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结核分枝杆菌PPE15蛋白的原核表达、鉴定及其兔多克隆抗体的制备
被引量：
2
1
作者
许涛
李敏英
+4 位作者
王楚彤
常先友
钱中清
李柏青
汪洪涛
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第1期78-83,共6页
目的 克隆、表达和纯化结核分枝杆菌脯氨酸-脯氨酸-谷氨酸15(PPE15)蛋白,制备并鉴定PPE15蛋白兔多克隆抗体。方法 通过PCR从结核分枝杆菌H37Rv株基因组扩增PPE15基因,利用同源重组克隆技术构建原核表达组氨酸标签PPE15蛋白的pET28a-PPE1...
目的 克隆、表达和纯化结核分枝杆菌脯氨酸-脯氨酸-谷氨酸15(PPE15)蛋白,制备并鉴定PPE15蛋白兔多克隆抗体。方法 通过PCR从结核分枝杆菌H37Rv株基因组扩增PPE15基因,利用同源重组克隆技术构建原核表达组氨酸标签PPE15蛋白的pET28a-PPE15载体。将pET28a-PPE15转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导PPE15蛋白表达,通过SDS-PAGE鉴定PPE15蛋白表达。用亲和层析法Ni-NTA柱纯化PPE15蛋白,用复性纯化后的PPE15蛋白免疫新西兰大白兔,制备和纯化多克隆抗体。Western blot法鉴定PPE15蛋白与人血清和多克隆抗体结合特异性,间接ELISA检测多克隆抗体效价。结果 成功构建pET28a-PPE15重组表达载体,PPE15蛋白主要以包涵体形式存在,纯化后在相对分子质量(M;)38 000位置处有单一条带。纯化后PPE15蛋白与结核病患者和多克隆抗体发生特异性反应,多克隆抗体效价达1∶1 300 480以上。结论 成功表达和纯化重组PPE15蛋白,并制备出高效价兔源性多克隆抗体,为进一步研究PPE15蛋白的功能提供了实验基础。
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关键词
结核分枝杆菌
脯氨酸-脯氨酸-谷氨酸15(PPE15)
Rv1040c
多克隆抗体
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职称材料
题名
结核分枝杆菌PPE15蛋白的原核表达、鉴定及其兔多克隆抗体的制备
被引量：
2
1
作者
许涛
李敏英
王楚彤
常先友
钱中清
李柏青
汪洪涛
机构
蚌埠
医学院检验医学院临床检验诊断学教研室
蚌埠
医学院免疫学教研室
蚌埠
医学院检验医学实验中心
蚌埠市第五人民医院感染科
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第1期78-83,共6页
基金
安徽省自然科学基金(1908085MH252,2008085QH405)
安徽省高校自然科学研究重点项目(KJ2018A0233)
蚌埠医学院“512人才培育计划”项目(by51201309)。
文摘
目的 克隆、表达和纯化结核分枝杆菌脯氨酸-脯氨酸-谷氨酸15(PPE15)蛋白,制备并鉴定PPE15蛋白兔多克隆抗体。方法 通过PCR从结核分枝杆菌H37Rv株基因组扩增PPE15基因,利用同源重组克隆技术构建原核表达组氨酸标签PPE15蛋白的pET28a-PPE15载体。将pET28a-PPE15转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导PPE15蛋白表达,通过SDS-PAGE鉴定PPE15蛋白表达。用亲和层析法Ni-NTA柱纯化PPE15蛋白,用复性纯化后的PPE15蛋白免疫新西兰大白兔,制备和纯化多克隆抗体。Western blot法鉴定PPE15蛋白与人血清和多克隆抗体结合特异性,间接ELISA检测多克隆抗体效价。结果 成功构建pET28a-PPE15重组表达载体,PPE15蛋白主要以包涵体形式存在,纯化后在相对分子质量(M;)38 000位置处有单一条带。纯化后PPE15蛋白与结核病患者和多克隆抗体发生特异性反应,多克隆抗体效价达1∶1 300 480以上。结论 成功表达和纯化重组PPE15蛋白,并制备出高效价兔源性多克隆抗体,为进一步研究PPE15蛋白的功能提供了实验基础。
关键词
结核分枝杆菌
脯氨酸-脯氨酸-谷氨酸15(PPE15)
Rv1040c
多克隆抗体
Keywords
Mycobacterium tuberculosis
Rv1039c
PPE15 protein
polyclonal antibody
分类号
R378.911 [医药卫生—病原生物学]
R392 [医药卫生—免疫学]
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作者
出处
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1
结核分枝杆菌PPE15蛋白的原核表达、鉴定及其兔多克隆抗体的制备
许涛
李敏英
王楚彤
常先友
钱中清
李柏青
汪洪涛
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022
2
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