期刊文献+
共找到43篇文章
< 1 2 3 >
每页显示 20 50 100
真核表达的重组猪单链IL-12生物学活性的研究 被引量:2
1
作者 王雪梅 袁远英 +3 位作者 方强 夏惠 孙新 李柏青 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期691-695,共5页
目的:真核表达重组猪单链IL-12(pscIL-12)并鉴定表达的pscIL-12的生物学活性。方法:采用梭华-SofastTM将pcDNA3.1(+)-pscIL-12转入CHO-K1细胞,ELISA法测定细胞培养上清中pscIL-12的表达水平;MTT法检测细胞培养上清对NK细胞杀伤作用的影... 目的:真核表达重组猪单链IL-12(pscIL-12)并鉴定表达的pscIL-12的生物学活性。方法:采用梭华-SofastTM将pcDNA3.1(+)-pscIL-12转入CHO-K1细胞,ELISA法测定细胞培养上清中pscIL-12的表达水平;MTT法检测细胞培养上清对NK细胞杀伤作用的影响;ELISA法测定细胞培养上清刺激人PBMC分泌IFN-γ的水平;流式细胞术(FCM)检测细胞培养上清对人淋巴母细胞增殖水平的作用。结果:融合基因pscIL-12在CHO-K1细胞中表达产物pscIL-12融合蛋白含量较高;生物学活性鉴定表明:pscIL-12融合蛋白可增强NK细胞活性、提高IFN-γ的产生和促进人淋巴母细胞的增殖。结论:转染pcDNA3.1(+)-pscIL-12质粒的CHO-K1细胞成功表达了具有良好生物学活性的pscIL-12。 展开更多
关键词 白细胞介素-12 融合基因 真核表达
在线阅读 下载PDF
CRISPR-Cas系统在病原核酸检测中的研究进展 被引量:3
2
作者 杜瑶 高宏丹 +4 位作者 刘家坤 刘孝荣 邢志浩 张涛 马东礼 《合成生物学》 CSCD 北大核心 2024年第1期202-216,共15页
CRISPR-Cas系统作为原核生物获得性免疫系统,由簇状规则间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)和CRISPR相关蛋白(CRISPR-associated proteins,Cas)构成,因其识别和切割特定DNA或RNA序... CRISPR-Cas系统作为原核生物获得性免疫系统,由簇状规则间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)和CRISPR相关蛋白(CRISPR-associated proteins,Cas)构成,因其识别和切割特定DNA或RNA序列,而成为分子诊断领域研究的热点。研究人员利用Cas蛋白(Cas12、Cas13、Cas14、Cas3等)结合信号放大和转化技术(荧光法、电位法、比色法、侧向流动技术等),开发了许多高灵敏度、高特异性、低成本的诊断平台,为病原核酸检测提供了新途径。本文介绍了CRISPR-Cas系统的生物学机制及分类,总结现有的基于Cas蛋白反式切割活性开发的病原核酸检测技术,描述其特点、功能和应用场景,并对该系统的未来应用前景进行展望,期望CRISPR-Cas系统成为包括核酸检测在内的多靶标的理想检测平台。 展开更多
关键词 CRISPR-Cas系统 Cas12和Cas13 病原体 核酸检测 生物传感
在线阅读 下载PDF
胃癌中幽门螺杆菌L型感染与MIF、MMP9、VEGF表达的关系 被引量:46
3
作者 欧玉荣 康敏 +3 位作者 周蕾 承泽农 唐素兰 于东红 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期180-187,共8页
目的探讨胃癌组织中幽门螺杆菌L型(Hp-L)感染与巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和血管内皮生长因子(VEGF)表达之间的相互关系及临床意义。方法应用免疫组织化学染色法及革兰染色检测80例胃癌组织及50例癌旁正常组织... 目的探讨胃癌组织中幽门螺杆菌L型(Hp-L)感染与巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和血管内皮生长因子(VEGF)表达之间的相互关系及临床意义。方法应用免疫组织化学染色法及革兰染色检测80例胃癌组织及50例癌旁正常组织中Hp-L感染情况,同时检测上述组织中MIF、MMP9、VEGF蛋白的表达;运用RT-PCR及Western blotting法检测30例新鲜胃癌组织及相应切缘组织中MIFmRNA及MIF、MMP9、VEGF蛋白的表达。结果 80例胃癌组织中经免疫组化和革兰染色同时阳性病例有57例,与对照组相比具有显著性差异(71.25%vs 14%,P<0.05);胃癌组织中Hp-L阳性组中MIF、MMP9、VEGF蛋白表达阳性率高于Hp-L阴性组(P<0.05),且Hp-L感染与MIF、MMP9和VEGF表达均呈正相关关系(r=0.598,r=0.292,r=0.341,P<0.05)。30例胃癌新鲜组织中MIF-mRNA表达(1.583±0.177)高于对照组(1.407±0.078),两者差异具有显著性(t=3.729,P=0.001);Western blotting法检测MIF、MMP9、VEGF蛋白在胃癌组织中的表达显著高于癌旁正常组织;胃癌组织中MIF、MMP9均与肿瘤浸润深度及淋巴结转移有关,VEGF蛋白表达与肿瘤浸润深度有关(P<0.05)。结论 Hp-L型感染是促进胃癌的侵袭与转移的重要因素之一,其机制与上调胃癌组织中MIF、MMP9、VEGF表达有关。 展开更多
关键词 胃癌 幽门螺杆菌 细菌L型 巨噬细胞移动抑制因子 基质金属蛋白酶-9 血管内皮生长因子 matrix METALLOPROTEINASE 9
在线阅读 下载PDF
猪带绦虫抗原刺激囊虫病患者PBMC Th1/Th2细胞因子的表达及其免疫调节 被引量:6
4
作者 夏惠 王雪梅 +2 位作者 方强 李柏青 孙新 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期557-561,共5页
目的检测猪带绦虫不同虫期抗原刺激囊虫病患者外周血单个核细胞(PBMC)Th1/Th2细胞因子的表达水平,并分析其在囊虫病免疫调控中的作用。方法用流式细胞仪检测囊虫病患者新鲜血T淋巴细胞亚群,并以猪带绦虫六钩蚴抗原或囊尾蚴抗原刺激囊虫... 目的检测猪带绦虫不同虫期抗原刺激囊虫病患者外周血单个核细胞(PBMC)Th1/Th2细胞因子的表达水平,并分析其在囊虫病免疫调控中的作用。方法用流式细胞仪检测囊虫病患者新鲜血T淋巴细胞亚群,并以猪带绦虫六钩蚴抗原或囊尾蚴抗原刺激囊虫病患者PBMC,分别在刺激的第0d、5d、10d和15d时检测Th1/Th2细胞因子(IFN-γ及IL-4),对分泌IFN-γ或IL-4的不同细胞群体进行数据分析。结果囊虫病患者新鲜血T淋巴细胞亚群CD3+与CD4+细胞较正常人升高,CD4+/CD8+较正常人升高,分泌IFN-γ及IL-4的CD3+细胞百分率较正常人升高;猪囊尾蚴抗原刺激囊虫病患者PB-MC第0d、5d、10d和15d时,分泌IFN-γ的CD3+细胞百分率分别为25.42%±5.53%,30.46%±4.94%,36.52%±4.73%,38.69%±5.58%;分泌IL-4的CD3+细胞百分率分别为2.52%±0.52%,3.00%±0.57%,3.81%±0.70%,5.03%±0.73%。六钩蚴抗原刺激囊虫病患者PBMC分泌IFN-γ及IL-4的CD3+细胞百分率亦呈现相同的变化趋势。结论囊虫病患者与正常人相比PBMC中存在T淋巴细胞的极化水平异常,CD3+与CD4+细胞百分率均显著升高,T细胞亚群比例失调,免疫功能紊乱;随着囊尾蚴抗原刺激外周血PBMC时间延长,分泌IFN-γ和IL-4的CD3+细胞百分率逐渐升高。 展开更多
关键词 猪囊尾蚴抗原 六钩蚴抗原 囊虫病 流式细胞仪 TH1/TH2
在线阅读 下载PDF
伤寒沙门菌诱导巨噬细胞凋亡机制的探讨 被引量:5
5
作者 刘婷婷 马丽娜 +2 位作者 李凤云 刘勇 樊蓉 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期239-242,共4页
目的了解伤寒沙门菌诱导巨噬细胞凋亡机制。方法在巨噬细胞中分别加入caspase3,caspase8,caspase9抑制剂和TNF-α抗体共孵育后加入伤寒沙门菌建立感染模型,于8h后用流式细胞术检测细胞凋亡率,进一步检测伤寒沙门菌作用巨噬细胞8h后caspa... 目的了解伤寒沙门菌诱导巨噬细胞凋亡机制。方法在巨噬细胞中分别加入caspase3,caspase8,caspase9抑制剂和TNF-α抗体共孵育后加入伤寒沙门菌建立感染模型,于8h后用流式细胞术检测细胞凋亡率,进一步检测伤寒沙门菌作用巨噬细胞8h后caspase3,caspase8,caspase9含量和TNF-α、NO产生量。结果caspase3,caspase8抑制剂和TNF-α抗体均能不同程度抑制伤寒沙门菌诱导的巨噬细胞凋亡(P<0.01);且作用8h后caspase3、caspase8及NO、TNF-α的产生量均高于对照组(P<0.01)。结论伤寒沙门菌诱导巨噬细胞凋亡可以由NO及TNF-α介导,caspase3和caspase8参与的外源性凋亡途迳。 展开更多
关键词 伤寒沙门菌 巨噬细胞 凋亡 CASPASE3 CASPASE8 TNF-Α NO
在线阅读 下载PDF
屋尘螨成螨形态的扫描电镜观察 被引量:8
6
作者 赵学影 刘晓宇 +2 位作者 李玲 孙新 刘志刚 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期493-496,I0001,I0002,共6页
【目的】利用扫描电子显微镜(scanning electron microscopy,SEM)观察屋尘螨Dermatophagoides pteronyssinus颚体、躯体、外生殖器及足等的形态结构。【方法】从床尘、枕尘中采集屋尘螨,分离出雌雄成螨,在体视显微镜下清洗处理活螨后,用... 【目的】利用扫描电子显微镜(scanning electron microscopy,SEM)观察屋尘螨Dermatophagoides pteronyssinus颚体、躯体、外生殖器及足等的形态结构。【方法】从床尘、枕尘中采集屋尘螨,分离出雌雄成螨,在体视显微镜下清洗处理活螨后,用SEM观察其外部形态特征。【结果】SEM照片显示,屋尘螨螯肢钳状,须肢扁平;体表具细密皮纹,似指纹状,纹间距小于2μm。外生殖器位于腹面正中,雌螨为产卵孔,雄螨生殖孔具1对叶状生殖盖。肛门呈纵行裂孔,雄螨具2个肛吸盘。雌螨足跗节末端各具爪垫1个,雄螨跗节Ⅳ具2个吸盘。【结论】本研究观察结果为尘螨鉴定提供了更多依据。 展开更多
关键词 尘螨 屋尘螨 成螨 形态 扫描电子显微镜
在线阅读 下载PDF
金黄色葡萄球菌α溶血素诱导脐静脉内皮细胞凋亡机制的研究 被引量:4
7
作者 刘婷婷 刘从森 +3 位作者 管俊昌 闵宏林 李凤云 夏佩莹 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期569-571,共3页
目的了解金黄色葡萄球菌(金葡菌)α溶血素诱导脐静脉内皮细胞凋亡机制。方法将不同浓度金葡菌α溶血素感染脐静脉内皮细胞8h后,检测TNF-α、caspase-3及caspase-8的产生量,同时检测加入TNF-α抗体、caspase-3和caspase-8抑制剂后的细胞... 目的了解金黄色葡萄球菌(金葡菌)α溶血素诱导脐静脉内皮细胞凋亡机制。方法将不同浓度金葡菌α溶血素感染脐静脉内皮细胞8h后,检测TNF-α、caspase-3及caspase-8的产生量,同时检测加入TNF-α抗体、caspase-3和caspase-8抑制剂后的细胞凋亡率。结果金葡菌α溶血素感染脐静脉内皮细胞8h后,TNF-α、caspase-3、caspase-8的产生量与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01);而加入TNF-α抗体、caspase-3和caspase-8抑制剂后凋亡率明显降低(P<0.01)。结论金葡菌α溶血素诱导脐静脉内皮细胞凋亡的机制可能是通过TNF-α介导的caspase-8及caspase-3激活的外源性死亡因子受体途径,这为我们进一步研究金葡菌L型垂直感染与治疗提供了新的思路。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 α溶血素 脐静脉内皮细胞 凋亡 机制
在线阅读 下载PDF
旋毛虫及其虫源性蛋白对盲肠结扎穿孔诱导的小鼠哝毒症的影响 被引量:6
8
作者 李徽徽 贺文欣 +9 位作者 宋迪 吴琦 李楠 万勇坤 张慧 仇大鹏 褚亮 王黎源 杨小迪 方强 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1048-1054,共7页
目的观察旋毛虫及其虫源性蛋白对盲肠结扎穿孔(CLP)诱导的小鼠脓毒症的影响。方法 80只雄性BALB/c小鼠随机分为假手术组、CLP组、旋毛虫肌幼虫(ML)预感染组、旋毛虫肌幼虫虫体可溶性蛋白(SMP)处理组和排泄分泌蛋白(MES)处理组。ML预感... 目的观察旋毛虫及其虫源性蛋白对盲肠结扎穿孔(CLP)诱导的小鼠脓毒症的影响。方法 80只雄性BALB/c小鼠随机分为假手术组、CLP组、旋毛虫肌幼虫(ML)预感染组、旋毛虫肌幼虫虫体可溶性蛋白(SMP)处理组和排泄分泌蛋白(MES)处理组。ML预感染组于术前28 d经口感染300条旋毛虫肌幼虫,其余各组分别于术后30 min腹腔注射PBS或SMP(25μg/只)或MES(25μg/只)。观察小鼠术后状态和72 h生存率,检测术后12 h小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)水平及TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10、TGF-β水平,观察小鼠肝和肾组织病变。结果与假手术组相比,CLP组72 h生存率降低,血清中ALT、AST、BUN和Cr水平及细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10和TGF-β水平均明显升高(P<0.05)。肝中肝索排列紊乱,肝细胞水肿,肾中部分血管球皱缩,肾小管细胞水肿。与CLP组相比,ML预感染组血清中ALT、AST、Cr、TNF-α和IL-1β水平降低,IL-10和TGF-β水平升高(P<0.05);SMP处理组血清中ALT、AST、Cr、TNF-α和IL-1β水平降低,TGF-β水平升高(P<0.05);MES处理组72 h生存率明显升高,血清中ALT、AST、BUN、Cr、TNF-α、IL-6和IL-1β水平明显降低,IL-10和TGF-β水平明显升高(P<0.05),肝和肾组织结构损伤明显减轻。结论旋毛虫及其虫源性蛋白可减少CLP诱导的脓毒症小鼠血清中促炎因子的释放,促进免疫调节因子的释放,其中MES效果更为显著,并能减轻肝和肾结构和功能的损伤。 展开更多
关键词 脓毒症 旋毛虫 盲肠结扎穿孔 排泄分泌蛋白 促炎因子 免疫调节因子
在线阅读 下载PDF
猪囊尾蚴病患者IFN-γ、IL-4的免疫组织化学研究 被引量:5
9
作者 王雪梅 胡守锋 +4 位作者 孙新 沈继龙 夏惠 方强 陈兴智 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期792-796,共5页
目的观察猪囊尾蚴病患者局部病灶的病理学特征及IFN-γ/IL-4表达情况,探讨IFN-γ/IL-4在免疫调控中的作用及意义。方法对病变组织进行苏木素伊红(HE)染色观察炎性细胞浸润情况;并用链霉菌抗生物素蛋白—过氧化酶(SP)免疫组织化学方法观... 目的观察猪囊尾蚴病患者局部病灶的病理学特征及IFN-γ/IL-4表达情况,探讨IFN-γ/IL-4在免疫调控中的作用及意义。方法对病变组织进行苏木素伊红(HE)染色观察炎性细胞浸润情况;并用链霉菌抗生物素蛋白—过氧化酶(SP)免疫组织化学方法观察其IFN-γ/IL-4的表达水平。结果45例病变组织中35例有IFN-γ的表达,阳性表达率为77.78%,24例有IL-4的表达,阳性表达率为53.33%,阳性表达多定位于异物巨细胞、淋巴细胞和巨噬细胞的胞浆;脑型囊尾蚴病IL-4的阳性表达强度高于皮肌型。结论猪囊尾蚴感染的病变组织中有多种类型炎细胞浸润,以异物巨细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞浸润为主;炎细胞中IFN-γ表达较普遍,同时也有IL-4的表达。 展开更多
关键词 猪囊尾蚴病 IFN-Γ IL-4 免疫组织化学
在线阅读 下载PDF
丝裂原蛋白激酶两种抑制剂对弓形虫侵入宿主细胞影响的差异 被引量:4
10
作者 杨小迪 陈兴智 +6 位作者 徐军 孙新 常雪莲 王媛媛 胡守锋 葛晓松 李柏青 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期97-99,共3页
目的观察两种丝裂原蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPK)抑制剂PD98059及U0126对刚地弓形虫侵入宿主细胞的影响,探讨其对弓形虫速殖子侵入宿主细胞信号转导途径的不同阻断效应。方法丝裂原蛋白激酶抑制剂PD98059或U0126... 目的观察两种丝裂原蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPK)抑制剂PD98059及U0126对刚地弓形虫侵入宿主细胞的影响,探讨其对弓形虫速殖子侵入宿主细胞信号转导途径的不同阻断效应。方法丝裂原蛋白激酶抑制剂PD98059或U0126分别在不同时间及不同剂量作用于速殖子-宿主细胞培养系统,用流式细胞仪(FCM)检测宿主细胞感染速殖子的差异。结果流式细胞仪检测加入U01261μmol/L、10μmol/L和100μmol/L的细胞培养孔的细胞感染弓形虫速殖子的量分别比对照组平均降低了26.10%(P<0.01),66.42%(P<0.01)和70.39%(P<0.01)。而加入PD980591μmol/L、10μmol/L和100μmol/L的分别比对照组平均降低了25.45%(P<0.01),53.01%(P<0.01)和64.70%(P<0.01)。实验中发现100μmol/L U0126作用培养细胞9h的时候,可导致HL-60细胞出现部分聚集成团、漂浮的中毒现象。结论U0126和PD98059均可明显抑制弓形虫速殖子侵入宿主细胞,但其差异无显著性,其机制有待进一步探索。 展开更多
关键词 弓形虫 速殖子 MAP激酶 U0126 PD98059
在线阅读 下载PDF
金黄色葡萄球菌及其L型诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡研究 被引量:4
11
作者 刘勇 徐飞 +1 位作者 管俊昌 夏佩莹 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第8期735-735,730,共2页
关键词 巨噬细胞凋亡 金黄色葡萄球菌 L型诱导 小鼠腹腔 细菌感染 特异性免疫 感染性疾病 非特异性 体外培养
在线阅读 下载PDF
金葡菌L型对小鼠体外胚胎发育的影响 被引量:6
12
作者 管俊昌 刘勇 +1 位作者 徐飞 夏佩莹 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第11期954-957,共4页
目的了解金黄色葡萄球菌(金葡菌)L型对胚胎发育的影响。方法采用植入后全胚胎培养技术,将8.5d小鼠胚胎与终浓度分别为50、100、200、400CFU/ml的金葡菌L型共培养48h后,观察金葡菌L型对胚胎生长发育和器官形态分化影响。结果金葡菌L型可... 目的了解金黄色葡萄球菌(金葡菌)L型对胚胎发育的影响。方法采用植入后全胚胎培养技术,将8.5d小鼠胚胎与终浓度分别为50、100、200、400CFU/ml的金葡菌L型共培养48h后,观察金葡菌L型对胚胎生长发育和器官形态分化影响。结果金葡菌L型可影响体外小鼠胚胎的发育。50CFU/ml组胚胎生长发育指标头长和颅臀长首先受到影响,100CFU/ml及以上组胚胎生长发育指标和器官形态分化评分均明显低于对照组,并出现大心包、脑膨出、前后神经管未闭及体位异常等畸形。结论金葡菌L型对小鼠胚胎发育具有致畸性,其致畸作用可能是通过影响脏层卵黄囊功能与直接攻击胚胎的综合作用。 展开更多
关键词 全胚胎培养 金黄色葡萄球菌 细菌L型 胚胎发育
在线阅读 下载PDF
基于mtDNA-COI基因序列分析我国中华按蚊种群的遗传结构 被引量:10
13
作者 常雪莲 钟代斌 +6 位作者 李小聪 黄亚铭 朱国鼎 魏星 夏惠 陈晓光 方强 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期234-238,247,共6页
目的探讨我国中华按蚊种群遗传多样性、遗传分化及种群系统发育关系。方法本实验采用2010-2012年间在我国山东,安徽,江苏,贵州,广西和云南等6个不同地理环境采集的中华按蚊样品,进行线粒体COI基因扩增并测序。采用Bioedit 7.0软件对测... 目的探讨我国中华按蚊种群遗传多样性、遗传分化及种群系统发育关系。方法本实验采用2010-2012年间在我国山东,安徽,江苏,贵州,广西和云南等6个不同地理环境采集的中华按蚊样品,进行线粒体COI基因扩增并测序。采用Bioedit 7.0软件对测序结果进行比对分析;运用Dna SP 5.0软件确定种群遗传结构特点;应用Arlequin 3.1软件计算种群的遗传距离及遗传分化系数;通过IBDWS在线软件来明确遗传距离与地理距离的相关性;使用PHYLIP 3.6软件构建种群系统发育进化树。结果六个中华按蚊种群共123个雌蚊个体的PCR产物成功扩增和测序。PCR扩增中华按蚊线粒体COI基因序列大小为814 bp,平均A+T含量(71.2%)>平均G+C含量(28.8%)。线粒体COI序列分析结果显示,种群具有丰富的遗传多样性;分子变异等级分析表明中华按蚊遗传分化主要来自于种群内部;种群间存在一定的地理隔离现象。中性检验,错配分析及聚类进化树结果显示:中华按蚊种群发展经历扩张状态,而云南种群相对其他种群较独立,在系统树中为孤立一支。结论线粒体COI基因可以作为研究中华按蚊种群遗传结构和系统进化的理想分子标志。云南种群遗传发育较其他地理种群具有一定特殊性。 展开更多
关键词 中华按蚊 mtDNA-COI 种群遗传
在线阅读 下载PDF
结核病DNA疫苗pVAX1/ESAT-6的构建、鉴定及免疫效应评价 被引量:4
14
作者 王雪梅 王英 +5 位作者 薛玉芹 陈勇 陶志勇 夏惠 唐洁 方强 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期945-950,共6页
目的构建结核病DNA疫苗pVAX1/ESAT-6并探讨其诱导的免疫效应。方法将扩增自结核杆菌基因组的ESAT-6基因装入pVAX1载体构建pVAX1/ESAT-6重组质粒;经酶切、测序鉴定后,利用阳离子聚合物介导将重组质粒pVAX1/ESAT-6转染Hela细胞,分别以RT-... 目的构建结核病DNA疫苗pVAX1/ESAT-6并探讨其诱导的免疫效应。方法将扩增自结核杆菌基因组的ESAT-6基因装入pVAX1载体构建pVAX1/ESAT-6重组质粒;经酶切、测序鉴定后,利用阳离子聚合物介导将重组质粒pVAX1/ESAT-6转染Hela细胞,分别以RT-PCR法检测ESAT-6 mRNA的表达、间接免疫荧光法检测ESAT-6蛋白表达。重组质粒经体内电转染免疫小鼠后,采用ELISA法测定小鼠血清中IFN-γ及抗ESAT-6特异性抗体IgG的水平;流式细胞术检测小鼠淋巴细胞增殖水平;ELISPOT检测产生IFN-γ的淋巴细胞频数。结果构建的重组质粒pVAX1/ESAT-6经双酶切于3000 bp和300 bp处各见1条带,测序结果显示插入序列与ESAT-6基因序列无差异。重组质粒转染Hela细胞后,RT-PCR产物经琼脂糖凝胶电泳于约300 bp处见目的条带,间接免疫荧光检测显示特异性绿色荧光。重组质粒免疫小鼠后,血清中抗ESAT-6特异性抗体IgG水平较对照组(空质粒组和生理盐水对照组)明显升高;血清中IFN-γ水平、小鼠脾淋巴细胞增殖水平及产生IFN-γ的淋巴细胞数明显均高于对照组(空质粒组和生理盐水对照组)。结论成功构建了结核病DNA疫苗pVAX1/ESAT-6,该疫苗可有效诱导小鼠产生特异性细胞免疫和体液免疫效应。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 ESAT-6 DNA疫苗 细胞免疫 体液免疫
在线阅读 下载PDF
结核分枝杆菌P19对巨噬细胞TLR-2表达及分布的影响 被引量:5
15
作者 韦莉 金齐力 +1 位作者 刘勇 夏佩莹 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1158-1161,共4页
目的探讨结核分枝杆菌19kD脂蛋白(Mtb P19)对单核巨噬细胞表面TLR-2表达的影响。方法以10μg/ml Mtb P19作用于拂波醇酯(PMA)分化的THP-1细胞,CO2孵箱孵育6 h。免疫细胞化学法(ICC)观察巨噬细胞TLR-2分布;对巨噬细胞TLR-2进行荧光抗体染... 目的探讨结核分枝杆菌19kD脂蛋白(Mtb P19)对单核巨噬细胞表面TLR-2表达的影响。方法以10μg/ml Mtb P19作用于拂波醇酯(PMA)分化的THP-1细胞,CO2孵箱孵育6 h。免疫细胞化学法(ICC)观察巨噬细胞TLR-2分布;对巨噬细胞TLR-2进行荧光抗体染色,流式细胞术分析P19作用前后TLR-2的表达变化;激光共聚焦显微镜观察其受体排列。结果ICC法观察发现TLR-2均匀分布于巨噬细胞表面。P19作用组与对照组相比平均荧光强度明显增强;在作用组细胞表面出现多个斑块状染色阳性的荧光标记区,而对照组TLR-2分子总体呈现随机动态的分布。结论Mtb P19不仅能诱导巨噬细胞TLR-2表达增加,还可以引起受体发生功能性聚集。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌P19 THP-1细胞 TLR-2
在线阅读 下载PDF
三种免疫调节剂增强弓形虫重组ROP2疫苗保护效应的研究 被引量:3
16
作者 陈兴智 杨小迪 +4 位作者 杨雯 陈勇 刘丽丽 沈继龙 孙新 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期570-574,共5页
目的观察弗氏佐剂(Freund’s Adjuvant,FA)、匹多莫德(Pidotimod,PT)和西咪替丁(Cimetidine,CIM)等3种免疫调节剂增强重组弓形虫棒状体蛋白2(rROP2)疫苗的免疫保护效应。方法将100只BALB/c小鼠随机分为PBS对照组、重组rROP2疫苗组、FA-r... 目的观察弗氏佐剂(Freund’s Adjuvant,FA)、匹多莫德(Pidotimod,PT)和西咪替丁(Cimetidine,CIM)等3种免疫调节剂增强重组弓形虫棒状体蛋白2(rROP2)疫苗的免疫保护效应。方法将100只BALB/c小鼠随机分为PBS对照组、重组rROP2疫苗组、FA-rROP2疫苗组、PT-rROP2疫苗组和CIM-rROP2疫苗组等5组;FA、PT和CIM分别与rROP2抗原混合皮下注射免疫,检测小鼠细胞免疫和体液免疫指标,并观察弓形虫RH株攻击感染后的生存时间。结果 FA-rROP2组、CIM-rROP2组小鼠血清IFN-γ、特异性IgG、脾细胞增殖活性及外周血CD4+/CD8+比值均显著高于rROP2蛋白组(P<0.05);PT对外周血CD4+/CD8+比值无明显影响,但显著增加了IFN-γ的水平及脾细胞增殖活性。小鼠攻击试验表明,FA-rROP2组、PT-rROP2组以及CIM-rROP2组小鼠存活时间显著长于rROP2组和PBS对照组组;rROP2蛋白组各项指标均显著高于PBS组(P<0.05)。结论 FA、PT和CIM可增强rROP2蛋白抗原诱导的细胞免疫和体液免疫反应,都能延长攻击感染小鼠的生存时间,具有增强rROP2蛋白疫苗保护效应的功能。其中CIM的佐剂样免疫促进作用接近于FA,但副作用显著低于后者,具有临床实用的潜在价值。 展开更多
关键词 弓形虫 弗氏佐剂 匹多莫德 西咪替丁 ROP2蛋白 免疫佐剂
在线阅读 下载PDF
猪囊尾蚴期特异性抗原cC1的克隆与高效可溶性原核表达 被引量:4
17
作者 方强 骆江坤 +3 位作者 崔琢 齐文娟 胡元生 沈继龙 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期206-209,共4页
目的克隆猪囊尾蚴期特异性抗原cC1基因,并进行高效可溶性原核表达。方法利用PT-PCR从猪囊尾蚴中获得cC1编码基因,T-A克隆后,将cC1插入原核表达载体pET28a中,经酶切、测序鉴定后将其转入宿主菌E.coli BL21(DE3)中,通过IPTG诱导表达并优... 目的克隆猪囊尾蚴期特异性抗原cC1基因,并进行高效可溶性原核表达。方法利用PT-PCR从猪囊尾蚴中获得cC1编码基因,T-A克隆后,将cC1插入原核表达载体pET28a中,经酶切、测序鉴定后将其转入宿主菌E.coli BL21(DE3)中,通过IPTG诱导表达并优化表达条件,表达的融合蛋白Ni+-亲和层析柱纯化后经快速液相蛋白层析分离系统检测其纯度。采用SDS-PAGE和Western-blotting对目的蛋白进行分析和鉴定。结果RT-PCR扩增出的片段长度为1056bp,构建的重组表达质粒经PCR、酶切验证,和预期的结果一致,测序鉴定与Genbank中cC1基因相比于423位存在1个同义突变。转化有重组质粒的E. coli BL21(DE3)经过0.05mmol/LIPTG 37℃诱导6h高效表达了占菌体蛋白总量60%的可为囊虫病患者血清识别的相对分子质量约为40000的可溶性融合蛋白,经Ni+-亲和层析柱纯化后纯度达94%。结论成功克隆并高效可溶性原核表达了猪囊尾蚴期特异性抗原cC1,为其进一步研究和应用奠定了基础。 展开更多
关键词 猪囊尾蚴 抗原cC1 克隆 原核表达 条件优化
在线阅读 下载PDF
金葡菌及L型诱导脐静脉内皮细胞凋亡的研究 被引量:3
18
作者 管俊昌 刘勇 +1 位作者 徐飞 夏佩莹 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第11期951-953,950,共4页
目的比较金黄色葡萄球菌(金葡菌)及其L型诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的差异。方法用TUNEL法及流式细胞仪检测金葡菌及其L型感染HUVECs2、4、6、8与10h后各时间段的细胞凋亡率。结果金葡菌及其L型均能诱导HUVECs发生凋亡,与对照组... 目的比较金黄色葡萄球菌(金葡菌)及其L型诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的差异。方法用TUNEL法及流式细胞仪检测金葡菌及其L型感染HUVECs2、4、6、8与10h后各时间段的细胞凋亡率。结果金葡菌及其L型均能诱导HUVECs发生凋亡,与对照组比较差异有显著性意义(P<0.05或P<0.01);L型诱导细胞的凋亡率均弱于金葡菌(P<0.01)。结论金葡菌L型诱导HUVEC发生凋亡的能力虽较其原型弱,但其对胚胎发育的潜在致病性值得重视。 展开更多
关键词 金葡菌L型 诱导 脐静脉 内皮细胞 细胞凋亡
在线阅读 下载PDF
谷跗线螨交叉反应性变应原的定位 被引量:2
19
作者 赵学影 赵振富 +2 位作者 孙新 刘志刚 吕艳思 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期848-852,共5页
为明确谷跗线螨Tarsonemus granarius交叉反应性变应原在体内的定位,制作谷跗线螨石蜡切片,HE染色后光镜观察其内部形态结构;选用对尘螨过敏患者的阳性血清特异性IgE抗体作探针,免疫组织化学染色分析其交叉反应性抗原存在位置。HE染色... 为明确谷跗线螨Tarsonemus granarius交叉反应性变应原在体内的定位,制作谷跗线螨石蜡切片,HE染色后光镜观察其内部形态结构;选用对尘螨过敏患者的阳性血清特异性IgE抗体作探针,免疫组织化学染色分析其交叉反应性抗原存在位置。HE染色显示谷跗线螨的消化系统占据其体腔的大部分,包括口咽部、中肠、后肠、肛门和唾液腺等结构。免疫组织化学染色显示谷跗线螨的口咽部、中肠、肠内容物、肠壁及生殖腺等均有阳性反应。谷跗线螨体内存在可诱发人体IgE抗体的变应原,变应原在其体内的分布格局与屋尘螨Dermatophagoides pteronyssinus基本一致。 展开更多
关键词 谷跗线螨 跗线螨科 变应原 抗原定位 免疫组织化学 HE染色 交叉反应性
在线阅读 下载PDF
妊娠期母鼠给予葡萄球菌肠毒素B对成年子代CD3^+TCR Vβ8^+T细胞的影响 被引量:2
20
作者 管俊昌 刘勇 +5 位作者 孔晓明 朱翔 余峰玲 林娜 刘从森 张涛 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1230-1233,共4页
目的观察妊娠期母鼠给予葡萄球菌肠毒B(SEB)对成年子代CD3+TCR Vβ8+T细胞的影响。方法在妊娠16 d时给予SD大鼠尾静脉注射15μg SEB,同时设立PBS对照组。孕鼠自然分娩后子代鼠生长至成年,流式细胞仪检测成年子代鼠胸腺及外周血中CD3+TC... 目的观察妊娠期母鼠给予葡萄球菌肠毒B(SEB)对成年子代CD3+TCR Vβ8+T细胞的影响。方法在妊娠16 d时给予SD大鼠尾静脉注射15μg SEB,同时设立PBS对照组。孕鼠自然分娩后子代鼠生长至成年,流式细胞仪检测成年子代鼠胸腺及外周血中CD3+TCR Vβ8+T细胞;并观察成年子代鼠再次给予SEB时胸腺及外周血中CD3+TCR Vβ8+T细胞的应答变化。结果妊娠期母鼠给予SEB可导致雌、雄性成年子代鼠胸腺CD3+TCR Vβ8+T细胞的比例(雌性:1.760,雄性:1.098),较对照组的(雌性:2.714,雄性:2.088)明显减少(P<0.05),其外周血中CD3+TCR Vβ8+T细胞的变化与胸腺中类似。PBS组的雌雄性成年子代鼠给予SEB后其胸腺及外周血中CD3+TCR Vβ8+T细胞较同窝对照组明显减少(P<0.05);而SEB组的雌雄性成年子代鼠给予SEB后与其同窝PBS对照组比较,胸腺中CD3+TCR Vβ8+T细胞无变化(P>0.05),但外周血中CD3+TCR Vβ8+T细胞则明显增加(P<0.05)。结论妊娠期母鼠给予SEB改变其成年子代大鼠CD3+TCR Vβ8+T细胞对再次SEB刺激的应答方式。 展开更多
关键词 妊娠 CD3+TCR Vβ8+T细胞 胸腺 葡萄球菌肠毒B
在线阅读 下载PDF
上一页 1 2 3 下一页 到第
使用帮助 返回顶部