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鸭乙型肝炎病毒YMDD突变株体外耐药模型建立 被引量：3
1
作者 付喜花 梁蔚芳 +4 位作者 吴小东 沈国俊 何海棠 陈金军 侯金林 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期633-636,共4页
目的构建鸭乙型肝炎病毒(DHBV)YMDD点突变的复制质粒,研究其在鸡肝癌细胞中的复制及拉米夫定抗性。方法以广东樱桃谷鸭DHBV分离株为模板,将3631 bp的片段克隆至载体pBluescript II KS(+)中,构建含1.2倍病毒全基因的重组质粒,经PCR定点... 目的构建鸭乙型肝炎病毒(DHBV)YMDD点突变的复制质粒,研究其在鸡肝癌细胞中的复制及拉米夫定抗性。方法以广东樱桃谷鸭DHBV分离株为模板,将3631 bp的片段克隆至载体pBluescript II KS(+)中,构建含1.2倍病毒全基因的重组质粒,经PCR定点突变获得YMDD突变株。将构建质粒经FuGENETM 6瞬时转染鸡肝癌细胞,分析变异株的复制能力及拉米夫定耐药性。结果 PCR鉴定、酶切鉴定及序列测定均证实成功获得1.2倍DHBV全基因YMDD突变质粒。Southern印迹杂交表明重组质粒转染细胞后可检测到病毒复制中间体;野生株的复制能力是突变株的2.7倍。拉米夫定对变异株的IC50=37.12±8.81 ng/ml,高于野生株的IC50=10.90±4.80 ng/ml。结论与野生株相比,YMDD突变株质粒体外复制活性减弱,对拉米夫定敏感性下降。 展开更多
关键词 鸭乙型肝炎病毒 定点突变 鸡肝癌细胞系 拉米夫定
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水飞蓟宾抑制缺氧状态下胃癌细胞mTOR磷酸化及HIF-1α表达 被引量：2
2
作者 伍友兴 桂若虎 +3 位作者 郑新平 王晓洋 王柏琦 胡军 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期52-56,共5页
目的:探讨水飞蓟宾对胃癌细胞缺氧诱导因子1α(HIF-1α)表达的影响及其可能的分子机制。方法:低氧条件下体外培养胃癌细胞系MGC803,用不同浓度水飞蓟宾处理后,分别采用Real-time PCR和Western blotting法检测HIF-1αmRNA、蛋白的表达以... 目的:探讨水飞蓟宾对胃癌细胞缺氧诱导因子1α(HIF-1α)表达的影响及其可能的分子机制。方法:低氧条件下体外培养胃癌细胞系MGC803,用不同浓度水飞蓟宾处理后,分别采用Real-time PCR和Western blotting法检测HIF-1αmRNA、蛋白的表达以及mTOR和Akt的磷酸化水平,MTT法检测水飞蓟宾对MGC803细胞增殖的影响。结果:细胞低氧状态下生长4 h后,与正常氧浓度组相比,细胞内HIF-1α蛋白表达水平显著增高[(0.94±0.16)vs(0.015±0.03),P<0.01)];经250μmol/L水飞蓟宾处理后,与处理前相比,HIF-1α蛋白表达水平明显减少[(0.24±0.09)vs(0.94±0.16),P<0.01]。与正常氧浓度组相比,低氧并不能增加HIF-1αmRNA的表达[(0.074±0.011)vs(0.07±0.02),P>0.05],即便加入250μmol/L水飞蓟宾处理对HIF-1αmRNA的表达也无明显影响[(0.081±0.011)vs(0.07±0.02),P>0.05],但水飞蓟宾能显著增加泛素化HIF-1α蛋白的表达[(0.94±0.16)vs(0.24±0.09),P<0.01];水飞蓟宾处理后能明显抑制mTOR磷酸化水平[(0.17±0.06)vs(0.53±0.14),P<0.05)],并能明显抑制MGC803细胞的增殖[(52.94±6.15)vs(100±3.22),P<0.05)]。与处理前相比,50和100μmol/L水飞蓟宾处理对Akt磷酸化无明显影响[(0.16±0.09)、(0.17±0.06)vs(0.11±0.04),P>0.05],但250μmol/L水飞蓟宾处理后,细胞内Akt磷酸化水平明显增强[(0.33±0.06)vs(0.11±0.04),P<0.05]。结论:水飞蓟宾可能通过影响mTOR和HIF-1α的表达水平而发挥抗肿瘤活性。 展开更多
关键词 水飞蓟宾 胃癌 缺氧诱导因子1Α
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姜黄素通过TLR-4/NF-κB信号通路减轻脓毒症相关的急性肠损伤 被引量：27
3
作者 张永虎 张丹霞 曾良 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2020年第6期735-740,共6页
目的探讨姜黄素(Cur)通过TLR-4/NF-κB信号通路对脓毒症大鼠急性肠损伤的保护作用。方法将100只雄性SD大鼠随机分成假手术组(sham)、模型组(Model)、姜黄素低剂量组(L-Cur,50 mg/kg)、姜黄素高剂量组(H-Cur,200 mg/kg),采用盲肠结扎穿刺... 目的探讨姜黄素(Cur)通过TLR-4/NF-κB信号通路对脓毒症大鼠急性肠损伤的保护作用。方法将100只雄性SD大鼠随机分成假手术组(sham)、模型组(Model)、姜黄素低剂量组(L-Cur,50 mg/kg)、姜黄素高剂量组(H-Cur,200 mg/kg),采用盲肠结扎穿刺(CLP)法建立大鼠脓毒症模型,并观察术后72 h存活率,同时收集术后24 h各组大鼠血液及小肠组织。HE染色观察小肠组织切片病理改变并进行Chui′s评分;ELISA检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素6(IL-6)和白介素1β(IL-1β)表达水平;比色法测定小肠组织中一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;Western blot检测小肠组织中紧密连接蛋白Claudin-1、ZO-1及TLR-4/NF-κB通路相关蛋白表达。结果与Model组比较,H-Cur组大鼠72 h生存率显著增高;与sham组比较,Model组大鼠肠黏膜显著受损(P<0.05),血清中炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β水平显著增加(P<0.05),小肠组织中NO水平、MDA含量显著增加(P<0.05),SOD活性显著下降(P<0.05),Claudin-1和ZO-1蛋白表达量显著下调(P<0.05),而TLR-4、MyD88蛋白及p-NF-κB p65(Ser536)水平显著上调(P<0.05);与Model组比较,;H-Cur组损伤程度显著减轻(P<0.05),血清中炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β水平显著降低(P<0.05),小肠组织中NO水平、MDA含量显著下降(P<0.05),SOD活性显著增加(P<0.05),Claudin-1和ZO-1蛋白表达量显著上调(P<0.05),而TLR-4、MyD88蛋白及p-NF-κB p65(Ser536)水平显著降低(P<0.05)。结论姜黄素可改善脓毒症大鼠急性肠损伤,其机制可能与其负反馈调控TLR4/NF-kB信号通路,抑制炎症及氧化应激损伤有关。 展开更多
关键词 姜黄素 脓毒症 TLR-4/NF-κB 肠损伤
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