低相对分子质量肝素对人肝癌细胞生长的影响及机制 被引量：3

1

作者 于北凯 程龙 +2 位作者 翟玮玮 史维维 武文娟 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期149-153,共5页

目的探讨低相对分子质量肝素(LMWH)对体外培养人肝癌细胞SMMC-7721增殖、细胞周期分布及周期调控相关基因Skp2和c-Myc表达的影响。方法体外培养SMMC-7721细胞,经不同浓度LMWH作用不同时间后,MTT比色法检测细胞存活和生长情况。将对照组... 目的探讨低相对分子质量肝素(LMWH)对体外培养人肝癌细胞SMMC-7721增殖、细胞周期分布及周期调控相关基因Skp2和c-Myc表达的影响。方法体外培养SMMC-7721细胞,经不同浓度LMWH作用不同时间后,MTT比色法检测细胞存活和生长情况。将对照组和LMWH处理组(400、800 IU/mL)细胞培养36 h后,流式细胞术检测细胞周期分布情况;RT-PCR检测细胞Skp2、c-Myc mRNA表达的变化;Western blotting检测Skp2、c-Myc蛋白表达的变化。结果与对照组相比,经LMWH作用后SMMC-7721细胞的生长受到抑制,且在一定范围内呈药物浓度和时间依赖关系;细胞周期分布发生变化,随LMWH剂量增加,S期细胞比例显著下降(P<0.05),G0/G1期细胞比例显著上升(P<0.05);同时,Skp2、c-Myc的mRNA和蛋白的表达量均呈剂量依赖性降低(P<0.05)。结论 LMWH可抑制SMMC-7721细胞的生长,其机制可能与降低Skp2、c-Myc的表达,阻滞细胞于G0/G1期,从而降低细胞增殖指数有关。 展开更多

关键词 低相对分子质量肝素 肝癌 增殖 细胞周期

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三氧化二砷抑制小鼠B16黑色素瘤生长作用及其机制 被引量：18

2

作者 夏俊 陈俊霞 +2 位作者 于丽华 崔秀云 陈治文 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第9期1054-1058,共5页

目的　探讨三氧化二砷 (As2 O3 )对小鼠B16黑色素瘤的生长及其血管生成的抑制作用 ;同时观察其对B16细胞增殖活性、细胞形态、细胞周期及凋亡的影响。方法　选用小鼠黑色素瘤B16细胞接种C5 7BL/ 6J小鼠 ,观察腹腔注射As2 O3 对实体瘤的... 目的　探讨三氧化二砷 (As2 O3 )对小鼠B16黑色素瘤的生长及其血管生成的抑制作用 ;同时观察其对B16细胞增殖活性、细胞形态、细胞周期及凋亡的影响。方法　选用小鼠黑色素瘤B16细胞接种C5 7BL/ 6J小鼠 ,观察腹腔注射As2 O3 对实体瘤的重量及成瘤率的影响 ;应用HE染色、Ⅷ RAg免疫组化染色观测瘤组织内新生血管密度 ;采用CellTiter 96AqueousOne试剂检测B16细胞增殖活力 ;Giem sa染色、Feulgen染色观察细胞形态学变化 ;流式细胞术分析细胞周期及细胞凋亡。结果　As2 O3 能显著抑制小鼠B16黑色素瘤的生长 ,治疗组成瘤率为 37 5 % ,抑瘤率达81 6 1% ,并能显著抑制瘤组织内血管生成 ;体外实验观察到As2 O3 能抑制B16细胞增殖 ,并存在浓度依赖效应 ,IC50 为32 99μmol·L-1;细胞形态学观察结果显示As2 O3 使B16细收稿日期 :2 0 0 4-0 2 -17,修回日期 :2 0 0 4-0 3 -2 8基金项目 :安徽省教育厅资助项目 ,No 2 0 0 4kJ2 79作者简介 :夏　俊 ( 1965 -) ,女 ,硕士 ,副教授 ,硕士生导师 ,研究方向 :肿瘤分子生物学 ,Tel:0 5 5 2 3 0 664 12 2 0 97,E mail:xia jun1965 @yahoo .com .cn崔秀云 ( 1941-) ,女 ,教授 ,博士生导师 ,研究方向 :癌基因与抑癌基因 ,Tel:0 411 472 0 64 8,E mail:cuixy @dlmedu .edu . 展开更多

关键词 三氧化二砷 B16细胞 血管生成 增殖抑制作用 细胞凋亡

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三氧化二砷对恶性黑色素瘤A_(375)细胞的增殖抑制作用 被引量：11

3

作者 陈治文 夏俊 +1 位作者 胡守芬 马佳 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期567-569,共3页

目的　研究三氧化二砷 (As2 O3 )对人恶性黑色素瘤A3 75细胞的增殖抑制作用和抗转移作用 ,为砷及其化合物治疗恶性黑色素瘤提供新的理论和实验依据。方法　用MTT比色法测定A3 75细胞活力 ,用免疫组化方法分析nm2 3蛋白的表达。结果　As2... 目的　研究三氧化二砷 (As2 O3 )对人恶性黑色素瘤A3 75细胞的增殖抑制作用和抗转移作用 ,为砷及其化合物治疗恶性黑色素瘤提供新的理论和实验依据。方法　用MTT比色法测定A3 75细胞活力 ,用免疫组化方法分析nm2 3蛋白的表达。结果　As2 O3 与人恶性黑色素瘤细胞株A3 75细胞生长抑制率之间有明显的浓度依赖关系 ,IC50 为 13 0 5 μmol·L-1,用药组 (As2 O3 浓度为 2 μmol·L-1)A3 75细胞中有nm2 3抗肿瘤转移基因的表达 ,而对照组则没有。结论　As2 O3 对恶性黑色素瘤A3 75细胞的增殖有浓度依赖性抑制作用 ,并可诱导体内产生nm2 3蛋白 。 展开更多

关键词 三氧化二砷 恶性黑色素瘤A375细胞 nm23抗转移基因 增殖抑制作用 抗转移作用

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IL-1β促进肺癌细胞增殖的作用机制研究 被引量：10

4

作者 石玉荣 吴军录 +1 位作者 权文强 李冬 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期20-24,共5页

目的:研究IL-1β在巨噬细胞促进肺癌细胞增殖的作用机制。方法:采用Transwell插入式细胞培养皿共培养人肺癌细胞株A549、NCI-H520细胞和巨噬细胞。Brd U-ELISA法检测巨噬细胞对肺癌细胞的增殖能力。采用Real-time PCR法检测巨噬细胞和... 目的:研究IL-1β在巨噬细胞促进肺癌细胞增殖的作用机制。方法:采用Transwell插入式细胞培养皿共培养人肺癌细胞株A549、NCI-H520细胞和巨噬细胞。Brd U-ELISA法检测巨噬细胞对肺癌细胞的增殖能力。采用Real-time PCR法检测巨噬细胞和A549、NCI-H520细胞中IL-1βmRNA的表达。应用IL-1β的中和抗体抑制IL-1β的活性,观察IL-1β在巨噬细胞促进肺癌细胞增殖中的作用。利用Western blot法检测肺癌细胞中自噬标志物Beclin 1的表达。结果:Brd UELISA检测结果:A549细胞与巨噬细胞以1∶0.5的比例共培养,A549细胞的OD值从(0.41±0.06)增加到(1.13±0.10),差异有统计学意义(P<0.05),且A549细胞的OD值随共培养巨噬细胞比例的增加而升高(P<0.05)。NCI-H520细胞与不同浓度的巨噬细胞共培养后,NCI-H520细胞的OD值变化趋势与A549细胞相似。Real-time PCR法检测结果:在共培养后,巨噬细胞中IL-1βmRNA的表达显著上调,且有时间依赖性,并显著高于肺癌细胞中的表达。加入IL-1β中和抗体后,Brd U ELISA法检测的细胞增殖,结果显示IL-1β中和抗体可明显抑制巨噬细胞对肺癌细胞A549和NCI-H520的增殖促进作用。Western blot法检测结果显示IL-1β可显著抑制肿瘤细胞Beclin 1的表达。结论:巨噬细胞和肺癌细胞通过增强IL-1β的表达促进肿瘤细胞的增殖。抑制肿瘤细胞的自噬可能是IL-1β促进肺癌发展的作用机制。 展开更多

关键词 巨噬细胞 肺癌 IL-1Β 细胞增殖 自噬

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长链非编码RNA RP11-770J1.3和跨膜蛋白25对紫杉醇耐药人乳腺癌细胞株耐药性的影响 被引量：5

5

作者 李钰 王月月 +5 位作者 王海凤 张凌宇 丁勇兴 陈素莲 杨清玲 陈昌杰 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期364-370,共7页

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)RP11-770J1.3和跨膜蛋白25(TMEM25)对紫杉醇耐药人乳腺癌细胞株耐药性的影响。方法:利用实时定量PCR检测lncRNA RP11-770J1.3和TMEM25在人乳腺癌细胞MCF-7和紫杉醇耐药细胞株(MCF-7/PR)中的表达。在MCF-7... 目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)RP11-770J1.3和跨膜蛋白25(TMEM25)对紫杉醇耐药人乳腺癌细胞株耐药性的影响。方法:利用实时定量PCR检测lncRNA RP11-770J1.3和TMEM25在人乳腺癌细胞MCF-7和紫杉醇耐药细胞株(MCF-7/PR)中的表达。在MCF-7/PR中转染lncRNA RP11-770J1.3和TMEM25的干扰片段,磺酰罗丹明B法检测MCF-7/PR对紫杉醇药物敏感性的变化,并运用实时定量PCR和蛋白质印迹法检测多药耐药相关蛋白(MRP)、乳腺癌耐药蛋白(BCRP)、多药耐药基因1(MDR1)及其编码产物P-gp mRNA和蛋白水平的改变。结果:lncRNA RP11-770J1.3和TMEM25在MCF-7/PR中表达上调(P<0.05或P<0.01)。与空白对照组和紫杉醇阴性对照组比较,干扰lncRNA RP11-770J1.3和TMEM25的表达可以提高MCF-7/PR对紫杉醇的药物敏感性,并下调耐药相关基因MRP、BCRP、MDR1及其编码产物P-gp的表达(均P<0.05);与单独干扰lncRNA RP11-770J1.3或TMEM25比较,同时干扰lncRNA RP11-770J1.3和TMEM25的作用更加明显(P<0.05)。结论:MCF-7/PR中lncRNA RP11-770J1.3和TMEM25的表达上调,联合干扰lncRNA RP11-770J1.3和TMEM25的表达可以提高MCF-7/PR对紫杉醇的敏感性。 展开更多

关键词 RNA 膜蛋白质类/代谢 乳腺肿瘤/病理生理 聚合酶链反应 紫杉 酚/药理学 细胞系 肿瘤/病理学 肿瘤细胞 培养的 抗药性 肿瘤

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神经生长因子受体TrkA和p75在乳腺肿瘤中的表达及意义 被引量：7

6

作者 杨清玲 陈昌杰 +1 位作者 高艳军 章菊 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期423-428,共6页

目的观察神经生长因子(NGF)受体TrkA和p75在乳腺肿瘤和不同乳腺癌细胞株的表达情况,分析它们与乳腺肿瘤的相关性及TrkA/p75比值对NGF诱导增殖效应的影响。方法采用免疫组化技术检测15例正常乳腺组织、28例乳腺良性肿瘤和62例乳腺恶性肿... 目的观察神经生长因子(NGF)受体TrkA和p75在乳腺肿瘤和不同乳腺癌细胞株的表达情况,分析它们与乳腺肿瘤的相关性及TrkA/p75比值对NGF诱导增殖效应的影响。方法采用免疫组化技术检测15例正常乳腺组织、28例乳腺良性肿瘤和62例乳腺恶性肿瘤中TrkA和p75的表达及乳腺癌细胞株MCF-7和SKBR3中NGF、TrkA和p75的表达,采用实时荧光定量PCR技术检测2种细胞株中TrkA和p75的mRNA表达水平,采用MTT检测2种细胞株对NGF诱导增殖的反应。结果 TrkA在乳腺恶性肿瘤中的表达高于乳腺良性肿瘤和正常乳腺组织(χ2=39.98,P<0.01);p75仅在正常乳腺的肌上皮细胞和结缔组织中高表达,随着肿瘤的恶性程度增高,p75的表达逐渐减少最终缺失(χ2=50.96,P<0.01);SKBR3乳腺癌细胞分泌的NGF,表达的TrkA和p75 mRNA及蛋白水平均高于MCF-7细胞(均P<0.05),并且SKBR3细胞表达的TrkA/p75比值高于MCF-7细胞(P<0.05);相对于空白对照组,NGF可诱导SKBR3和MCF-7细胞的增殖(均P<0.05),并在各时点,NGF对SKBR3细胞诱导的增殖率均高于MCF-7细胞(均P<0.05)。结论 TrkA和p75的表达与乳腺肿瘤的恶性程度有关,有可能作为乳腺癌治疗的分子靶点。 展开更多

关键词 乳腺肿瘤 神经生长因子 TRKA P75 细胞增殖

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细胞色素P450 1A1基因多态性与宫颈癌的相关性 被引量：6

7

作者 石玉荣 耿建 +2 位作者 程龙强 王慧 章尧 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期428-431,共4页

目的探讨细胞色素P450 1A1(cytochrome P4501A1,CYP 1A1)基因MspⅠ酶切位点多态性及Ile/Val多态性与宫颈癌遗传易感性的关系。方法采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-restriction fragment length plogymorphism,PCR-RF... 目的探讨细胞色素P450 1A1(cytochrome P4501A1,CYP 1A1)基因MspⅠ酶切位点多态性及Ile/Val多态性与宫颈癌遗传易感性的关系。方法采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-restriction fragment length plogymorphism,PCR-RFLP)和等位基因特异性PCR(allele-specific PCR,as-PCR)检测宫颈癌患者(病例组,n=176)和同期体检女性健康人群(对照组,n=112)CYP1A1基因MspⅠ酶切位点多态性和Ile/Val多态性。结果比较病例组和对照组CYP1A1基因MspⅠ酶切位点基因型及等位基因T和C频率分布,差异无统计学意义(P=0.09);比较两组间CYP1A1 Ile/Val多态性发现,病例组3种基因型Ile/Ile、Ile/Val、Val/Val频率分布分别为19.3%、68.8%、11.9%,等位基因Ile、Val频率分布分别为53.7%、46.3%,与对照组比较差异有统计学意义(P=0.04)。结论细胞色素CYP1A1基因MspⅠ位点多态性与宫颈癌发病易感性无关联性,CYP1A1基因Ile/Val多态性与宫颈癌发病易感性有关联性。 展开更多

关键词 细胞色素P450IAI 基因多态性 宫颈癌 遗传易感性

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CXC趋化因子受体4通过S期激酶相关蛋白2调控乳腺癌细胞周期的机制 被引量：5

8

作者 王海凤 陈天天 +7 位作者 王月月 李钰 张凌宇 丁勇兴 陈素莲 王文锐 杨清玲 陈昌杰 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期357-363,共7页

目的:探讨CXC趋化因子受体4(CXCR4)通过PI3K/Akt和ERK信号通路调控S期激酶相关蛋白2(Skp2)的表达,进而影响乳腺癌细胞周期的机制。方法:利用干扰及过表达技术下调或上调CXCR4的表达后,通过实时定量PCR和蛋白质印迹法检测CXCR4与Skp2调... 目的:探讨CXC趋化因子受体4(CXCR4)通过PI3K/Akt和ERK信号通路调控S期激酶相关蛋白2(Skp2)的表达,进而影响乳腺癌细胞周期的机制。方法:利用干扰及过表达技术下调或上调CXCR4的表达后,通过实时定量PCR和蛋白质印迹法检测CXCR4与Skp2调控的关联性;蛋白质印迹法检测CXCR4干扰及过表达后对信号蛋白及Skp2下游相关基因表达的影响;通过碘化丙啶(PI)染色法检测CXCR4、PI3K/Akt通路抑制剂LY294002及ERK通路抑制剂U0126对乳腺癌细胞周期的影响。结果:干扰CXCR4后,Skp2表达下调;过表达CXCR4后,Skp2表达上调。CXCR4可通过对信号蛋白的调控影响Skp2及Skp2下游相关基因的表达。干扰CXCR4后,G_0/G_1期细胞比例增加,S期细胞比例相应减少,CXCR4与LY294002及U0126联合作用对细胞周期的阻断更加明显。结论:CXCR4能够通过对信号蛋白PI3K/Akt及ERK的调控,影响Skp2及Skp2下游相关基因的表达,阻断CXCR4/Akt/Skp2或CXCR4/ERK/Skp2信号通路后可有效诱导细胞周期阻滞,从而抑制乳腺癌细胞的增殖。 展开更多

关键词 乳腺肿瘤/病理生理学 受体 CXCR4/生物合成 受体 CXCR4/遗传学 S期激酶相关蛋白质类/代谢 细胞系 肿瘤/代谢 细胞增殖 细胞周期

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LY294002靶向抑制PI3K/Akt信号通路干预K562细胞增殖的研究 被引量：9

9

作者 耿英华 武文娟 +1 位作者 于北凯 夏瑞祥 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2014年第3期295-299,共5页

目的探讨PI3K/Akt抑制剂LY294002对慢性髓系白血病细胞株K562的增殖抑制作用及相关机制。方法 MTT法检测LY294002对K562细胞增殖的抑制作用;10、20μmol/L LY294002作用K562细胞36 h,流式细胞术观察细胞周期的变化,RT-PCR法测定LY294002... 目的探讨PI3K/Akt抑制剂LY294002对慢性髓系白血病细胞株K562的增殖抑制作用及相关机制。方法 MTT法检测LY294002对K562细胞增殖的抑制作用;10、20μmol/L LY294002作用K562细胞36 h,流式细胞术观察细胞周期的变化,RT-PCR法测定LY294002对K562细胞Skp2基因表达的影响,Western blot法检测Skp2蛋白表达的变化。结果 LY294002能够抑制K562细胞的生长,该抑制作用具有浓度及时间依赖性(P<0.05)。LY294002作用K562细胞36 h,随着浓度的增加,G0/G1期阻滞增强,S期细胞减少(P<0.05),Skp2的mRNA表达量减少,Skp2蛋白的表达量显著降低。结论 LY294002能够抑制K562细胞的生长,诱导细胞发生G0/G1期阻滞,这可能是通过LY294002影响了Skp2表达而实现的。 展开更多

关键词 LY294002 PI3K Akt SKP2 K562

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miR-218对新藤黄酸抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖作用的影响及机制研究 被引量：3

10

作者 石玉荣 刘健 +1 位作者 陈素莲 杨滢 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1405-1409,共5页

目的研究miR-218对新藤黄酸抑制人宫颈癌He La细胞增殖作用的影响及其可能的分子机制。方法人宫颈癌He La细胞转染过表达真核表达载体pmiR-218,real-time PCR检测He La细胞miR-218的表达。将He La细胞分为空白对照组、新藤黄酸组、pmiR-... 目的研究miR-218对新藤黄酸抑制人宫颈癌He La细胞增殖作用的影响及其可能的分子机制。方法人宫颈癌He La细胞转染过表达真核表达载体pmiR-218,real-time PCR检测He La细胞miR-218的表达。将He La细胞分为空白对照组、新藤黄酸组、pmiR-218组、质粒对照组、新藤黄酸联合pmiR-218组。MTT法检测各组细胞增殖;流式细胞仪检测各组细胞凋亡;Western blot检测Bcl-2、Bax、E-cadherin表达;real-time PCR检测Bcl-2、Bax和E-cadherin的mRNA表达水平。结果 miR-218真核表达载体pmiR-218转染He La细胞后,细胞内miR-218表达水平明显增加(P<0.05)。miR-218可提高He La细胞对新藤黄酸的敏感性,高表达miR-218能促进新藤黄酸对He La细胞的增殖抑制作用,促进细胞凋亡,下调新藤黄酸对He La细胞Bcl-2/Bax蛋白的表达水平。结论 miR-218可提高He La细胞对新藤黄酸的敏感性,miR-218能增强新藤黄酸对He La细胞增殖抑制作用,并促进He La细胞凋亡,其作用机制可能与下调Bcl-2/Bax的表达有关。 展开更多

关键词 新藤黄酸 MIR-218 He La细胞 细胞增殖 细胞凋亡 BCL-2/BAX

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淋巴瘤组织中线粒体DNA突变的研究 被引量：3

11

作者 马佳 陈治文 +2 位作者 梅传忠 杨清玲 王惠 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期202-206,211,共6页

目的通过检测恶性淋巴瘤组织中线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)的突变,以探讨mtDNA突变在恶性淋巴瘤发生中的作用。方法提取38例恶性淋巴瘤组织及其对应患者外周血白细胞的DNA,经PCR扩增部分mtDNA片段,PCR产物直接测序法测定mtDNA... 目的通过检测恶性淋巴瘤组织中线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)的突变,以探讨mtDNA突变在恶性淋巴瘤发生中的作用。方法提取38例恶性淋巴瘤组织及其对应患者外周血白细胞的DNA,经PCR扩增部分mtDNA片段,PCR产物直接测序法测定mtDNA序列。以外周血淋巴细胞测序结果作为对照,确定肿瘤组织mtDNA的突变。结果18例(47.4%)恶性淋巴瘤组织中发现25个突变,25个突变发生在15个核苷酸位点,其中21个突变位于mtDNA的D-Loop区,4个突变位于mtDNA的编码区,D-Loop发生变异的频率是编码区的4.26倍。13个(13/25,52%)突变位于mtDNA多态性位点。结论恶性淋巴瘤组织中存在mtDNA的突变,mtDNA突变可能与淋巴瘤的发生、进展有一定关系。 展开更多

关键词 线粒体DNA 突变 淋巴瘤

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Hes1在烟草诱导人支气管上皮细胞恶性转化过程中的作用 被引量：3

12

作者 洪磊 周继红 +6 位作者 李伟 陈余清 蒋鹏 袁娜娜 王效静 朱茂祥 杨陟华 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期1153-1162,共10页

目的:探讨转录因子发状分裂相关增强子1(hairy and enhancer of split,Hes1)在香烟烟气凝集物(cigarette smoke condensate,CSC)诱导永生化人支气管上皮细胞BEP2D恶性转化中的作用。方法:CSC(1L空气中点燃1支香烟)慢性染毒BEP2D细胞至... 目的:探讨转录因子发状分裂相关增强子1(hairy and enhancer of split,Hes1)在香烟烟气凝集物(cigarette smoke condensate,CSC)诱导永生化人支气管上皮细胞BEP2D恶性转化中的作用。方法:CSC(1L空气中点燃1支香烟)慢性染毒BEP2D细胞至第70代,软琼脂集落形成实验检测CSC诱导的细胞恶性转化表型;采用RT-PCR和Western blot法检测各代细胞的Hes1表达;MTT法、细胞集落形成实验和流式细胞术检测Notch通路阻断剂DAPT或脂质体转染Hes1-siRNA对CSC染毒BEP2D细胞增殖与凋亡的影响。检测吸烟大鼠外周小气道组织中Hes1的表达;采用免疫组化法和RT-PCR法检测非小细胞肺癌组织及正常气道组织中Hes1的表达。结果:第70代BEP2D细胞具备恶性转化表型;Hes1在CSC染毒BEP2D细胞中的表达总体呈逐渐增高的趋势;DAPT和Hes1-siRNA均能通过下调Hes1显著抑制第70代BEP2D细胞的增殖,诱导其凋亡;Hes1在卷烟烟气暴露大鼠气道黏膜1月和6月组的表达较同期对照组显著增高;吸烟显著诱导肺癌组织和正常气道表达Hes1。结论:Hes1可能通过促进凋亡与增殖失衡,参与吸烟诱导的肺癌发生。 展开更多

关键词 肺癌 吸烟 转录因子Hes1 香烟烟气凝集物

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转化生长因子β_1对人宫颈癌细胞上皮-间质转化的诱导作用 被引量：2

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作者 石玉荣 陈素莲 +1 位作者 杨滢 王慧 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期530-534,共5页

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)对人宫颈癌He La细胞上皮-间质转化(EMT)发生的诱导作用。方法用10 ng/m L的TGF-β1处理He La细胞72 h,电镜下观察细胞形态,real-time PCR和Western blotting检测EMT相关上皮标记分子和间质标记分子的... 目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)对人宫颈癌He La细胞上皮-间质转化(EMT)发生的诱导作用。方法用10 ng/m L的TGF-β1处理He La细胞72 h,电镜下观察细胞形态,real-time PCR和Western blotting检测EMT相关上皮标记分子和间质标记分子的表达,划痕试验、Transwell实验检测细胞侵袭和转移能力。结果 TGF-β1可诱导He La细胞呈现EMT细胞形态,并且下调上皮相关标记蛋白E-cadherin和β-catenin的表达,上调间质相关标记蛋白Vimentin和N-cadherin的表达;细胞的侵袭和转移能力明显增强。结论 TGF-β1能够诱导He La细胞发生EMT,促进细胞侵袭和转移。 展开更多

关键词 上皮-间质转化 转化生长因子Β1 宫颈癌细胞 侵袭 转移

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苯并[a]芘对宫颈癌HeLa细胞细胞色素P450 1A1的诱导作用 被引量：2

14

作者 石玉荣 耿建 +1 位作者 王惠 章尧 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1513-1516,共4页

目的探讨苯并[a]芘(BaP)对宫颈癌HeLa细胞增殖及细胞色素P450 1A1(CYP1A1)表达的影响。方法不同浓度(0、1.0、2.5、5.0、7.5和10.0μmol/L)的BaP处理宫颈癌HeLa细胞,MTT法检测BaP对HeLa细胞增殖的影响,W estern b lotting和RT-PCR分别检... 目的探讨苯并[a]芘(BaP)对宫颈癌HeLa细胞增殖及细胞色素P450 1A1(CYP1A1)表达的影响。方法不同浓度(0、1.0、2.5、5.0、7.5和10.0μmol/L)的BaP处理宫颈癌HeLa细胞,MTT法检测BaP对HeLa细胞增殖的影响,W estern b lotting和RT-PCR分别检测CYP1A1的蛋白表达和mRNA表达,荧光素标记检测CYP1A1活性。结果 MTT法检测显示,各浓度BaP组光密度(D553 nm)均较对照组(0μmol/L BaP)升高,其中7.5μmol/L BaP组最高(P<0.05)。W estern b lotting和RT-PCR检测结果显示,各浓度BaP组CYP1A1 mRNA及蛋白的表达水平均高于对照组,其中7.5μmol/L BaP组最高(P<0.05)。CYP1A1活性检测结果显示,各浓度BaP组HeLa细胞CYP1A1酶活力均高于对照组,以5.0μmol/L BaP组活力最高(P<0.05)。结论 BaP可诱导HeLa细胞增殖,诱导HeLa细胞表达CYP1A1,并增加酶活性。 展开更多

关键词 苯并[A]芘 细胞色素P450 1A1 HELA细胞

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人源性抗乳腺癌HER2噬菌体单链抗体库的构建与筛选 被引量：1

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作者 卢晓辉 王志文 +4 位作者 蔡颖 黄静 朱丽华 杨清玲 陈昌杰 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期434-440,共7页

目的：构建人源性抗乳腺癌噬菌体单链抗体（scFv）库，筛选和鉴定抗乳腺癌人类表皮生长因子受体2（HER2）特异性scFv，为HER2和CXC趋化因子受体4（CXCR4）双靶向融合蛋白的研制提供靶向HER2的高亲和力序列。方法：取已确诊的乳腺癌患者... 目的：构建人源性抗乳腺癌噬菌体单链抗体（scFv）库，筛选和鉴定抗乳腺癌人类表皮生长因子受体2（HER2）特异性scFv，为HER2和CXC趋化因子受体4（CXCR4）双靶向融合蛋白的研制提供靶向HER2的高亲和力序列。方法：取已确诊的乳腺癌患者癌旁淋巴组织，提取总RNA；构建可变区基因的T载体库，将重链可变区（VH）和轻链可变区（VL）基因与pCANTAB连接肽连接，获得pCANTAB-scFv，电转化感受态大肠杆菌TG1；以M13K07辅助噬菌体进行感染，获噬菌体抗体库；利用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测筛选后获得的噬菌体抗体活性，以免疫组织化学法检测抗体亲和力，并通过测序进一步鉴定。结果：成功构建大容量pCANTAB-scFv抗体库，获得的scFv长度为750bp，VH和VL长度分别为375和330kb；电转化大肠杆菌TG1后酶切验证插入片段大小正确，得到库容为2．48×10^8的大容量抗体库；通过噬菌体展示和淘洗筛选，富集针对乳腺癌细胞株SKBR-3表面抗原的抗体库；所得抗体对HER2有高度的亲和力和特异性，对乳腺癌组织HER2抗原也具有较高的亲和力；测序结果与人IgG抗体进行对比，所获得的scFv具有高度的人源性。结论：主要构建了大容量人源性抗乳腺癌细胞的噬菌体scFv库，并筛选获得可特异性识别人乳腺癌HER2的高亲和力scFv，为制备以HER2为靶点的抗肿瘤HER2和CXCR4双靶向融合蛋白提供了载体。 展开更多

关键词 乳腺肿瘤/免疫学 DNA 互补/遗传学 基因文库 抗体 细菌/遗传 学 细菌噬菌体/遗传学 受体 erbB-2 受体 CXCR4 聚合酶链反应

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LY294002增强K562细胞对柔红霉素敏感性的研究 被引量：1

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作者 耿英华 武文娟 +2 位作者 李骏 周黎黎 杨艳丽 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期110-118,共9页

目的:探讨PI3K/Akt抑制剂LY294002联合蒽环类化疗药物柔红霉素(DNR)对慢性髓系白血病细胞株K562细胞增殖的抑制作用、促凋亡作用及其相关机制。方法:应用MTT法检测LY294002和DNR在不用浓度、不同作用时间点对K562细胞增殖的影响,流式细... 目的:探讨PI3K/Akt抑制剂LY294002联合蒽环类化疗药物柔红霉素(DNR)对慢性髓系白血病细胞株K562细胞增殖的抑制作用、促凋亡作用及其相关机制。方法:应用MTT法检测LY294002和DNR在不用浓度、不同作用时间点对K562细胞增殖的影响,流式细胞术分析细胞周期的变化,应用RT-PCR和Western blot法检测LY294002和DNR对K562细胞SKP2、P27、BCL-2和BAX2基因和蛋白表达的影响。结果:LY294002联合DNR能够抑制K562细胞的生长并促进细胞凋亡,且具有浓度及时间依赖性(P<0.05);2药联合后细胞增殖抑制率及细胞凋亡率明显增加(P<0.05)。2药联合作用于K562细胞36 h,随着浓度的增加其G2/M期细胞显著减少(P<0.05),与DNR单药比较,G0/G1期细胞数增加(P<0.05),S期细胞减少,但差异无统计学意义。2药联合作用后,SKP2及BCL-2的mRNA表达量降低,P27 mRNA表达增高,差异具有统计学意义。BAX的表达在各实验组中的差异无统计学意义。相应的蛋白表达水平与之相符。结论:LY294002对DNR的化疗作用有增敏效果,其作用机制可能与阻滞细胞周期及诱导细胞凋亡有关。 展开更多

关键词 LY294002 柔红霉素 白血病 细胞增殖 细胞凋亡

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IKBKE在烟气凝集物诱导人支气管上皮细胞恶性转化过程中的作用 被引量：1

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作者 周继红 洪磊 +7 位作者 蒋鹏 袁娜娜 李勤 陈余清 王效静 朱茂祥 杨陟华 李伟 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第13期1221-1228,共8页

目的探讨核因子κB抑制蛋白E抗体(inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase subunit epsilon,IKBKE)在卷烟烟气凝集物(cigarette smoke condensate,CSC)诱导永生化人支气管上皮细胞BEP2D恶性转化中的作用及其分子机制。方法 CSC慢... 目的探讨核因子κB抑制蛋白E抗体(inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase subunit epsilon,IKBKE)在卷烟烟气凝集物(cigarette smoke condensate,CSC)诱导永生化人支气管上皮细胞BEP2D恶性转化中的作用及其分子机制。方法 CSC慢性染毒BEP2D细胞至P70代(0.001支烟/m L),裸鼠皮下成瘤实验观察染毒细胞是否发生恶性转化;采用Western blot检测各代细胞以及CSC急性染毒BEP2D细胞(0.006支烟/mL)4、8、12、24 h和48 h后IKEBE的表达;免疫组化检测烟熏1、3、9个月A/J小鼠外周小气道和瘤体组织IKBKE的表达;慢病毒IKBKE-siRNA感染P70细胞,观察其对细胞增殖、细胞克隆形成和凋亡的影响;观察敲减IKBKE对STAT3信号通路分子表达的影响及STAT3信号通路激活剂IL-6对细胞恶性转化的影响。结果与P0、P50细胞相比,P70细胞具有恶性转化表型;IKBKE显著高表达于P70细胞(P<0.05),亦是CSC诱导的早期分子事件;在烟气暴露A/J小鼠肺肿瘤组织中IKBKE表达显著增高(P<0.01);siRNA沉默IKBKE可显著抑制细胞增殖和细胞克隆形成,诱导细胞凋亡;该作用与抑制STAT3磷酸化有关。结论 IKBKE可能通过调控STAT3通路抑制细胞凋亡,促进其增殖,参与吸烟诱导肺癌发生。 展开更多

关键词 肺癌 核因子κB抑制蛋白E抗体 卷烟烟气凝集物 人支气管上皮细胞

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葡萄籽提取物对人骨肉瘤U2OS细胞抑制作用及机制的研究 被引量：1

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作者 张庆 杨志勇 +2 位作者 魏令 马佳 尹宗生 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期173-176,共4页

目的探讨葡萄籽提取物(GSE)对人骨肉瘤U2OS细胞的抑制作用及其作用机制。方法选用不同浓度的GSE作用于骨肉瘤U2OS细胞,MTT法检测其生长抑制作用;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Transwell迁移实验检测细胞迁移能力;实时RT-PCR和Western blot... 目的探讨葡萄籽提取物(GSE)对人骨肉瘤U2OS细胞的抑制作用及其作用机制。方法选用不同浓度的GSE作用于骨肉瘤U2OS细胞,MTT法检测其生长抑制作用;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Transwell迁移实验检测细胞迁移能力;实时RT-PCR和Western blot检测CDC20mRNA和蛋白的表达水平。结果 MTT结果显示GSE对人骨肉瘤U2OS细胞的生长抑制作用呈浓度依赖性;流式细胞术显示GSE具有诱导U2OS细胞凋亡的作用;Transwell实验显示GSE可以抑制U2OS细胞的迁移作用;RT-PCR和Western blot结果显示GSE可以下调CDC20mRNA和蛋白的表达水平。结论 GSE具有抑制骨肉瘤U2OS细胞生长及迁移、诱导细胞凋亡的作用。GSE对骨肉瘤细胞的抑制作用可能与下调CDC20表达有关。 展开更多

关键词 葡萄籽提取物 人骨肉瘤U2OS细胞 CDC20

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信号传导及转录激活子3通路参与卷烟烟气凝集物诱导永生化人支气管上皮细胞的恶性转化 被引量：1

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作者 袁娜娜 李伟 +9 位作者 陈余清 张佳秀 洪磊 蒋鹏 周继红 王效静 朱茂祥 潘秀颉 杨陟华 顾永清 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1182-1191,共10页

目的检测肺鳞癌组织、鳞状细胞不典型增生组织和癌旁组织中磷酸化信号传导及转录激活子3(p STAT3)蛋白的表达,比较其表达与吸烟的关系;探讨STAT3通路在烟草诱导细胞恶性转化过程中的作用。方法免疫组化法检测288例肺鳞癌组织、108例鳞... 目的检测肺鳞癌组织、鳞状细胞不典型增生组织和癌旁组织中磷酸化信号传导及转录激活子3(p STAT3)蛋白的表达,比较其表达与吸烟的关系;探讨STAT3通路在烟草诱导细胞恶性转化过程中的作用。方法免疫组化法检测288例肺鳞癌组织、108例鳞状细胞不典型增生组织、112例癌旁组织中p STAT3蛋白的表达,比较其表达与吸烟的相关性。构建卷烟烟气凝集物(CSC)诱导第10,20,30,40,50,60及70代细胞(P10,P20,P30,P40,P50,P60及P70)永生化人支气管上皮细胞(BEP2D)恶性转化模型。从血清抗性及锚着独立性等方面对CSC诱导各代BEP2D细胞的恶性转化特征进行鉴定。Western蛋白印迹法检测CSC诱导各代BEP2D细胞中p STAT3的表达。MTT法和流式细胞术分别检测JSI-124 0.25~10μmol·L^(-1)对P70细胞存活及凋亡的影响。JSI-124处理CSC诱导P70 24 h后检测存活蛋白表达的变化。结果 p STAT3蛋白在肺鳞癌组织中表达高于鳞状细胞不典型增生和癌旁组织(P<0.05);p STAT3在目前吸烟者中的表达均高于曾经吸烟者和从不吸烟者(P<0.05),且随着吸烟指数增加两者表达水平逐渐升高(P<0.01)。随着转化代数的增高,细胞血清抗性增加,锚着独立性增强,P30细胞以后尤为明显。p STAT3在正常对照组和乙醇对照组中弱表达,且两者之间无显著性差异;CSC诱导的各组BEP2D细胞中,p STAT3的表达均显著高于正常对照组和乙醇对照组(P<0.05),并随细胞代数的增高而增高。JSI-124抑制P70细胞增殖、促进P70细胞凋亡呈浓度及时间依赖性。JSI-124 1μmol·L^(-1)作用P70细胞24 h后,存活蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论 STAT3信号通过调控存活蛋白表达抑制细胞凋亡,参与烟草诱导永生化人支气管上皮细胞的恶性转化。 展开更多

关键词 信号传导及转录激活子3 卷烟烟气凝集物 永生化人支气管上皮细胞

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三氧化二砷抑制苯并(a)芘诱导的HeLa细胞细胞色素P450 1A1的表达 被引量：1

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作者 耿建 石玉荣 王慧 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期161-164,共4页

目的观察不同浓度三氧化二砷(As2O3)对苯并(a)芘[B(a)P]诱导的子宫颈癌HeLa细胞的增殖及细胞色素P450 1A1(CYP1A1)表达的影响。方法用7.5μmol/L B(a)P分别与不同浓度的As2O3共同作用于HeLa细胞,MTT法检测As2O3对HeLa细胞增殖的影响,Wes... 目的观察不同浓度三氧化二砷(As2O3)对苯并(a)芘[B(a)P]诱导的子宫颈癌HeLa细胞的增殖及细胞色素P450 1A1(CYP1A1)表达的影响。方法用7.5μmol/L B(a)P分别与不同浓度的As2O3共同作用于HeLa细胞,MTT法检测As2O3对HeLa细胞增殖的影响,Western blot和实时荧光定量PCR分别检测CYP1A1的蛋白表达和mRNA表达,荧光素标记检测CYP1A1活性。结果 MTT法结果显示,随着As2O3浓度增加,各实验组吸光度值逐渐减少,与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);As2O3下调B(a)P诱导的HeLa细胞CYP1A1的mRNA和蛋白质的表达,抑制作用显著(P<0.05)。CYP1A1活性检测结果显示,随着As2O3浓度增加,HeLa细胞CYP1A1酶活力逐渐降低,各实验组与对照组差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 As2O3能抑制B(a)P诱导的HeLa细胞增殖,抑制CYP1A1的表达并降低CYP1A1酶活性且呈现剂量依赖性。 展开更多

关键词 三氧化二砷 苯并(A)芘 细胞色素P450 1A1 HELA细胞

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