猪带绦虫抗原刺激囊虫病患者PBMC Th1/Th2细胞因子的表达及其免疫调节 被引量：6

1

作者 夏惠 王雪梅 +2 位作者 方强 李柏青 孙新 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期557-561,共5页

目的检测猪带绦虫不同虫期抗原刺激囊虫病患者外周血单个核细胞(PBMC)Th1/Th2细胞因子的表达水平,并分析其在囊虫病免疫调控中的作用。方法用流式细胞仪检测囊虫病患者新鲜血T淋巴细胞亚群,并以猪带绦虫六钩蚴抗原或囊尾蚴抗原刺激囊虫... 目的检测猪带绦虫不同虫期抗原刺激囊虫病患者外周血单个核细胞(PBMC)Th1/Th2细胞因子的表达水平,并分析其在囊虫病免疫调控中的作用。方法用流式细胞仪检测囊虫病患者新鲜血T淋巴细胞亚群,并以猪带绦虫六钩蚴抗原或囊尾蚴抗原刺激囊虫病患者PBMC,分别在刺激的第0d、5d、10d和15d时检测Th1/Th2细胞因子(IFN-γ及IL-4),对分泌IFN-γ或IL-4的不同细胞群体进行数据分析。结果囊虫病患者新鲜血T淋巴细胞亚群CD3+与CD4+细胞较正常人升高,CD4+/CD8+较正常人升高,分泌IFN-γ及IL-4的CD3+细胞百分率较正常人升高;猪囊尾蚴抗原刺激囊虫病患者PB-MC第0d、5d、10d和15d时,分泌IFN-γ的CD3+细胞百分率分别为25.42%±5.53%,30.46%±4.94%,36.52%±4.73%,38.69%±5.58%;分泌IL-4的CD3+细胞百分率分别为2.52%±0.52%,3.00%±0.57%,3.81%±0.70%,5.03%±0.73%。六钩蚴抗原刺激囊虫病患者PBMC分泌IFN-γ及IL-4的CD3+细胞百分率亦呈现相同的变化趋势。结论囊虫病患者与正常人相比PBMC中存在T淋巴细胞的极化水平异常,CD3+与CD4+细胞百分率均显著升高,T细胞亚群比例失调,免疫功能紊乱;随着囊尾蚴抗原刺激外周血PBMC时间延长,分泌IFN-γ和IL-4的CD3+细胞百分率逐渐升高。 展开更多

关键词 猪囊尾蚴抗原 六钩蚴抗原 囊虫病 流式细胞仪 TH1/TH2

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三种免疫调节剂增强弓形虫重组ROP2疫苗保护效应的研究 被引量：3

2

作者 陈兴智 杨小迪 +4 位作者 杨雯 陈勇 刘丽丽 沈继龙 孙新 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期570-574,共5页

目的观察弗氏佐剂(Freund’s Adjuvant,FA)、匹多莫德(Pidotimod,PT)和西咪替丁(Cimetidine,CIM)等3种免疫调节剂增强重组弓形虫棒状体蛋白2(rROP2)疫苗的免疫保护效应。方法将100只BALB/c小鼠随机分为PBS对照组、重组rROP2疫苗组、FA-r... 目的观察弗氏佐剂(Freund’s Adjuvant,FA)、匹多莫德(Pidotimod,PT)和西咪替丁(Cimetidine,CIM)等3种免疫调节剂增强重组弓形虫棒状体蛋白2(rROP2)疫苗的免疫保护效应。方法将100只BALB/c小鼠随机分为PBS对照组、重组rROP2疫苗组、FA-rROP2疫苗组、PT-rROP2疫苗组和CIM-rROP2疫苗组等5组;FA、PT和CIM分别与rROP2抗原混合皮下注射免疫,检测小鼠细胞免疫和体液免疫指标,并观察弓形虫RH株攻击感染后的生存时间。结果 FA-rROP2组、CIM-rROP2组小鼠血清IFN-γ、特异性IgG、脾细胞增殖活性及外周血CD4+/CD8+比值均显著高于rROP2蛋白组(P<0.05);PT对外周血CD4+/CD8+比值无明显影响,但显著增加了IFN-γ的水平及脾细胞增殖活性。小鼠攻击试验表明,FA-rROP2组、PT-rROP2组以及CIM-rROP2组小鼠存活时间显著长于rROP2组和PBS对照组组;rROP2蛋白组各项指标均显著高于PBS组(P<0.05)。结论 FA、PT和CIM可增强rROP2蛋白抗原诱导的细胞免疫和体液免疫反应,都能延长攻击感染小鼠的生存时间,具有增强rROP2蛋白疫苗保护效应的功能。其中CIM的佐剂样免疫促进作用接近于FA,但副作用显著低于后者,具有临床实用的潜在价值。 展开更多

关键词 弓形虫 弗氏佐剂 匹多莫德 西咪替丁 ROP2蛋白 免疫佐剂

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抗疟原虫单抗M26-32 IgM的单体化及其免疫学特性研究 被引量：2

3

作者 陶志勇 徐岁 +4 位作者 夏惠 顾亚萍 刘耀宝 方强 高琪 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期551-555,567,共6页

目的改造IgM类抗疟原虫单抗M26-32为单体IgM亚单位,胶体金标记天然和改造后两种M26-32用于检测疟原虫抗原。方法复苏培养M26-32杂交瘤细胞,接种BALB/c小鼠,收集含有单抗的腹水,用商品HiTrap IgM HP柱纯化腹水中的IgM抗体,并用L-半胱氨... 目的改造IgM类抗疟原虫单抗M26-32为单体IgM亚单位,胶体金标记天然和改造后两种M26-32用于检测疟原虫抗原。方法复苏培养M26-32杂交瘤细胞,接种BALB/c小鼠,收集含有单抗的腹水,用商品HiTrap IgM HP柱纯化腹水中的IgM抗体,并用L-半胱氨酸裂解IgM类M26-32单抗成单体IgM亚单位。经间接免疫荧光检定两种抗体的效价,并用胶体金标记,分别检测恶性疟原虫和间日疟原虫可溶性抗原。结果接种20只小鼠,共采集约80mL单抗腹水,经HiTrap IgM HP柱纯化,获得了纯度较高的M26-32单抗。经L-半胱氨酸裂解后,Native电泳显示天然IgM被裂解为单体亚单位,IFA结果显示,亚单位M26-32与天然五聚体IgM滴度无差别。经胶体金标记后,两种金标抗体均分别能检测1∶100稀释的恶性疟原虫和1∶10稀释的间日疟原虫可溶性抗原。结论建立了L-半胱氨酸裂解IgM类M26-32单抗为单体IgM亚单位及其胶体金标记的方法,为利用M26-32进一步制备相应快速诊断工具奠定基础。 展开更多

关键词 疟疾 单克隆抗体 M26—32 IGM 胶体金

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二(喹唑啉-4-基)二硒醚体外抗弓形虫速殖子的实验研究 被引量：2

4

作者 陈兴智 杨雯 +4 位作者 杨小迪 王旗 夏惠 刘刚 沈继龙 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期692-696,共5页

目的观察二(喹唑啉-4-基)二硒醚体外对弓形虫RH株速殖子杀伤作用,探讨该药抗弓形虫的效果与机制。方法将二(喹唑啉-4-基)二硒醚,(下称药物)浓度分为4组,即生理盐水对照组(A组)、药物浓度为0.05μg/mL(B组)、0.5μg/mL(C组)、5.00μg/mL(... 目的观察二(喹唑啉-4-基)二硒醚体外对弓形虫RH株速殖子杀伤作用,探讨该药抗弓形虫的效果与机制。方法将二(喹唑啉-4-基)二硒醚,(下称药物)浓度分为4组,即生理盐水对照组(A组)、药物浓度为0.05μg/mL(B组)、0.5μg/mL(C组)、5.00μg/mL(D组),分别加入到含弓形虫速殖子(含虫体4×106个/mL)的24孔培养板中,于1h、2h、4h后收集弓形虫速殖子,以Trypan blue染色法检测弓形虫着色率;C组和A组以MTT法检测弓形虫活性,Giemsa染色法观察虫体形态和结构变化,透射电镜观察弓形虫速殖子超微结构。结果不同浓度(0.05μg/mL、0.5μg/mL、5.00μg/mL)弓形虫经二(喹唑啉-4-基)二硒醚作用1h后的着色率分别为5.00%、26.70%和99.50%,作用2h后的着色率分别为22.00%、98.70%和100.00%,作用4h后的着色率分别为58.30%、100.00%和100.00%;生理盐水组1h、2h、4h后的着色率分别为1.0%、1.20%和1.70%。0.5μg/mL浓度药物组,MTT检测弓形虫活性,OD值随时间延长增长率明显低于生理盐水对照组(P<0.05);Giemsa染色观察,弓形虫速殖子随着时间的延长,逐渐出现肿胀,两端变圆,虫体坏死现象;透射电镜观察随着时间延长,逐渐出现虫体肿胀,胞膜与基质之间空隙明显,越来越多和大的空泡形成,胞膜出现断裂,内部结构溶解模糊。结论二(喹唑啉-4-基)二硒醚体外可部分或全部杀死弓形虫,效果与时间、剂量相关。 展开更多

关键词 二(喹唑啉-4-基)二硒醚 刚地弓形虫 速殖子 体外

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铜绿假单胞菌及其L型诱导血管内皮细胞凋亡的实验研究 被引量：1

5

作者 陈登宇 刘勇 +1 位作者 徐萍萍 夏佩莹 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期37-40,共4页

目的研究铜绿假单胞菌及其L型感染诱导血管内皮细胞凋亡的能力,比较两者的差异。方法用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测铜绿假单胞菌及其L型感染血管内皮细胞2、4、6、8与10h后各时间段的细胞凋亡率,Giemsa染色观察细胞形态变化判... 目的研究铜绿假单胞菌及其L型感染诱导血管内皮细胞凋亡的能力,比较两者的差异。方法用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测铜绿假单胞菌及其L型感染血管内皮细胞2、4、6、8与10h后各时间段的细胞凋亡率,Giemsa染色观察细胞形态变化判断细胞受损情况。结果铜绿假单胞菌及其L型能诱导血管内皮细胞发生凋亡,与对照组比较差异有显著性意义(P<0.05);L型诱导细胞的凋亡率弱于原菌(P<0.05)。结论铜绿假单胞菌及其L型可诱导血管内皮细胞发生凋亡,与细菌致病性相关;铜绿假单胞菌L型较原菌诱导细胞凋亡的能力减弱。 展开更多

关键词 铜绿假单胞菌 细菌L型 内皮细胞 凋亡

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特异性IgG抗体在同源与异种疟原虫再感染中的作用研究 被引量：1

6

作者 方强 刘军 +2 位作者 陈光 曹雅明 高琪 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期358-360,共3页

目的探讨特异性IgG抗体在同源和异种疟原虫再感染过程中的作用。方法DBA/2小鼠经腹腔感染致死型约氏疟原虫(Py17XL)60d后,采用等量Py17XL、Py17XNL、Pynigeriensis或PbANKA分别再次攻击,计数红细胞感染率;采用ELISA方法动态检测脾细胞... 目的探讨特异性IgG抗体在同源和异种疟原虫再感染过程中的作用。方法DBA/2小鼠经腹腔感染致死型约氏疟原虫(Py17XL)60d后,采用等量Py17XL、Py17XNL、Pynigeriensis或PbANKA分别再次攻击,计数红细胞感染率;采用ELISA方法动态检测脾细胞培养上清中IFN-γ及其血清中特异性IgG抗体水平的变化。结果Py17XNL和Pynigeriensis再感染小鼠出现一过性低水平的原虫血症;再感染后第4d脾细胞培养上清中IFN-γ水平与正常小鼠相比无显著性差异(P>0.05),而血清中特异性IgG抗体水平明显升高(P<0.01),小鼠全部存活。相比,PbANKA再感染小鼠出现高水平的原虫血症,与其初次感染水平相近,再感染后第4d脾细胞培养上清中IFN-γ水平出现明显升高(P<0.01),而血清中特异性的IgG抗体水平却无明显变化,与正常小鼠水平接近,小鼠全部死亡。结论特异性IgG抗体可在宿主抗同源疟原虫再感染中发挥着重要作用,而对异种疟原虫再感染无保护性。 展开更多

关键词 特异性IGG 啮齿类疟原虫 再感染

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结核分枝杆菌P19对巨噬细胞TLR-2表达及分布的影响 被引量：5

7

作者 韦莉 金齐力 +1 位作者 刘勇 夏佩莹 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1158-1161,共4页

目的探讨结核分枝杆菌19kD脂蛋白(Mtb P19)对单核巨噬细胞表面TLR-2表达的影响。方法以10μg/ml Mtb P19作用于拂波醇酯(PMA)分化的THP-1细胞,CO2孵箱孵育6 h。免疫细胞化学法(ICC)观察巨噬细胞TLR-2分布;对巨噬细胞TLR-2进行荧光抗体染... 目的探讨结核分枝杆菌19kD脂蛋白(Mtb P19)对单核巨噬细胞表面TLR-2表达的影响。方法以10μg/ml Mtb P19作用于拂波醇酯(PMA)分化的THP-1细胞,CO2孵箱孵育6 h。免疫细胞化学法(ICC)观察巨噬细胞TLR-2分布;对巨噬细胞TLR-2进行荧光抗体染色,流式细胞术分析P19作用前后TLR-2的表达变化;激光共聚焦显微镜观察其受体排列。结果ICC法观察发现TLR-2均匀分布于巨噬细胞表面。P19作用组与对照组相比平均荧光强度明显增强;在作用组细胞表面出现多个斑块状染色阳性的荧光标记区,而对照组TLR-2分子总体呈现随机动态的分布。结论Mtb P19不仅能诱导巨噬细胞TLR-2表达增加,还可以引起受体发生功能性聚集。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌P19 THP-1细胞 TLR-2

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间日疟原虫乳酸脱氢酶编码区全长基因的克隆、序列分析及线性B细胞表位预测 被引量：2

8

作者 方强 夏惠 +3 位作者 王雪梅 齐文娟 常雪莲 高琪 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期519-523,共5页

目的克隆中国间日疟原虫乳酸脱氢酶(PvLDH)编码区全长基因,并对其进行生物信息学分析。方法自间日疟原虫抽提RNA,根据已知的PvLDH基因设计特异性引物,采用RT-PCR扩增PvLDH编码基因,将其克隆至pMD18-T载体,经PCR和双酶切鉴定后进行序列测... 目的克隆中国间日疟原虫乳酸脱氢酶(PvLDH)编码区全长基因,并对其进行生物信息学分析。方法自间日疟原虫抽提RNA,根据已知的PvLDH基因设计特异性引物,采用RT-PCR扩增PvLDH编码基因,将其克隆至pMD18-T载体,经PCR和双酶切鉴定后进行序列测定,利用生物信息学在线工具对序列进行分析并做B细胞表位预测。结果 PCR产物电泳结果显示所克隆的基因为951bp,基因测序结果与GenBank报道的基因序列有一个碱基差异,但编码氨基酸无差异。在线分析预测出12个B细胞表位,与恶性疟原虫乳酸脱氢酶预测表位对比分析,发现一个PvLDH特异性表位。结论成功克隆了我国间日疟原虫乳酸脱氢酶编码区全长基因,并预测出1个PvLDH特异性线性B细胞表位。 展开更多

关键词 间日疟原虫 乳酸脱氢酶 克隆 序列分析 B细胞表位

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粉尘螨生殖系统形态学研究 被引量：4

9

作者 吴桂华 刘志刚 孙新 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期810-816,共7页

粉尘螨Dermatophagoides farinae是一种重要的医学螨类。本文用光镜和扫描电镜研究了粉尘螨雌雄生殖系统的形态和结构。结果表明:雄性生殖系统由睾丸、输精管、附腺、射精管、阳茎及附属交配器官组成。睾丸位于血腔末端,不成对,精原细... 粉尘螨Dermatophagoides farinae是一种重要的医学螨类。本文用光镜和扫描电镜研究了粉尘螨雌雄生殖系统的形态和结构。结果表明:雄性生殖系统由睾丸、输精管、附腺、射精管、阳茎及附属交配器官组成。睾丸位于血腔末端,不成对,精原细胞、精母细胞和精子依照精子发育的顺序有规则地分布在其内部。雌性生殖系统包括交配孔、囊导管、储精囊、囊导管、卵巢、输卵管、子宫、产卵管及产卵孔,其中卵巢由一个中央营养细胞和围绕其周围的卵母细胞组成。 展开更多

关键词 粉尘螨 生殖系统 形态学 扫描电镜

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结核分枝杆菌P19对巨噬细胞功能及表型影响的研究

10

作者 韦莉 金齐力 +1 位作者 刘勇 夏佩莹 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期197-200,共4页

目的探讨结核分枝杆菌19kD脂蛋白(MtbP19)对单核巨噬细胞功能及表型的影响。方法以10μg/mLMtbP19作用于拂波醇酯(PMA)分化的THP-1细胞,CO2孵箱孵育,酶联免疫吸附法(ELISA)检测不同时间巨噬细胞TNF-α和IL-6的分泌水平;对巨噬细胞表型分... 目的探讨结核分枝杆菌19kD脂蛋白(MtbP19)对单核巨噬细胞功能及表型的影响。方法以10μg/mLMtbP19作用于拂波醇酯(PMA)分化的THP-1细胞,CO2孵箱孵育,酶联免疫吸附法(ELISA)检测不同时间巨噬细胞TNF-α和IL-6的分泌水平;对巨噬细胞表型分子HLA-DR进行荧光抗体染色,流式细胞术分析P19对巨噬细胞表型的影响;流式细胞术及光学显微镜研究MtbP19对巨噬细胞吞噬活性的影响。结果P19能够诱导巨噬细胞TNF-α和IL-6分泌水平的增加,呈时间依赖关系;经P19刺激的巨噬细胞HLA-DR表达增强,平均荧光强度(MFI)为(54.3±3.4)%,与BSA对照组(34.3±3.6)%比较P<0.05;P19能增强巨噬细胞的吞噬活性。结论MtbP19能诱导巨噬细胞活化,在感染过程中可能具有一定的抗结核保护作用。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌P19 THP-1细胞 细胞因子 表型分子 吞噬

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金黄色葡萄球菌肠毒素B对体外培养小鼠胚胎发育的影响

11

作者 闵宏林 管俊昌 +3 位作者 夏佩莹 刘勇 吕小艳 唐素兰 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期143-145,共3页

目的了解金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)对胚胎发育的影响。方法采用植入后全胚胎培养技术,将8.5d小鼠胚胎与终浓度分别为0.1、1及10μg/ml的SEB共培养48h后,观察SEB对胚胎生长发育和器官形态分化影响。结果SEB可影响体外小鼠胚胎的发育。... 目的了解金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)对胚胎发育的影响。方法采用植入后全胚胎培养技术,将8.5d小鼠胚胎与终浓度分别为0.1、1及10μg/ml的SEB共培养48h后,观察SEB对胚胎生长发育和器官形态分化影响。结果SEB可影响体外小鼠胚胎的发育。0.1μg/mlSEB首先影响卵黄囊直径,当SEB为1及10μg/ml时,胚胎生长发育指标和器官形态分化评分均明显低于对照组,并出现小头、脑膨出、前后神经管未闭、体位异常、鳃弓及前肢发育迟缓、大心包及心包积液等畸形。结论SEB能明显影响体外小鼠胚胎发育,可能是金葡菌L型导致体外胚胎发育畸形的主要机制之一。 展开更多

关键词 全胚胎培养 金黄色葡萄球菌 肠毒素B 胚胎发育

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金丝桃素对小鼠巨噬细胞内刚地弓形虫速殖子的增殖抑制作用 被引量：2

12

作者 崔洁 王旗 +9 位作者 杨小迪 孙希萌 汪瑞 姜辉 王守祥 张敏 魏明 夏惠 陈兴智 沈继龙 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期583-587,共5页

目的观察金丝桃素(Hypericin,Hy)对小鼠巨噬细胞内弓形虫的增殖抑制作用,为抗弓形虫天然药物的筛选提供线索。方法分离小鼠腹腔巨噬细胞(Macrophage,Mφ),建立体外Mφ感染稳定表达绿色荧光蛋白的弓形虫(RH-green fluorescent protein,RH... 目的观察金丝桃素(Hypericin,Hy)对小鼠巨噬细胞内弓形虫的增殖抑制作用,为抗弓形虫天然药物的筛选提供线索。方法分离小鼠腹腔巨噬细胞(Macrophage,Mφ),建立体外Mφ感染稳定表达绿色荧光蛋白的弓形虫(RH-green fluorescent protein,RH-GFP)速殖子模型,观察不同剂量Hy的最佳作用效果。实验分4组:(1)A组(对照组),不加Hy;(2)B组(Mφ感染RH-GFP+100μg/mL Hy);(3)C组(Mφ感染RH-GFP+200μg/mL Hy);(4)D组(Mφ感染RH-GFP+400μg/mL Hy),分别在培养1、2和3h后利用荧光显微镜和流式细胞术观察计数感染的Mφ和游离速殖子在各药物浓度及各时间点的变化;透射电镜观察虫体超微结构的变化。结果与对照组相比,随着Hy浓度的增加和用药时间的延长,Mφ内速殖子数量明显减少,游离速殖子数量也显著减少,荧光强度逐渐降低;经药物组不同浓度Hy作用后,游离/Mφ内弓形虫的比值逐渐升高,至400μg/mL剂量作用3h后开始下降,游离与胞内速殖子比例的差异在同一时间段内均有统计学意义(P<0.05),但药物作用1h或2h各实验组之间无统计学差异(P>0.05),作用3h各浓度组之间差异有统计学意义(P<0.05),各实验组同一药物浓度下在孵育1、2和3h后效果增强(P<0.05)。透射电镜观察显示,随Hy作用时间延长,虫体逐渐出现肿胀,胞膜与基质之间空隙明显,空泡形成且增多、变大,胞膜断裂,内部结构溶解溢出。结论体外实验初步显示Hy呈剂量和时间依赖性地增强对Mφ内弓形虫速殖子增殖的抑制作用,可降低宿主细胞感染率,且对胞外速殖子有一定杀伤作用。 展开更多

关键词 金丝桃素 刚地弓形虫 巨噬细胞 抑制

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