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人黏着斑激酶(FAK)原核表达及多克隆抗体制备与鉴定: 1; 作者张丽张娅 +4 位作者季江颖魏梓妤刘家宇许涛汪洪涛《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期175-180,共6页; 目的克隆、表达与纯化黏着斑激酶(FAK)基因C端黏着斑定位序列(第798~1041位氨基酸),制备兔抗FAK多克隆抗体并鉴定。方法PCR法体外扩增FAK基因C端序列(2671~3402 bp),克隆至pCZN1,构建pCZN1-FAK重组表达载体,将重组表达载体转化到大肠杆... 展开更多; 关键词人黏着斑激酶(FAK) 多克隆抗体; 在线阅读下载PDF 职称材料

H37Rv结核分枝杆菌蛋白脯氨酸-谷氨酸8(PE8)的表达及其兔多克隆抗体制备被引量：3: 2; 作者许涛张丽 +2 位作者钱中清李柏青汪洪涛《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期549-554,共6页; 目的克隆Rv1040c结核分枝杆菌脯氨酸-谷氨酸8(PE8)基因、构建pET28a-PE8重组载体和表达纯化PE8蛋白,制备抗PE8多克隆抗体。方法利用重组克隆技术,将PE8基因克隆至原核表达载体pET28a,测序鉴定后,转化至大肠杆菌BL21(DE3),用0.5 mmol/L... 展开更多; 关键词结核分枝杆菌(MTB)脯氨酸-谷氨酸8(PE8)蛋白 Rv1040c 多克隆抗体; 在线阅读下载PDF 职称材料

结核分枝杆菌PPE15蛋白的原核表达、鉴定及其兔多克隆抗体的制备被引量：2: 3; 作者许涛李敏英 +4 位作者王楚彤常先友钱中清李柏青汪洪涛《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期78-83,共6页; 目的克隆、表达和纯化结核分枝杆菌脯氨酸-脯氨酸-谷氨酸15(PPE15)蛋白,制备并鉴定PPE15蛋白兔多克隆抗体。方法通过PCR从结核分枝杆菌H37Rv株基因组扩增PPE15基因,利用同源重组克隆技术构建原核表达组氨酸标签PPE15蛋白的pET28a-PPE1... 展开更多; 关键词结核分枝杆菌脯氨酸-脯氨酸-谷氨酸15(PPE15) Rv1040c 多克隆抗体; 在线阅读下载PDF 职称材料

表达绿色荧光蛋白的重组耻垢分枝杆菌感染THP-1巨噬细胞模型的建立被引量：3: 4; 作者李敏英王楚彤 +5 位作者袁美丽卢思彤钱中清李柏青许涛汪洪涛《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期789-793,共5页; 目的建立表达绿色荧光蛋白(GFP)的耻垢分枝杆菌感染THP-1巨噬细胞模型,对耻垢分枝杆菌进行快速定位和直观检测,为探究结核发病机制以及研制新型结核疫苗提供一种示踪工具。方法以pEGFP-N1质粒为模板采用PCR扩增出增强型绿色荧光蛋白(EG... 展开更多; 关键词绿色荧光蛋白(GFP) 耻垢分枝杆菌结核病; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名人黏着斑激酶(FAK)原核表达及多克隆抗体制备与鉴定: 1; 作者张丽张娅季江颖魏梓妤刘家宇许涛汪洪涛; 机构蚌埠医学院第一附属医院分子诊断中心蚌埠医学院检验医学院检验医学实验中心蚌埠医学院慢性疾病免疫学基础与临床安徽省重点实验室蚌埠医学院检验医学院临床检验诊断学教研室蚌埠医学院检验医学院免疫学教研室; 出处《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期175-180,共6页; 基金安徽省自然科学基金(1908085MH252,2008085QH405) 安徽省高校自然科学研究重点项目(KJ2018A0233) +2 种基金安徽省大学生创新创业训练计划项目(S202010367063)。; 文摘目的克隆、表达与纯化黏着斑激酶(FAK)基因C端黏着斑定位序列(第798~1041位氨基酸),制备兔抗FAK多克隆抗体并鉴定。方法PCR法体外扩增FAK基因C端序列(2671~3402 bp),克隆至pCZN1,构建pCZN1-FAK重组表达载体,将重组表达载体转化到大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)感受态细胞,用异丙基β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达;利用镍-次氮基三乙酸(Ni-NTA)金属鳌合亲和层析树脂进行蛋白纯化,并免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体;通过间接ELISA和Western blot法进行效价和特异性鉴定。结果成功构建pCZN1-FAK重组表达载体,FAK蛋白主要以包涵体形式表达。目的蛋白纯化后,制备的兔抗FAK多克隆抗体效价达1∶512000,且与外源和内源FAK蛋白发生特异性反应。结论成功克隆、表达与纯化FAK蛋白,制备兔抗FAK多克隆抗体,可用于内源FAK蛋白特异性检测。; 关键词人黏着斑激酶(FAK) 多克隆抗体; Keywords focal adhesion kinase(FAK) polyclonal antibody; 分类号 S852.43 [农业科学—基础兽医学] Q511 [生物学—生物化学] R392.11 [医药卫生—免疫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名H37Rv结核分枝杆菌蛋白脯氨酸-谷氨酸8(PE8)的表达及其兔多克隆抗体制备被引量：3: 2; 作者许涛张丽钱中清李柏青汪洪涛; 机构蚌埠医学院蚌埠医学院蚌埠医学院; 出处《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期549-554,共6页; 基金卫生部重大传染病专项(2012ZX10003006-004) 安徽省自然科学基金(1908085MH252,2008085QH405) +1 种基金 2018年国家级大学生创新创业项目(201810367001)。; 文摘目的克隆Rv1040c结核分枝杆菌脯氨酸-谷氨酸8(PE8)基因、构建pET28a-PE8重组载体和表达纯化PE8蛋白,制备抗PE8多克隆抗体。方法利用重组克隆技术,将PE8基因克隆至原核表达载体pET28a,测序鉴定后,转化至大肠杆菌BL21(DE3),用0.5 mmol/L异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达、稀释复性与纯化。用纯化PE8蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,间接ELISA和Western blot法进行效价及特异性鉴定。结果成功构建pET28a-PE8原核表达载体,ITPG诱导后PE8蛋白在大肠杆菌主要以包涵体的形式表达,复性后纯化PE8蛋白纯度达90%,纯化多克隆抗体效价为1∶430080以上,能与PE8蛋白发生特异性反应。结论大肠杆菌表达的PE8重组蛋白免疫新西兰大白兔获得高效价的多克隆抗体。; 关键词结核分枝杆菌(MTB)脯氨酸-谷氨酸8(PE8)蛋白 Rv1040c 多克隆抗体; Keywords Mycobacterium tuberculosis(MTB) PE8 protein Rv1040c polyclonal antibody; 分类号 S852.4+3 [农业科学—基础兽医学] R378.91+1 [医药卫生—病原生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名结核分枝杆菌PPE15蛋白的原核表达、鉴定及其兔多克隆抗体的制备被引量：2: 3; 作者许涛李敏英王楚彤常先友钱中清李柏青汪洪涛; 机构蚌埠医学院检验医学院临床检验诊断学教研室蚌埠医学院免疫学教研室蚌埠医学院检验医学实验中心蚌埠市第五人民医院感染科; 出处《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期78-83,共6页; 基金安徽省自然科学基金(1908085MH252,2008085QH405) 安徽省高校自然科学研究重点项目(KJ2018A0233) 蚌埠医学院“512人才培育计划”项目(by51201309)。; 文摘目的克隆、表达和纯化结核分枝杆菌脯氨酸-脯氨酸-谷氨酸15(PPE15)蛋白,制备并鉴定PPE15蛋白兔多克隆抗体。方法通过PCR从结核分枝杆菌H37Rv株基因组扩增PPE15基因,利用同源重组克隆技术构建原核表达组氨酸标签PPE15蛋白的pET28a-PPE15载体。将pET28a-PPE15转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导PPE15蛋白表达,通过SDS-PAGE鉴定PPE15蛋白表达。用亲和层析法Ni-NTA柱纯化PPE15蛋白,用复性纯化后的PPE15蛋白免疫新西兰大白兔,制备和纯化多克隆抗体。Western blot法鉴定PPE15蛋白与人血清和多克隆抗体结合特异性,间接ELISA检测多克隆抗体效价。结果成功构建pET28a-PPE15重组表达载体,PPE15蛋白主要以包涵体形式存在,纯化后在相对分子质量(M;)38 000位置处有单一条带。纯化后PPE15蛋白与结核病患者和多克隆抗体发生特异性反应,多克隆抗体效价达1∶1 300 480以上。结论成功表达和纯化重组PPE15蛋白,并制备出高效价兔源性多克隆抗体,为进一步研究PPE15蛋白的功能提供了实验基础。; 关键词结核分枝杆菌脯氨酸-脯氨酸-谷氨酸15(PPE15) Rv1040c 多克隆抗体; Keywords Mycobacterium tuberculosis Rv1039c PPE15 protein polyclonal antibody; 分类号 R378.911 [医药卫生—病原生物学] R392 [医药卫生—免疫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名表达绿色荧光蛋白的重组耻垢分枝杆菌感染THP-1巨噬细胞模型的建立被引量：3: 4; 作者李敏英王楚彤袁美丽卢思彤钱中清李柏青许涛汪洪涛; 机构慢性疾病免疫学基础与临床安徽省重点实验室蚌埠医学院检验医学院免疫学教研室蚌埠医学院检验医学院临床检验诊断学教研室; 出处《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期789-793,共5页; 基金安徽省自然科学基金(1908085MH252,2008085QH405)。; 文摘目的建立表达绿色荧光蛋白(GFP)的耻垢分枝杆菌感染THP-1巨噬细胞模型,对耻垢分枝杆菌进行快速定位和直观检测,为探究结核发病机制以及研制新型结核疫苗提供一种示踪工具。方法以pEGFP-N1质粒为模板采用PCR扩增出增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因序列,获得EGFP的编码基因,将扩增产物克隆到载体pALACE上,建立重组质粒pALACE-EGFP。利用电穿孔技术将pALACE-EGFP转化到耻垢分枝杆菌中,通过潮霉素抗性筛选重组耻垢分枝杆菌克隆,扩大培养后涂片观察,并进行荧光显微镜镜检。再用重组耻垢分枝杆菌感染THP-1巨噬细胞,观察是否有GFP表达。结果正确构建重组质粒pALACE-EGFP;荧光显微镜下观察重组耻垢分枝杆菌,证实EGFP在重组耻垢分枝杆菌中表达,并且THP-1巨噬细胞被感染后发出绿色荧光。结论表达EGFP蛋白的重组耻垢分枝杆菌的成功建立,为结核分枝杆菌的感染和致病机制研究奠定基础。; 关键词绿色荧光蛋白(GFP) 耻垢分枝杆菌结核病; Keywords green fluorescent protein(GFP) Mycobacterium smegmatis tuberculosis; 分类号 R378.911 [医药卫生—病原生物学] R825.2 [医药卫生—临床医学] R392.12 [医药卫生—免疫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	人黏着斑激酶(FAK)原核表达及多克隆抗体制备与鉴定	张丽张娅季江颖魏梓妤刘家宇许涛汪洪涛	《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2023	0	在线阅读下载PDF 职称材料
2	H37Rv结核分枝杆菌蛋白脯氨酸-谷氨酸8(PE8)的表达及其兔多克隆抗体制备	许涛张丽钱中清李柏青汪洪涛	《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2020	3	在线阅读下载PDF 职称材料
3	结核分枝杆菌PPE15蛋白的原核表达、鉴定及其兔多克隆抗体的制备	许涛李敏英王楚彤常先友钱中清李柏青汪洪涛	《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2022	2	在线阅读下载PDF 职称材料
4	表达绿色荧光蛋白的重组耻垢分枝杆菌感染THP-1巨噬细胞模型的建立	李敏英王楚彤袁美丽卢思彤钱中清李柏青许涛汪洪涛	《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2022	3	在线阅读下载PDF 职称材料