IL-6通过激活JAK2/STAT3信号通路增强小鼠肺泡巨噬细胞的吞噬功能 被引量：4

1

作者 华梦晴 高培宇 +2 位作者 方芳 苏浩宇 宋传旺 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期13-18,共6页

目的 探讨白细胞介素6(IL-6)对MH-S小鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能的影响及其相关机制。方法 脂多糖(LPS)经气道滴入激发构建小鼠急性肺损伤(ALI)模型,ELISA检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-6的含量。体外培养MH-S细胞,在信号转导子与转录激... 目的 探讨白细胞介素6(IL-6)对MH-S小鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能的影响及其相关机制。方法 脂多糖(LPS)经气道滴入激发构建小鼠急性肺损伤(ALI)模型,ELISA检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-6的含量。体外培养MH-S细胞,在信号转导子与转录激活子3 (STAT3)抑制剂Stattic(5μmol/L)存在与否的情况下,再加入IL-6(10 ng/mL~500 ng/mL)刺激6 h,加入荧光微球孵育2 h后,采用流式细胞术检测MH-S细胞吞噬荧光微球情况;Western blot法检测磷酸化的Janus激酶2(p-JAK2)、磷酸化的STAT3(p-STAT3)、肌动蛋白相关蛋白2(Arp2)、纤维型肌动蛋白(F-actin)的表达水平。结果 鼻腔滴入LPS后,小鼠BALF中IL-6含量显著升高。随着IL-6刺激剂量的增加,MH-S细胞吞噬荧光微球的作用增强,Arp2、 F-actin蛋白的表达水平升高。100 ng/mL IL-6刺激MH-S细胞后,p-JAK2和p-STAT3蛋白的表达水平升高。阻断MH-S细胞STAT3信号后,IL-6促进细胞吞噬的效应完全消失,IL-6诱导的Arp2、 F-actin蛋白表达增加被抑制。结论 IL-6通过激活JAK2/STAT3信号通路促进MH-S细胞Arp2、 F-actin蛋白的表达增强吞噬功能。 展开更多

关键词 白细胞介素6(IL-6) MH-S细胞 吞噬功能 Janus激酶2(JAK2) 信号转导子与转录激活子3(STAT3) 肺泡巨噬细胞

在线阅读 下载PDF 职称材料

人黏着斑激酶(FAK)原核表达及多克隆抗体制备与鉴定

2

作者 张丽 张娅 +4 位作者 季江颖 魏梓妤 刘家宇 许涛 汪洪涛 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期175-180,共6页

目的克隆、表达与纯化黏着斑激酶(FAK)基因C端黏着斑定位序列(第798~1041位氨基酸),制备兔抗FAK多克隆抗体并鉴定。方法PCR法体外扩增FAK基因C端序列(2671~3402 bp),克隆至pCZN1,构建pCZN1-FAK重组表达载体,将重组表达载体转化到大肠杆... 目的克隆、表达与纯化黏着斑激酶(FAK)基因C端黏着斑定位序列(第798~1041位氨基酸),制备兔抗FAK多克隆抗体并鉴定。方法PCR法体外扩增FAK基因C端序列(2671~3402 bp),克隆至pCZN1,构建pCZN1-FAK重组表达载体,将重组表达载体转化到大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)感受态细胞,用异丙基β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达;利用镍-次氮基三乙酸(Ni-NTA)金属鳌合亲和层析树脂进行蛋白纯化,并免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体;通过间接ELISA和Western blot法进行效价和特异性鉴定。结果成功构建pCZN1-FAK重组表达载体,FAK蛋白主要以包涵体形式表达。目的蛋白纯化后,制备的兔抗FAK多克隆抗体效价达1∶512000,且与外源和内源FAK蛋白发生特异性反应。结论成功克隆、表达与纯化FAK蛋白,制备兔抗FAK多克隆抗体,可用于内源FAK蛋白特异性检测。 展开更多

关键词 人黏着斑激酶(FAK) 多克隆抗体

在线阅读 下载PDF 职称材料

nanos1基因在日本血吸虫不同发育时期的定位 被引量：2

3

作者 华梦晴 邵延靖 +1 位作者 刘淼 沈际佳 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2020年第2期215-221,共7页

目的探讨nanos1基因在日本血吸虫的定位以及不同发育时期的表达情况。方法在NCBI上搜索日本血吸虫nanos1基因,PCR扩增、测序并将其全长序列经BLAST软件分析,利用DNAMAN6.0和ClustalX2.0.9进行多重序列比对,利用MAGA 5.05构建进化树进行... 目的探讨nanos1基因在日本血吸虫的定位以及不同发育时期的表达情况。方法在NCBI上搜索日本血吸虫nanos1基因,PCR扩增、测序并将其全长序列经BLAST软件分析,利用DNAMAN6.0和ClustalX2.0.9进行多重序列比对,利用MAGA 5.05构建进化树进行系统进化分析。体外转录地高辛(DIG)标记的RNA探针,并将其用于日本血吸虫感染后第18、24和42天3个发育时期的雌雄虫整体原位杂交,以确定nanos1基因在日本血吸虫的定位。结果PCR扩增获得日本血吸虫nanos1基因,生物信息学分析结果表明其编码的蛋白与曼氏血吸虫nanos2蛋白同源性最高。体外转录成功的RNA探针用于日本血吸虫整体原位杂交,在感染后第24、42天雌虫的卵巢和卵黄腺以及18天雌虫的卵巢检测到阳性杂交信号,而各个发育阶段的雄虫均未观察到明显阳性杂交信号。结论日本血吸虫nanos1基因高表达于感染后第18天雌虫的卵巢以及第24、42天雌虫的卵巢和卵黄腺。该研究初步揭示了日本血吸虫nanos1基因的表达模式,为研究nanos1基因的功能提供了重要线索。 展开更多

关键词 日本血吸虫 nanos1 进化分析 整体原位杂交

在线阅读 下载PDF 职称材料

胰岛素生长因子1(IGF-1)通过S1P/S1PR1信号激活PI3K通路促进小鼠肺泡上皮细胞迁移 被引量：5

4

作者 耿建 母迷迷 +5 位作者 冀彩丽 李梦婷 马丽 王梓璇 华梦晴 宋传旺 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期996-1002,共7页

目的探讨胰岛素样生长因子1(IGF-1)对肺泡上皮细胞(AEC)迁移的影响及其相关机制。方法在磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂渥曼青霉素(Wortmannin)存在与否的情况下,采用IGF-1、鞘氨醇1磷酸(S1P)刺激AEC后,划痕愈合实验检测MLE-12小鼠AEC的迁... 目的探讨胰岛素样生长因子1(IGF-1)对肺泡上皮细胞(AEC)迁移的影响及其相关机制。方法在磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂渥曼青霉素(Wortmannin)存在与否的情况下,采用IGF-1、鞘氨醇1磷酸(S1P)刺激AEC后,划痕愈合实验检测MLE-12小鼠AEC的迁移,Western blot法检测磷酸化的蛋白激酶B(p-AKT)的表达。采用IGF-1刺激AEC后,ELISA检测S1P的分泌,Western blot法检测其蛋白表达。阻断实验中,AEC S1P受体1(S1PR1)干扰或受S1PR1阻断抗体作用后,划痕实验检测IGF-1对细胞迁移的影响,Western blot法检测p-AKT蛋白表达。结果IGF-1刺激12 h后,AEC的p-AKT表达增加,细胞迁移加快;阻断PI3K信号后,IGF-1促进AEC迁移效应部分消失。IGF-1诱导AEC产生S1P,S1P通过S1PR1加快AEC迁移;S1P刺激AEC后p-AKT表达增强,阻断PI3K通路后,S1P加快AEC迁移的能力降低。AEC预先被阻断S1PR1或S1PR1干扰后,IGF-1加快AEC迁移和促进AEC p-AKT表达的效应被部分降低。结论IGF-1通过S1P-S1PR1信号激活PI3K通路促进AEC迁移。 展开更多

关键词 肺泡上皮细胞(AEC) 迁移 胰岛素样生长因子1(IGF-1) 鞘氨醇1磷酸(S1P) 磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)

在线阅读 下载PDF 职称材料

胰岛素样生长因子1(IGF-1)通过激活PI3K/AKT信号通路增强小鼠BV-2小胶质细胞的吞噬功能 被引量：11

5

作者 翟丽倩 陈晓芬 +5 位作者 卢思彤 杨丹 李皖晴 李飞迪 吴凤娇 孙美群 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期199-204,共6页

目的探讨胰岛素样生长因子1(IGF-1)对小鼠小胶质细胞吞噬功能的影响。方法脂多糖(LPS)腹腔注射建立小鼠急性中枢神经系统炎症模型,Western blot法检测脑组织中IGF-1和IGF-1受体(IGF-1R)的蛋白表达。使用LPS刺激BV-2小胶质细胞后,Western... 目的探讨胰岛素样生长因子1(IGF-1)对小鼠小胶质细胞吞噬功能的影响。方法脂多糖(LPS)腹腔注射建立小鼠急性中枢神经系统炎症模型,Western blot法检测脑组织中IGF-1和IGF-1受体(IGF-1R)的蛋白表达。使用LPS刺激BV-2小胶质细胞后,Western blot法检测IGF-1R的蛋白表达。体外培养BV-2细胞,在培养基中加入或未加入磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号阻断剂渥曼青霉素(wortmannin)的情况下,再加入IGF-1刺激24 h,加入荧光微球共同孵育2 h,流式细胞术检测BV-2细胞吞噬荧光微球的情况。IGF-1刺激BV-2细胞后,Western blot法检测细胞中AKT和磷酸化的AKT(p-AKT)蛋白表达。结果腹腔注射LPS后,小鼠脑组织中IGF-1和IGF-1R的表达均显著升高,同时LPS刺激也上调BV-2细胞IGF-1R的表达。随着IGF-1浓度的增加,BV-2细胞吞噬荧光微球的能力先逐渐增强后开始下降,在50 ng/mL的IGF-1刺激下BV-2细胞吞噬荧光微球的能力达到峰值。IGF-1刺激BV-2细胞后,细胞的AKT磷酸化水平逐渐上升。使用wortmannin阻断PI3K/AKT信号后,IGF-1促进BV-2细胞吞噬荧光微球的能力显著下降。结论IGF-1通过激活PI3K/AKT信号途径促进BV-2细胞的吞噬作用。 展开更多

关键词 胰岛素样生长因子1(IGF-1) BV-2小胶质细胞 吞噬功能 炎症

在线阅读 下载PDF 职称材料

急性肺损伤小鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能降低 被引量：7

6

作者 杨倩 高培宇 +6 位作者 母迷迷 陶象男 何晶 吴凤娇 郭术俊 钱中清 宋传旺 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期376-381,共6页

目的探讨急性肺损伤(ALI)小鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能的变化及其影响因素。方法昆明种小鼠随机分为正常对照组、ALI模型组,脂多糖经气道滴入激发构建ALI模型小鼠;通过支气管肺泡灌洗获取肺泡巨噬细胞(AM),流式细胞术及荧光显微镜观察ALI小... 目的探讨急性肺损伤(ALI)小鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能的变化及其影响因素。方法昆明种小鼠随机分为正常对照组、ALI模型组,脂多糖经气道滴入激发构建ALI模型小鼠;通过支气管肺泡灌洗获取肺泡巨噬细胞(AM),流式细胞术及荧光显微镜观察ALI小鼠AM吞噬功能的变化;免疫印迹与ELISA检测ALI小鼠肺组织白介素-33(IL-33)的表达和分泌情况;ELISA检测不同浓度脂多糖刺激肺泡上皮细胞株MLE-12细胞IL-33分泌的情况;采用不同浓度的脂多糖和IL-33作用正常组AM,观察这些刺激因素对AM吞噬荧光微球的影响。结果与正常小鼠AM(75.1%±3.0)%相比,ALI小鼠AM吞噬荧光微球百分率(57.0±4.3)%明显降低,但ALI小鼠肺组织IL-33的表达和支气管肺泡灌洗液中IL-33的分泌均明显升高(P<0.05);脂多糖(100~1000 ng/mL)促进肺泡上皮细胞IL-33分泌增加(P<0.01);脂多糖(10~500 ng/mL)和IL-33(100 ng/mL)均明显抑制了AM的吞噬功能(P<0.05)。结论 ALI小鼠AM吞噬功能降低,这可能是由于脂多糖直接刺激AM引起,或者脂多糖激发肺泡上皮细胞产生的预警素IL-33也可抑制AM吞噬功能。 展开更多

关键词 肺泡巨噬细胞 急性肺损伤 吞噬功能 脂多糖 IL-33

在线阅读 下载PDF 职称材料

热休克蛋白70促进急性肺损伤小鼠肺部炎症反应 被引量：5

7

作者 陈艳 王梓璇 +2 位作者 冀彩丽 华梦晴 宋传旺 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期152-157,共6页

目的探讨热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)对急性肺损伤(acute lung injury,ALI)小鼠发病的影响及其相关机制。方法构建ALI模型小鼠,免疫印迹法检测肺组织中HSP70的表达情况,酶联免疫法检测支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar ... 目的探讨热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)对急性肺损伤(acute lung injury,ALI)小鼠发病的影响及其相关机制。方法构建ALI模型小鼠,免疫印迹法检测肺组织中HSP70的表达情况,酶联免疫法检测支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中HSP70的分泌情况。ALI小鼠经鼻滴HSP70抗体(anti-HSP70)后,抽取BALF,检测其中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、白细胞介素6(interleukin 6,IL-6)、白细胞介素1β(interleukin 1β,IL-1β)和蛋白的含量,并计数中性粒细胞的数目;获取肺组织进行苏木精-伊红染色并计算肺湿/干重比。以LPS刺激小鼠肺泡上皮细胞株MLE-12细胞,酶联免疫法检测培养上清液中TNF-α和IL-1β的含量。不同浓度的HSP70(10~500 ng/mL)刺激小鼠肺泡上皮细胞(alveolar epithelial cells,AECs)后,流式细胞术检测AEC吞噬凋亡细胞的情况。结果与正常对照组小鼠相比,ALI小鼠肺组织中HSP70的表达及BALF中HSP70的分泌均增加(均P<0.05)。与ALI组小鼠相比,经anti-HSP70鼻滴治疗后的ALI小鼠,其BALF中TNF-α、IL-6、IL-1β和蛋白的含量均降低(均P<0.05),中性粒细胞数目减少(P<0.05);其肺组织中炎性细胞浸润减少,肺湿/干重比降低(P<0.05)。与LPS刺激组相比,anti-HSP70+LPS组MLE-12细胞培养上清液中TNF-α和IL-1β含量均减少(均P<0.05)。与未刺激组相比,10~500 ng/mL HSP70刺激组MLE-12细胞吞噬凋亡细胞百分率明显降低,其中以200 ng/mL HSP70刺激组降低最为明显(P<0.01);与未刺激组相比,200 ng/mL HSP70刺激的小鼠原代肺泡上皮细胞吞噬率降低(P<0.01)。结论HSP70促进ALI小鼠肺部炎症反应,这一效应可能与HSP70降低肺泡上皮细胞吞噬凋亡细胞的功能相关。 展开更多

关键词 热休克蛋白70 急性肺损伤 肺泡上皮细胞 吞噬功能

在线阅读 下载PDF 职称材料

表达绿色荧光蛋白的重组耻垢分枝杆菌感染THP-1巨噬细胞模型的建立 被引量：3

8

作者 李敏英 王楚彤 +5 位作者 袁美丽 卢思彤 钱中清 李柏青 许涛 汪洪涛 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期789-793,共5页

目的建立表达绿色荧光蛋白(GFP)的耻垢分枝杆菌感染THP-1巨噬细胞模型,对耻垢分枝杆菌进行快速定位和直观检测,为探究结核发病机制以及研制新型结核疫苗提供一种示踪工具。方法以pEGFP-N1质粒为模板采用PCR扩增出增强型绿色荧光蛋白(EG... 目的建立表达绿色荧光蛋白(GFP)的耻垢分枝杆菌感染THP-1巨噬细胞模型,对耻垢分枝杆菌进行快速定位和直观检测,为探究结核发病机制以及研制新型结核疫苗提供一种示踪工具。方法以pEGFP-N1质粒为模板采用PCR扩增出增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因序列,获得EGFP的编码基因,将扩增产物克隆到载体pALACE上,建立重组质粒pALACE-EGFP。利用电穿孔技术将pALACE-EGFP转化到耻垢分枝杆菌中,通过潮霉素抗性筛选重组耻垢分枝杆菌克隆,扩大培养后涂片观察,并进行荧光显微镜镜检。再用重组耻垢分枝杆菌感染THP-1巨噬细胞,观察是否有GFP表达。结果正确构建重组质粒pALACE-EGFP;荧光显微镜下观察重组耻垢分枝杆菌,证实EGFP在重组耻垢分枝杆菌中表达,并且THP-1巨噬细胞被感染后发出绿色荧光。结论表达EGFP蛋白的重组耻垢分枝杆菌的成功建立,为结核分枝杆菌的感染和致病机制研究奠定基础。 展开更多

关键词 绿色荧光蛋白(GFP) 耻垢分枝杆菌 结核病

在线阅读 下载PDF 职称材料

CXCL1通过促进蛋白激酶B磷酸化导致bEND.3小鼠脑微血管内皮细胞骨架收缩和通透性增加 被引量：1

9

作者 韩雨红 董逸舒 +6 位作者 李雪蒙 熊倩倩 陈晓芬 李柏青 汪洪涛 宋传旺 吴凤娇 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期117-123,共7页

目的探讨脓毒症脑病炎症中CXC趋化因子配体1(CXCL1)及其受体CXC趋化因子受体2(CXCR2)对脑内皮细胞骨架重排和通透性的影响及其相关机制。方法野生型小鼠腹腔注射脂多糖(LPS)(10 mg/kg)建立脓毒症脑病模型,ELISA检测全脑组织肿瘤坏死因子... 目的探讨脓毒症脑病炎症中CXC趋化因子配体1(CXCL1)及其受体CXC趋化因子受体2(CXCR2)对脑内皮细胞骨架重排和通透性的影响及其相关机制。方法野生型小鼠腹腔注射脂多糖(LPS)(10 mg/kg)建立脓毒症脑病模型,ELISA检测全脑组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)和CXCL1含量。使用500 ng/mL LPS和200 ng/mL TNF-α刺激bEND.3脑微血管内皮细胞后,Western blot法检测细胞CXCR2的表达。以150 ng/mL CXCL1刺激bEND.3细胞,免疫荧光染色观察脑内皮细胞骨架纤维型肌动蛋白(F-actin)重排的变化。脑内皮细胞通透性实验中,将bEND.3细胞随机分为PBS对照组、CXCL1组、CXCL1联合选择性CXCR2拮抗剂SB225002组,Transwell^(TM)小室检测各组通透性变化情况。CXCL1刺激bEND.3细胞后,Western blot法检测细胞中蛋白激酶B(AKT)和磷酸化AKT(p-AKT)蛋白表达。结果腹腔注射LPS导致小鼠全脑组织中TNF-α和CXCL1水平显著升高;LPS和TNF-α刺激可增高bEND.3细胞CXCR2蛋白的表达。CXCL1刺激bEND.3细胞使其细胞骨架收缩,细胞间隙形成增加,且细胞渗透性增加,而CXCR2拮抗剂SB225002预处理可显著抑制CXCL1引起的脑内皮细胞肌动蛋白应力纤维和细胞间隙的形成、以及通透性的增高,同时CXCL1(150 ng/mL)刺激使得脑内皮细胞AKT的磷酸化水平明显升高。结论CXCL1通过AKT磷酸化激活引起脑内皮细胞骨架收缩、细胞通透性增加,CXCR2拮抗剂SB225002可有效抑制CXCL1诱导的细胞骨架收缩和通透性升高。 展开更多

关键词 脂多糖 bEND.3脑微血管内皮细胞 CXC趋化因子配体1(CXCL1) CXC趋化因子受体2(CXCR2) 脑内皮细胞 细胞骨架重排

在线阅读 下载PDF 职称材料

YAP干扰下调MARCO受体表达抑制肺泡巨噬细胞的吞噬功能

10

作者 冀彩丽 王梓璇 +4 位作者 李帆 庞洪源 苏浩宇 华梦晴 宋传旺 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期631-636,共6页

目的探讨Yes相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)对肺泡巨噬细胞(alveolar macrophages,AMs)吞噬功能的影响及相关机制。方法通过鼻滴脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)构建急性肺损伤(ALI)小鼠模型,24 h后经支气管肺泡灌洗获取原代AMs... 目的探讨Yes相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)对肺泡巨噬细胞(alveolar macrophages,AMs)吞噬功能的影响及相关机制。方法通过鼻滴脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)构建急性肺损伤(ALI)小鼠模型,24 h后经支气管肺泡灌洗获取原代AMs,采用Western blot检测原代AMs中YAP的表达;使用200 ng/mL的TNF-α刺激肺泡巨噬细胞株MH-S,24 h后检测YAP蛋白表达情况。MH-S细胞经YAP siRNA干扰表达或经Verteporfin抑制YAP活性48 h后再与FITC-E.coli共孵育1 h,流式细胞术检测MH-S细胞吞噬率变化。MH-S细胞经MARCO阻断抗体(MARCO Ab)作用6 h后,检测其吞噬E.coli能力的变化。YAP siRNA干扰MH-S细胞YAP表达48 h后,检测MARCO受体的表达情况。结果与对照组相比,ALI小鼠AMs总蛋白(P<0.05)和胞质蛋白(P<0.01)中YAP的表达均下降;TNF-α刺激后的MH-S细胞,其总蛋白和胞质蛋白中YAP蛋白水平均下降(均P<0.05)。与干扰对照组(Sc siRNA组)相比,YAP siRNA组MH-S细胞吞噬能力降低(P<0.01);与对照组相比,YAP活性抑制组MH-S细胞的吞噬率明显下降(P<0.01)。用MARCO Ab阻断MARCO受体后,MH-S吞噬率降低(P<0.01)。与Sc siRNA组相比,YAP siRNA组MH-S细胞MARCO受体表达降低(P<0.01)。结论ALI小鼠AMs中YAP蛋白表达下降,YAP的下调可以导致AMs表面MARCO受体表达降低和吞噬E.coli能力减弱。 展开更多

关键词 急性肺损伤 肺泡巨噬细胞 肿瘤坏死因子-Α MARCO受体 吞噬作用

在线阅读 下载PDF 职称材料

PTPRO激活AKT促进脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤中肺泡上皮细胞的吞噬

11

作者 董逸舒 韩雨红 +6 位作者 陈晓芬 李雪蒙 熊倩倩 钱中清 李柏青 汪洪涛 吴凤娇 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期1091-1096,共6页

目的探讨受体O型蛋白酪氨酸磷酸酶(PTPRO)在脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤中对肺泡上皮细胞吞噬功能的影响。方法体内实验将小鼠随机分成正常对照组和LPS刺激组,通过LPS腹腔注射建立急性肺损伤模型,HE染色检测小鼠肺组织中炎性细胞的浸... 目的探讨受体O型蛋白酪氨酸磷酸酶(PTPRO)在脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤中对肺泡上皮细胞吞噬功能的影响。方法体内实验将小鼠随机分成正常对照组和LPS刺激组,通过LPS腹腔注射建立急性肺损伤模型,HE染色检测小鼠肺组织中炎性细胞的浸润情况,ELISA检测小鼠肺组织中细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达,Western blot法检测LPS对小鼠肺组织PTPRO蛋白表达的影响。体外实验利用小干涉RNA(siRNA)沉默MLE-12肺泡上皮细胞PTPRO的表达,流式细胞术检测LPS和PTPRO沉默对MLE-12细胞吞噬功能的影响;Western blot法检测LPS和PTPRO沉默对MLE-12细胞蛋白激酶B(AKT)和磷酸化AKT蛋白表达的影响。结果LPS腹腔注射建立小鼠急性肺损伤模型后,小鼠肺中浸润的多形核白细胞显著增多,肺组织中TNF-α的表达也升高。小鼠肺组织和MLE-12细胞的PTPRO蛋白表达量随LPS刺激在24 h内呈时间依赖性上调。PTPRO沉默后,MLE-12细胞的吞噬能力显著下降,且其AKT磷酸化水平的表达较对照组显著降低。结论PTPRO可能通过激活AKT信号通路促进MLE-12细胞的吞噬。 展开更多

关键词 PTPRO 急性肺损伤 肺泡上皮细胞 吞噬

在线阅读 下载PDF 职称材料