖南省重点实验室/动物微生物新型检测技术及生物制剂衡阳市重点实验室
出处
《南方农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第8期2359-2372,共14页
基金
国家级大学生创新创业训练计划项目(202110546001)
湖南省自然科学基金面上项目(2021JJ30060)
+1 种基金
湖南省教育厅科学研究项目重点项目(21A0442)
湖南省重点研发计划项目(2021NK2026)。
文摘
【目的】克隆犬转录因子ELF4基因(cELF4),体外表达重组c ELF4蛋白(rcELF4)并制备抗该蛋白的卵黄抗体(IgY),为深入探究犬ELF4蛋白功能提供基础材料。【方法】采用RT-PCR扩增cELF4基因,将目的基因克隆至pMD19-T载体构建重组质粒并测序,运用生物信息学软件分析其核苷酸序列及编码的氨基酸序列特征。将c ELF4基因克隆至原核表达载体pET-28a,构建重组表达质粒pET28a-cELF4,分别转化大肠杆菌BL21(DE3)和Rosetta(DE3)感受态细胞,诱导表达后对表达产物进行SDS-PAGE检测和Western blotting鉴定。将rcELF4蛋白分别与3种免疫佐剂(ISA 15AVG、ISA 71VG、ISA 201VG)乳化制备免疫原,通过免疫蛋鸡检测抗体滴度和IgY含量。构建真核重组表达载体pEGFP-cELF4,转染细胞后,利用免疫过氧化物酶细胞单层试验(IPMA)分析c ELF4特异性IgY的免疫活性。【结果】cELF4基因(GenBank登录号MZ198105)的开放阅读框(ORF)为1992 bp,编码663个氨基酸残基。cELF4基因与狐ELF4基因的核苷酸相似性最高(99.3%),而与小鼠的相似性最低(81.5%)。结合系统进化结果发现,c ELF4基因与狐、大熊猫、欧洲雪貂、北美水獭等动物ELF4基因的亲缘关系较近,而与人和猴等灵长类动物及啮齿类鼠ELF4基因的亲缘关系相对较远。rcELF4蛋白分子量大小约100 kD,可刺激鸡产生相应抗体,ISA 15AVG、ISA 71VG和ISA201VG组血清抗体滴度均在首免后38 d达峰值,其中ISA 201VG组效价最高(>128000倍),且3组rcELF4特异性IgY抗体均在首免后14 d转阳,首免后35 d达峰值,其中ISA 201VG组血清抗体滴度最高,为256000倍。3组鸡蛋卵黄中所提取的IgY含量最高值为4.09 mg/10 mL卵黄液,与rcELF4蛋白呈特异性反应、且与人ELF4蛋白存在交叉反应。rcELF4蛋白定位在细胞核。【结论】rcELF4蛋白在大肠杆菌中成功表达,且存在翻译后修饰现象,不同类型的免疫佐剂对rcELF4蛋白的免疫原性产生不同的影响,所制备rcELF4抗体免疫活性良好,且与人ELF4蛋白存在交叉反应。
关键词
犬ELF4蛋白
原核表达
真核表达
佐剂
卵黄抗体
Keywords
canine ELF4 protein
prokaryotic expression
eukaryotic expression
adjuvant
egg yolk antibody
分类号
S858.292 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
一株仔猪产肠毒素大肠杆菌分离鉴定、耐药性分析及其卵黄抗体的制备
被引量：
2
2
作者
尹家银
喻娇
唐青海
滕威
阳坤
曹馨
徐晴
刘博
李泽
机构
衡阳师范学院生命科学与环境学院/南岳山区生物资源保护与利用湖南省重点实验室/动物微生物新型检测技术及生物制剂衡阳市重点实验室
出处
《湖北农业科学》
2023年第4期127-134,共8页
基金
湖南省教育厅科学研究项目重点项目(21A0442)
湖南省重点研发计划(2021NK2026)
+2 种基金
湖南省自然科学基金面上项目(2021JJ30060)
国家级大学创新创业训练项目(202110546001
〔2020〕1-7)。
文摘
为诊断某规模化养猪场仔猪腹泻病原,并制备其特异性卵黄抗体,采用细菌分离培养、生化试验、16SrRNA PCR鉴定及系统进化树分析、药敏试验等方法对病料进行研究,并利用全菌体灭活和超声波破碎法制备抗原,将其分别与不同佐剂(ISA 71VG、ISA201VG和15AVG)配伍乳化制备疫苗免疫蛋鸡、聚乙二醇法提取高免卵黄抗体、SDS-PAGE电泳和Bradford法鉴定抗体质量及浓度、双向琼脂扩散试验测定抗体效价。结果表明,分离菌株的形状、大小及生化特性均与大肠杆菌相符。分离株的主要毒力基因E.coli-estb和elt基因分别为113、272 bp;分离株elt和estb基因与美国流行毒株如UMNK88处于同一分支,亲缘关系较近;与丹麦株CFSAN018748、瑞士株14OD0056处于不同分支,亲缘关系较远。分离菌株对头孢噻肟、诺氟沙星和复方新诺明敏感,对头孢曲松和多黏菌素B中介,对多西环素、呋喃唑酮以及多种氨基糖苷类和喹诺酮类抗菌药物耐药。各组卵黄抗体的重链(约70 ku)和轻链(约25 ku)均明显,纯度高。首免后56 d 0.2%甲醛处理的菌液与ISA 15AVG配伍所致疫苗的卵黄抗体蛋白含量最高(1.462 mg/g卵黄),超声波破碎处理的菌液与ISA 71VG配合所制疫苗的卵黄抗体蛋白含量次之(1.459 mg/g卵黄)。血清抗体与菌体抗原反应性良好,超声波破碎抗原与ISA 71VG配伍所制疫苗的血清抗体、卵黄抗体效价分别高达1∶16、1∶4。
关键词
猪致病性大肠杆菌(Escherichia
coli)
分离培养
进化分析
耐药性分析
卵黄抗体
Keywords
swine pathogenic Escherichia coli
separate culture
evolutionary analysis
drug resistance analysis
egg yolk antibody
分类号
S852.43 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
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1
犬ELF4基因原核表达及其卵黄抗体的制备
喻娇
曹馨
唐青海
侯鑫军
高翠翠
韩涛涛
黎露
刘会敬
唐斯萍
《南方农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022
1
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职称材料
2
一株仔猪产肠毒素大肠杆菌分离鉴定、耐药性分析及其卵黄抗体的制备
尹家银
喻娇
唐青海
滕威
阳坤
曹馨
徐晴
刘博
李泽
《湖北农业科学》
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