IL-6通过激活JAK2/STAT3信号通路增强小鼠肺泡巨噬细胞的吞噬功能 被引量：4

1

作者 华梦晴 高培宇 +2 位作者 方芳 苏浩宇 宋传旺 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期13-18,共6页

目的 探讨白细胞介素6(IL-6)对MH-S小鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能的影响及其相关机制。方法 脂多糖(LPS)经气道滴入激发构建小鼠急性肺损伤(ALI)模型,ELISA检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-6的含量。体外培养MH-S细胞,在信号转导子与转录激... 目的 探讨白细胞介素6(IL-6)对MH-S小鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能的影响及其相关机制。方法 脂多糖(LPS)经气道滴入激发构建小鼠急性肺损伤(ALI)模型,ELISA检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-6的含量。体外培养MH-S细胞,在信号转导子与转录激活子3 (STAT3)抑制剂Stattic(5μmol/L)存在与否的情况下,再加入IL-6(10 ng/mL~500 ng/mL)刺激6 h,加入荧光微球孵育2 h后,采用流式细胞术检测MH-S细胞吞噬荧光微球情况;Western blot法检测磷酸化的Janus激酶2(p-JAK2)、磷酸化的STAT3(p-STAT3)、肌动蛋白相关蛋白2(Arp2)、纤维型肌动蛋白(F-actin)的表达水平。结果 鼻腔滴入LPS后,小鼠BALF中IL-6含量显著升高。随着IL-6刺激剂量的增加,MH-S细胞吞噬荧光微球的作用增强,Arp2、 F-actin蛋白的表达水平升高。100 ng/mL IL-6刺激MH-S细胞后,p-JAK2和p-STAT3蛋白的表达水平升高。阻断MH-S细胞STAT3信号后,IL-6促进细胞吞噬的效应完全消失,IL-6诱导的Arp2、 F-actin蛋白表达增加被抑制。结论 IL-6通过激活JAK2/STAT3信号通路促进MH-S细胞Arp2、 F-actin蛋白的表达增强吞噬功能。 展开更多

关键词 白细胞介素6(IL-6) MH-S细胞 吞噬功能 Janus激酶2(JAK2) 信号转导子与转录激活子3(STAT3) 肺泡巨噬细胞

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CRISPR-Cas系统在病原核酸检测中的研究进展 被引量：3

2

作者 杜瑶 高宏丹 +4 位作者 刘家坤 刘孝荣 邢志浩 张涛 马东礼 《合成生物学》 CSCD 北大核心 2024年第1期202-216,共15页

CRISPR-Cas系统作为原核生物获得性免疫系统,由簇状规则间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)和CRISPR相关蛋白(CRISPR-associated proteins,Cas)构成,因其识别和切割特定DNA或RNA序... CRISPR-Cas系统作为原核生物获得性免疫系统,由簇状规则间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)和CRISPR相关蛋白(CRISPR-associated proteins,Cas)构成,因其识别和切割特定DNA或RNA序列,而成为分子诊断领域研究的热点。研究人员利用Cas蛋白(Cas12、Cas13、Cas14、Cas3等)结合信号放大和转化技术(荧光法、电位法、比色法、侧向流动技术等),开发了许多高灵敏度、高特异性、低成本的诊断平台,为病原核酸检测提供了新途径。本文介绍了CRISPR-Cas系统的生物学机制及分类,总结现有的基于Cas蛋白反式切割活性开发的病原核酸检测技术,描述其特点、功能和应用场景,并对该系统的未来应用前景进行展望,期望CRISPR-Cas系统成为包括核酸检测在内的多靶标的理想检测平台。 展开更多

关键词 CRISPR-Cas系统 Cas12和Cas13 病原体 核酸检测 生物传感

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姐妹染色体过早分离基因5黏附相关因子B(PDS5B)下调Wnt5a表达抑制A549人肺癌细胞增殖

3

作者 马丽 马童童 +3 位作者 周文静 李娟 李玉云 徐慧 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期15-20,共6页

目的探讨姐妹染色体过早分离基因5黏附相关因子B(PDS5B)对A549肺癌细胞株生物学功能的影响及可能的分子机制。方法沉默或过表达A549人肺癌细胞的PDS5B后,噻唑蓝(MTT)法及集落形成实验检测肺癌细胞的增殖情况;划痕实验及TranswellTM检测... 目的探讨姐妹染色体过早分离基因5黏附相关因子B(PDS5B)对A549肺癌细胞株生物学功能的影响及可能的分子机制。方法沉默或过表达A549人肺癌细胞的PDS5B后,噻唑蓝(MTT)法及集落形成实验检测肺癌细胞的增殖情况;划痕实验及TranswellTM检测细胞迁移的情况;Western blot法检测A549细胞PDS5B及无翅基因5a(Wnt5a)的蛋白表达;共同转染PDS5B小干涉RNA(siRNA)及Wnt5a siRNA,TranswellTM检测细胞迁移的情况。结果与转染阴性对照组相比,转染PDS5B siRNA后,PDS5B蛋白表达明显下降且A549细胞增殖能力、细胞集落形成率、迁移能力均明显提高,Wnt5a的表达升高;过表达PDS5B后,则结果相反;共转实验显示Wnt5a可以抵抗PDS5B对A549细胞的抑制作用。结论PDS5B通过下调Wnt5a表达抑制肺癌细胞增殖。 展开更多

关键词 姐妹染色体过早分离基因5黏附相关因子B(PDS5B) A549肺癌细胞 无翅基因5a(Wnt5a) 癌细胞生物学

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人黏着斑激酶(FAK)原核表达及多克隆抗体制备与鉴定

4

作者 张丽 张娅 +4 位作者 季江颖 魏梓妤 刘家宇 许涛 汪洪涛 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期175-180,共6页

目的克隆、表达与纯化黏着斑激酶(FAK)基因C端黏着斑定位序列(第798~1041位氨基酸),制备兔抗FAK多克隆抗体并鉴定。方法PCR法体外扩增FAK基因C端序列(2671~3402 bp),克隆至pCZN1,构建pCZN1-FAK重组表达载体,将重组表达载体转化到大肠杆... 目的克隆、表达与纯化黏着斑激酶(FAK)基因C端黏着斑定位序列(第798~1041位氨基酸),制备兔抗FAK多克隆抗体并鉴定。方法PCR法体外扩增FAK基因C端序列(2671~3402 bp),克隆至pCZN1,构建pCZN1-FAK重组表达载体,将重组表达载体转化到大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)感受态细胞,用异丙基β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达;利用镍-次氮基三乙酸(Ni-NTA)金属鳌合亲和层析树脂进行蛋白纯化,并免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体;通过间接ELISA和Western blot法进行效价和特异性鉴定。结果成功构建pCZN1-FAK重组表达载体,FAK蛋白主要以包涵体形式表达。目的蛋白纯化后,制备的兔抗FAK多克隆抗体效价达1∶512000,且与外源和内源FAK蛋白发生特异性反应。结论成功克隆、表达与纯化FAK蛋白,制备兔抗FAK多克隆抗体,可用于内源FAK蛋白特异性检测。 展开更多

关键词 人黏着斑激酶(FAK) 多克隆抗体

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敲低lncRNA CACNA1C-AS2促进上皮间质转化增强人食管癌细胞的增殖、侵袭和迁移 被引量：6

5

作者 秦玉萍 曹通 +3 位作者 许颖 蒋旭 马佳 禹莉 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期249-257,共9页

目的 探讨钙电压门控通道亚基α1C反义RNA2(CACNA1C-AS2)通过调节上皮间质转化(EMT)对食管癌细胞恶性生物学行为的影响。方法 通过癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析CACNA1C-AS2在癌旁组织和食管癌组织的表达;实时定量PCR检测食管癌细胞中... 目的 探讨钙电压门控通道亚基α1C反义RNA2(CACNA1C-AS2)通过调节上皮间质转化(EMT)对食管癌细胞恶性生物学行为的影响。方法 通过癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析CACNA1C-AS2在癌旁组织和食管癌组织的表达;实时定量PCR检测食管癌细胞中CACNA1C-AS2 mRNA表达水平;在食管癌细胞中敲低和高表达CACNA1C-AS2后,采用噻唑蓝(MTT)法和细胞集落形成实验检测细胞的活力,TranswellTM小室法检测细胞的侵袭能力和纵向迁移能力,划痕愈合实验检测细胞的横向迁移能力,流式细胞术检测细胞的凋亡率;Western blot法检测神经钙黏素(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和锌指转录因子snail 2(slug)蛋白表达。结果 CACNA1C-AS2在食管癌组织和细胞系中均低表达;敲低EC-9706细胞和Eca-109细胞中CACNA1C-AS2后,食管癌细胞的侵袭、迁移能力和细胞活力显著增强,细胞凋亡减少;N-cadherin、vimentin和slug表达上调。过表达CACNA1C-AS2则结果相反。结论 CACNA1C-AS2通过促进EMT增强食管癌细胞的增殖、侵袭和迁移。 展开更多

关键词 食管癌 长链非编码RNA(lncRNA) 钙电压门控通道亚基α1C反义RNA2(CACNA1C-AS2) 上皮间质转化(EMT)

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H37Rv结核分枝杆菌蛋白脯氨酸-谷氨酸8(PE8)的表达及其兔多克隆抗体制备 被引量：3

6

作者 许涛 张丽 +2 位作者 钱中清 李柏青 汪洪涛 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期549-554,共6页

目的克隆Rv1040c结核分枝杆菌脯氨酸-谷氨酸8(PE8)基因、构建pET28a-PE8重组载体和表达纯化PE8蛋白,制备抗PE8多克隆抗体。方法利用重组克隆技术,将PE8基因克隆至原核表达载体pET28a,测序鉴定后,转化至大肠杆菌BL21(DE3),用0.5 mmol/L... 目的克隆Rv1040c结核分枝杆菌脯氨酸-谷氨酸8(PE8)基因、构建pET28a-PE8重组载体和表达纯化PE8蛋白,制备抗PE8多克隆抗体。方法利用重组克隆技术,将PE8基因克隆至原核表达载体pET28a,测序鉴定后,转化至大肠杆菌BL21(DE3),用0.5 mmol/L异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达、稀释复性与纯化。用纯化PE8蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,间接ELISA和Western blot法进行效价及特异性鉴定。结果成功构建pET28a-PE8原核表达载体,ITPG诱导后PE8蛋白在大肠杆菌主要以包涵体的形式表达,复性后纯化PE8蛋白纯度达90%,纯化多克隆抗体效价为1∶430080以上,能与PE8蛋白发生特异性反应。结论大肠杆菌表达的PE8重组蛋白免疫新西兰大白兔获得高效价的多克隆抗体。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌(MTB)脯氨酸-谷氨酸8(PE8)蛋白 Rv1040c 多克隆抗体

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结核分枝杆菌PPE15蛋白的原核表达、鉴定及其兔多克隆抗体的制备 被引量：2

7

作者 许涛 李敏英 +4 位作者 王楚彤 常先友 钱中清 李柏青 汪洪涛 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期78-83,共6页

目的 克隆、表达和纯化结核分枝杆菌脯氨酸-脯氨酸-谷氨酸15(PPE15)蛋白,制备并鉴定PPE15蛋白兔多克隆抗体。方法 通过PCR从结核分枝杆菌H37Rv株基因组扩增PPE15基因,利用同源重组克隆技术构建原核表达组氨酸标签PPE15蛋白的pET28a-PPE1... 目的 克隆、表达和纯化结核分枝杆菌脯氨酸-脯氨酸-谷氨酸15(PPE15)蛋白,制备并鉴定PPE15蛋白兔多克隆抗体。方法 通过PCR从结核分枝杆菌H37Rv株基因组扩增PPE15基因,利用同源重组克隆技术构建原核表达组氨酸标签PPE15蛋白的pET28a-PPE15载体。将pET28a-PPE15转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导PPE15蛋白表达,通过SDS-PAGE鉴定PPE15蛋白表达。用亲和层析法Ni-NTA柱纯化PPE15蛋白,用复性纯化后的PPE15蛋白免疫新西兰大白兔,制备和纯化多克隆抗体。Western blot法鉴定PPE15蛋白与人血清和多克隆抗体结合特异性,间接ELISA检测多克隆抗体效价。结果 成功构建pET28a-PPE15重组表达载体,PPE15蛋白主要以包涵体形式存在,纯化后在相对分子质量(M;)38 000位置处有单一条带。纯化后PPE15蛋白与结核病患者和多克隆抗体发生特异性反应,多克隆抗体效价达1∶1 300 480以上。结论 成功表达和纯化重组PPE15蛋白,并制备出高效价兔源性多克隆抗体,为进一步研究PPE15蛋白的功能提供了实验基础。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 脯氨酸-脯氨酸-谷氨酸15(PPE15) Rv1040c 多克隆抗体

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miR-497阻断Wnt/β-catenin信号通路抑制SGC-7901人胃癌失巢凋亡抵抗细胞的生长和转移 被引量：3

8

作者 禹莉 许颖 +5 位作者 杨靖瑞 高榴 李海翔 王姿涵 张兆君 凌云志 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期617-625,共9页

目的 探讨微小RNA 497(miR-497)在胃癌转移中的作用及机制。方法 SGC-7901胃癌亲本细胞培养在超低黏附环境中,重新贴壁后建立SGC-7901细胞失巢凋亡抵抗模型,集落形成实验、流式细胞术、 TranswellTM实验和划痕愈合实验检测其细胞生物学... 目的 探讨微小RNA 497(miR-497)在胃癌转移中的作用及机制。方法 SGC-7901胃癌亲本细胞培养在超低黏附环境中,重新贴壁后建立SGC-7901细胞失巢凋亡抵抗模型,集落形成实验、流式细胞术、 TranswellTM实验和划痕愈合实验检测其细胞生物学行为与亲本细胞的差异、荧光定量PCR检测miR-497表达、 Western blot法检测无翅基因/β联蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路关键蛋白以及上皮间质转化(EMT)相关蛋白如波形蛋白(vimentin)和上皮钙黏蛋白(E-cadherin)等表达的变化;亲本细胞和凋亡抵抗SGC-7901细胞转染miR-497抑制物(miR-497 inhibitor)或miR-497模拟物(miR-497 mimic), CCK-8法检测其增殖活性、 TranswellTM侵袭实验检测细胞侵袭能力、 TranswellTM迁移实验和划痕愈合实验检测细胞迁移能力、 Western blot法检测Wnt1、 β-catenin、 E-cadherin、 vimentin蛋白表达的变化。通过在失巢凋亡抵抗SGC-7901细胞中转染miR-497 mimic,在裸鼠皮下接种,测量并记录肿瘤组织的体积及质量的变化,Western blot法检测Wnt1、 β-catenin、 E-cadherin、 vimentin蛋白表达的变化。结果 与亲本细胞相比,SGC-7901胃癌失巢凋亡抵抗细胞增殖速度更快、集落形成更强,凋亡率更低,侵袭和迁移能力更强,miR-497表达明显下降。下调miR-497后细胞增殖能力显著增强,侵袭、迁移能力明显增强,Wnt1、 β-catenin蛋白表达量显著增加,vimentin表达显著增加,E-cadherin表达下降,而上调miR-497表达结果相反。miR-497过表达组的肿瘤组织生长速度、肿瘤的体积与质量明显低于对照组;Wnt1、 β-catenin、 vimentin蛋白表达量显著下降,而E-cadherin表达明显上调。结论miR-497在SGC-7901失巢凋亡抵抗细胞中低表达,miR-497通过阻断Wnt/β-catenin信号通路的活化和EMT,抑制胃癌细胞的生长和转移。 展开更多

关键词 miR-497 SGC-7901细胞 WNT β联蛋白(β-catenin) 失巢凋亡抵抗

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三七总皂苷通过阻断Notch1通路抑制U2OS骨肉瘤细胞的增殖、侵袭和迁移并促进其凋亡 被引量：4

9

作者 徐慧 许涛 +3 位作者 方梦影 周智敏 马童童 常林 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期716-721,共6页

目的探讨三七总皂苷(PNS)对U2OS人骨肉瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭迁移生物学行为的影响及机制。方法培养U2OS人骨肉瘤细胞,采用(0、200、400、600、800、1000)μg/mL PNS处理细胞后,CCK-8法检测骨肉瘤细胞的增殖,异硫氰酸荧光素标记的膜... 目的探讨三七总皂苷(PNS)对U2OS人骨肉瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭迁移生物学行为的影响及机制。方法培养U2OS人骨肉瘤细胞,采用(0、200、400、600、800、1000)μg/mL PNS处理细胞后,CCK-8法检测骨肉瘤细胞的增殖,异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡,集落形成实验检测细胞的集落形成能力,TranswellTM侵袭实验检测细胞侵袭、TranswellTM迁移实验和划痕愈合实验检测细胞迁移;Western blot法检测U2OS细胞缺刻基因1(Notch1)、发状分裂增强子1(Hes1)的蛋白表达。结果与对照组相比,PNS可以呈剂量依赖性抑制U2OS细胞的增殖与集落形成,细胞凋亡率增加,细胞侵袭、迁移能力减弱,细胞Notch1及Hes1的蛋白水平降低。结论PNS通过阻断Notch1的信号通路抑制U2OS骨肉瘤细胞的增殖、侵袭、迁移并促进其凋亡。 展开更多

关键词 三七总皂苷(PNS) U2OS骨肉瘤细胞 缺刻基因1(Notch1)

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nanos1基因在日本血吸虫不同发育时期的定位 被引量：2

10

作者 华梦晴 邵延靖 +1 位作者 刘淼 沈际佳 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2020年第2期215-221,共7页

目的探讨nanos1基因在日本血吸虫的定位以及不同发育时期的表达情况。方法在NCBI上搜索日本血吸虫nanos1基因,PCR扩增、测序并将其全长序列经BLAST软件分析,利用DNAMAN6.0和ClustalX2.0.9进行多重序列比对,利用MAGA 5.05构建进化树进行... 目的探讨nanos1基因在日本血吸虫的定位以及不同发育时期的表达情况。方法在NCBI上搜索日本血吸虫nanos1基因,PCR扩增、测序并将其全长序列经BLAST软件分析,利用DNAMAN6.0和ClustalX2.0.9进行多重序列比对,利用MAGA 5.05构建进化树进行系统进化分析。体外转录地高辛(DIG)标记的RNA探针,并将其用于日本血吸虫感染后第18、24和42天3个发育时期的雌雄虫整体原位杂交,以确定nanos1基因在日本血吸虫的定位。结果PCR扩增获得日本血吸虫nanos1基因,生物信息学分析结果表明其编码的蛋白与曼氏血吸虫nanos2蛋白同源性最高。体外转录成功的RNA探针用于日本血吸虫整体原位杂交,在感染后第24、42天雌虫的卵巢和卵黄腺以及18天雌虫的卵巢检测到阳性杂交信号,而各个发育阶段的雄虫均未观察到明显阳性杂交信号。结论日本血吸虫nanos1基因高表达于感染后第18天雌虫的卵巢以及第24、42天雌虫的卵巢和卵黄腺。该研究初步揭示了日本血吸虫nanos1基因的表达模式,为研究nanos1基因的功能提供了重要线索。 展开更多

关键词 日本血吸虫 nanos1 进化分析 整体原位杂交

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P4HA2通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路促进肝癌的发生和发展 被引量：6

11

作者 商玲 姜雯迪 +1 位作者 张俊丽 武文娟 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期665-672,共8页

目的 探讨脯氨酸4-羟化酶Ⅱ(P4HA2)在肝癌细胞发生发展中的作用及相关机制。方法 利用GEPIA、Human Protein Atlas数据库预测P4HA2在肝癌中的表达情况,利用K-M plotter在线数据库分析P4HA2的表达情况与肝癌预后的关系,采用qRT-PCR和West... 目的 探讨脯氨酸4-羟化酶Ⅱ(P4HA2)在肝癌细胞发生发展中的作用及相关机制。方法 利用GEPIA、Human Protein Atlas数据库预测P4HA2在肝癌中的表达情况,利用K-M plotter在线数据库分析P4HA2的表达情况与肝癌预后的关系,采用qRT-PCR和Western blot检测肝癌细胞和正常肝细胞中P4HA2的表达。构建慢病毒载体,用携带P4HA2 shRNA和Con shRNA的慢病毒载体分别转染肝癌SNU-449和Hep-3B细胞系,建立沉默表达P4HA2的细胞株(shP4HA2组)和对照组细胞株(NC组)。采用CCK-8、集落形成试验、划痕实验和Transwell实验分别检测细胞增殖、迁移和侵袭能力。采用Western blot实验检测上皮-间质转化和PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达情况。结果 在线数据库分析结果显示,肝癌组织中P4HA2表达高于正常肝组织(P<0.05)。同时,肝癌细胞系中P4HA2 mRNA和蛋白表达水平也高于正常肝细胞(P<0.01)。慢病毒干扰后,与NC组相比,shP4HA2组中mRNA和蛋白表达水平下降(P<0.05)。P4HA2基因表达沉默后,细胞的增殖、迁移和侵袭受到抑制。Western blot显示,相对于NC组,shP4HA2组的E-cadherin蛋白表达上升,N-cadherin、Snail蛋白表达下降(P<0.05),在PI3K/AKT/mTOR通路中,磷酸化的PI3K(P-PI3K)、AKT(P-AKT)和m TOR(P-mTOR)显示出较低的水平(P<0.05)。结论 P4HA2通过激活PI3K/Akt/mTOR信号通路影响肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭,促进肝癌的发生发展。 展开更多

关键词 肝癌 脯氨酸4-羟化酶II 迁移侵袭 PI3K/AKT/MTOR

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胰岛素生长因子1(IGF-1)通过S1P/S1PR1信号激活PI3K通路促进小鼠肺泡上皮细胞迁移 被引量：5

12

作者 耿建 母迷迷 +5 位作者 冀彩丽 李梦婷 马丽 王梓璇 华梦晴 宋传旺 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期996-1002,共7页

目的探讨胰岛素样生长因子1(IGF-1)对肺泡上皮细胞(AEC)迁移的影响及其相关机制。方法在磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂渥曼青霉素(Wortmannin)存在与否的情况下,采用IGF-1、鞘氨醇1磷酸(S1P)刺激AEC后,划痕愈合实验检测MLE-12小鼠AEC的迁... 目的探讨胰岛素样生长因子1(IGF-1)对肺泡上皮细胞(AEC)迁移的影响及其相关机制。方法在磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂渥曼青霉素(Wortmannin)存在与否的情况下,采用IGF-1、鞘氨醇1磷酸(S1P)刺激AEC后,划痕愈合实验检测MLE-12小鼠AEC的迁移,Western blot法检测磷酸化的蛋白激酶B(p-AKT)的表达。采用IGF-1刺激AEC后,ELISA检测S1P的分泌,Western blot法检测其蛋白表达。阻断实验中,AEC S1P受体1(S1PR1)干扰或受S1PR1阻断抗体作用后,划痕实验检测IGF-1对细胞迁移的影响,Western blot法检测p-AKT蛋白表达。结果IGF-1刺激12 h后,AEC的p-AKT表达增加,细胞迁移加快;阻断PI3K信号后,IGF-1促进AEC迁移效应部分消失。IGF-1诱导AEC产生S1P,S1P通过S1PR1加快AEC迁移;S1P刺激AEC后p-AKT表达增强,阻断PI3K通路后,S1P加快AEC迁移的能力降低。AEC预先被阻断S1PR1或S1PR1干扰后,IGF-1加快AEC迁移和促进AEC p-AKT表达的效应被部分降低。结论IGF-1通过S1P-S1PR1信号激活PI3K通路促进AEC迁移。 展开更多

关键词 肺泡上皮细胞(AEC) 迁移 胰岛素样生长因子1(IGF-1) 鞘氨醇1磷酸(S1P) 磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)

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姜黄素通过Keap1-Nrf2通路抑制甲状腺乳头状癌B-CPAP细胞的增殖、迁移及侵袭 被引量：5

13

作者 任丽 邹明远 +5 位作者 朱行春 徐文隽 刘刚 孙俊杰 范方田 张从利 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期1356-1362,共7页

目的研究姜黄素对B-CPAP人甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响作用及其机制。方法姜黄素(0、5、10、15、20μmol/L)作用B-CPAP细胞,MTT法、Transwell法检测细胞存活率、迁移及侵袭;DCFH-DA试剂盒流式细胞仪检测细胞ROS水平;Weste... 目的研究姜黄素对B-CPAP人甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响作用及其机制。方法姜黄素(0、5、10、15、20μmol/L)作用B-CPAP细胞,MTT法、Transwell法检测细胞存活率、迁移及侵袭;DCFH-DA试剂盒流式细胞仪检测细胞ROS水平;Western blot法验证Nrf2、Keap1蛋白变化情况,qRT-PCR法检测Nrf2、Keap1基因mRNA。结果与0μmol/L组细胞比较,随着姜黄素作用的时间(24、48、72 h)增加,B-CPAP细胞存活率显著下降,随着姜黄素浓度的增加细胞存活率、迁移、侵袭能力显著下降(P<0.05或P<0.01);姜黄素剂量依赖性触发B-CPAP细胞ROS产生、并且可被N-乙酰半胱氨酸(NAC)有效逆转;20μmol/L姜黄素组细胞Nrf2蛋白及m RNA水平显著降低、Keap1蛋白及mRNA水平表达显著升高(P<0.05或P<0.01),对细胞核、胞浆Nrf2蛋白水平的Western blot检测分析发现20μmol/L姜黄素显著降低细胞核内Nrf2蛋白水平(P<0.05)、而胞浆内Nrf2蛋白表达量未见显著差异(P>0.05)。结论姜黄素可能通过调节Keap1-Nrf2通路抑制B-CPAP甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移及侵袭能力。 展开更多

关键词 姜黄素 B-CPAP细胞 Keap1-Nrf2通路 甲状腺乳头状癌

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乙酰紫堇灵通过抑制肠上皮细胞凋亡改善三硝基苯磺酸诱导的小鼠克罗恩病样结肠炎 被引量：1

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作者 李晴晴 黄菊 +9 位作者 孙洋 徐赟辉 王炼 张小凤 王月月 耿志军 宋雪 左芦根 李静 胡建国 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期1306-1314,共9页

目的探究乙酰紫堇灵(Ace)对2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的小鼠克罗恩病(CD)样结肠炎的作用及机制。方法将40只雄性C57BL/6小鼠随机分为5组:WT组、TNBS组和Ace干预组(Ace-10组、Ace-20组和Ace-40组),每组8只。TNBS组和Ace干预组小鼠均... 目的探究乙酰紫堇灵(Ace)对2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的小鼠克罗恩病(CD)样结肠炎的作用及机制。方法将40只雄性C57BL/6小鼠随机分为5组:WT组、TNBS组和Ace干预组(Ace-10组、Ace-20组和Ace-40组),每组8只。TNBS组和Ace干预组小鼠均采用TNBS诱导建立结肠炎模型,Ace干预组分别给予10、20、40 mg/kg的Ace灌胃治疗,而TNBS组均给予等量生理盐水。通过监测体质量变化、疾病活动评分(DAI)、结肠长度测量、HE染色和组织学评分评估Ace对TNBS结肠炎小鼠的保护作用。小鼠结肠组织经免疫荧光检测Claudin-1、Western blot检测紧密连接蛋白(Claudin-1和ZO-1)和凋亡相关蛋白(C-caspase3、Bax和Bcl-2)以及Tunel染色检测肠上皮细胞凋亡的数量。采用结肠类器官经脂多糖诱导建立凋亡模型,分为Control组、脂多糖组及Ace组,采用免疫荧光检测Claudin-1以及Western blot检测Claudin-1、ZO-1、C-caspase3、Bax和Bcl-2的表达。利用网络药理学预测Ace抑制肠上皮细胞凋亡的分子机制可能与PI3K-AKT通路相关,采用Western blot验证小鼠结肠组织和结肠类器官中pPI3K和p-AKT的表达。体外凋亡模型中加入PI3K-AKT信号通路激活剂(740Y-P),Western blot验证结肠类器官中p-PI3K、pAKT、C-caspase3、Bax及Bcl-2的表达。结果与TNBS组相比,Ace治疗可显著缓解TNBS小鼠的体质量下降、结肠长度缩短、DAI评分和炎症评分升高(P<0.05)。在Ace组小鼠结肠组织中,免疫荧光结果显示:Claudin-1的表达上调(P<0.05);Western blot结果显示:Claudin-1、ZO-1和Bcl-2的蛋白水平升高,而C-caspase3和Bax的表达降低(P<0.05);Tunel染色结果显示:肠上皮细胞凋亡数量减少(P<0.05)。在体外凋亡模型中,经Ace干预后,免疫荧光和Western blot结果显示,结肠类器官组织中ZO-1和Claudin-1的表达升高(P<0.05)、C-caspase3和Bax表达降低,而Bcl-2表达升高(P<0.05)。KEGG通路富集预测发现PI3K-AKT信号通路与Ace治疗CD具有相关性,且Western blot结果表明,在体内外模型中经Ace干预后p-AKT和p-PI3K的表达显著降低(P<0.05)。另外,PI3K-AKT激活剂(740Y-P)促进p-PI3K、p-AKT、C-caspase3和Bax的表达,而抑制Bcl-2的表达(P<0.05)。结论Ace可能通过干扰PI3K/AKT信号的激活抑制肠上皮细胞凋亡,进而发挥对TNBS诱导的小鼠CD样结肠炎的保护作用。 展开更多

关键词 克罗恩病 乙酰紫堇灵 肠上皮细胞凋亡 PI3K/AKT

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高表达RAB7A通过促进肿瘤侵袭影响胃癌患者的预后 被引量：3

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作者 张敏 刘生宝 +7 位作者 张诺 张文静 夏勇生 宋雪 张小凤 左芦根 李静 胡建国 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期1734-1743,共10页

目的探讨Ras相关蛋白7A(RAB7A)在胃癌组织中的表达对预后的影响及其作用机制。方法基于癌症公共数据库和本院接受胃癌根治术的104例患者,分析RAB7A在胃癌及癌旁组织中表达的差异以及其与患者临床病理学参数和预后的关系;采用生物信息学... 目的探讨Ras相关蛋白7A(RAB7A)在胃癌组织中的表达对预后的影响及其作用机制。方法基于癌症公共数据库和本院接受胃癌根治术的104例患者,分析RAB7A在胃癌及癌旁组织中表达的差异以及其与患者临床病理学参数和预后的关系;采用生物信息学富集分析预测RAB7A影响胃癌侵袭途径的作用和机制;通过慢病毒转染获得过表达和低表达RAB7A的胃癌细胞系(MGC803),采用免疫印迹、划痕及Transwell实验探究RAB7A对ECM降解的影响以及RAB7A对胃癌细胞迁移、侵袭的作用和机制。结果癌症公共数据库分析显示胃癌组织中RAB7A的表达高于正常对照组,且负面影响患者生存期(P<0.01)。本院患者数据显示,胃癌组织中RAB7A的表达高于癌旁组织(P<0.01),且与外周血胚抗原、糖类抗原19-9水平正相关(P<0.001)。单因素结合Cox多因素分析显示,RAB7A高表达是影响胃癌5年生存率的独立危险因素(HR:2.882;95%CI:1.459~5.693);ROC曲线分析显示,以RAB7A相对表达量2.625为截断值,其预测患者术后5年死亡的敏感性为84.62%,特异性为71.15%。生物信息学富集分析显示,RAB7A参与了胃癌组织ECM降解和PI3K/AKT信号激活;体外实验证实,过表达RAB7A可激活胃癌细胞PI3K/AKT信号(P<0.01),增强基质金属蛋白酶(MMP-2和MMP-9)表达(P<0.01),以及胃癌细胞迁移和侵袭能力(P<0.01)。结论RAB7A在胃癌组织中高表达并影响患者预后,其作用和激活胃癌PI3K/AKT信号并促进ECM降解和肿瘤侵袭有关。 展开更多

关键词 胃癌 RAB7A 预后 侵袭 PI3K/AKT

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基于壳聚糖和聚乙二醇的新型负载冻干PRP止血抗菌凝胶 被引量：3

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作者 马铭梓 曾元 +7 位作者 尚玮 梁笑星 杨璐 钟晓龙 孙莉萍 汪德清 陶磊 于洋 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期870-876,共7页

目的:制备负载冻干富血小板血浆-壳聚糖/双端苯甲醛基聚乙二醇动态凝胶(LPRP-CP),通过体内外试验探讨其止血抗菌及促进烫伤创面愈合作用。方法:本研究设置普通纱布/空白药片对照(Ctrl)、壳聚糖护创粉(Chito P)、LPRP-CP和ChitoGauze XP ... 目的:制备负载冻干富血小板血浆-壳聚糖/双端苯甲醛基聚乙二醇动态凝胶(LPRP-CP),通过体内外试验探讨其止血抗菌及促进烫伤创面愈合作用。方法:本研究设置普通纱布/空白药片对照(Ctrl)、壳聚糖护创粉(Chito P)、LPRP-CP和ChitoGauze XP PRO(Chito G)共4组。通过建立兔耳动脉出血模型及背部皮肤浅Ⅱ°烫伤模型,计算止血时间、出血量及观察烫伤愈合的大体及组织学结果,评价4组材料的止血效果和促愈合作用;通过体外抗菌试验,评价4组材料的抗菌效果。结果:在兔耳动脉出血模型中,各组材料均止血成功。Ctrl、Chito P、LPRP-CP和Chito G组止血时间分别为213.33±38.30、118.33±24.01、115.00±8.37和111.67±11.69 s,出血量分别为1233.83±992.27、346.67±176.00、193.33±121.47和147.50±80.66 mg。与Ctrl比较,Chito P、LPRP-CP和Chito G组的止血时间显著缩短(P<0.001),LPRP-CP组和Chito G组的出血量减少(P<0.05);Chito P和Chito G组止血时间和出血量与LPRP-CP组比较均无统计学差异(P>0.05)。在兔背部浅Ⅱ°烫伤模型中,LPRP-CP组的创面愈合速度均快于同一时间的其它3组,且愈合效果良好。在体外抗菌试验中,仅有LPRP-CP组有较好的抗金黄色葡萄球菌作用,所有组均无抗大肠杆菌的作用。结论:LPRP-CP对浅表动脉损伤止血效果较好,同时兼具一定的抗菌和促进伤口愈合的作用,具有良好的应用前景。 展开更多

关键词 壳聚糖 聚乙二醇 冻干富血小板血浆 止血 抗菌

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复合可见光照射下抗菌剂棉布的抗菌效果研究 被引量：3

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作者 钱婷婷 耿立群 +3 位作者 周园 唐钰珂 李争光 谭天伟 《环境科学与技术》 CAS CSCD 北大核心 2021年第S01期131-136,共6页

文章用超声本体共聚法以壳聚糖和铁掺杂的纳米TiO_(2)为主要材料,将其与棉纤维进行化学交联复合,制备了在可见光下可催化抗菌的抗菌棉布。电子显微镜结果显示,TiO_(2)和壳聚糖与棉纤维交联结合,且分布均一。紫外可见光谱显示,抗菌棉纤... 文章用超声本体共聚法以壳聚糖和铁掺杂的纳米TiO_(2)为主要材料,将其与棉纤维进行化学交联复合,制备了在可见光下可催化抗菌的抗菌棉布。电子显微镜结果显示,TiO_(2)和壳聚糖与棉纤维交联结合,且分布均一。紫外可见光谱显示,抗菌棉纤维的光谱吸收红移至可见光区域,在可见光下就有抗菌作用。抗菌效果不存在明显可观察的pH效应。抗菌测试显示,棉布对各种菌的抗菌效果优秀,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和黑曲霉的4~24 h抗菌率可达99.99%,有广泛在物品、环境和人体表面的抗菌处理方面应用的前景。 展开更多

关键词 壳聚糖 纳米TiO_(2) 抗菌棉布

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胰岛素样生长因子1(IGF-1)通过激活PI3K/AKT信号通路增强小鼠BV-2小胶质细胞的吞噬功能 被引量：11

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作者 翟丽倩 陈晓芬 +5 位作者 卢思彤 杨丹 李皖晴 李飞迪 吴凤娇 孙美群 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期199-204,共6页

目的探讨胰岛素样生长因子1(IGF-1)对小鼠小胶质细胞吞噬功能的影响。方法脂多糖(LPS)腹腔注射建立小鼠急性中枢神经系统炎症模型,Western blot法检测脑组织中IGF-1和IGF-1受体(IGF-1R)的蛋白表达。使用LPS刺激BV-2小胶质细胞后,Western... 目的探讨胰岛素样生长因子1(IGF-1)对小鼠小胶质细胞吞噬功能的影响。方法脂多糖(LPS)腹腔注射建立小鼠急性中枢神经系统炎症模型,Western blot法检测脑组织中IGF-1和IGF-1受体(IGF-1R)的蛋白表达。使用LPS刺激BV-2小胶质细胞后,Western blot法检测IGF-1R的蛋白表达。体外培养BV-2细胞,在培养基中加入或未加入磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号阻断剂渥曼青霉素(wortmannin)的情况下,再加入IGF-1刺激24 h,加入荧光微球共同孵育2 h,流式细胞术检测BV-2细胞吞噬荧光微球的情况。IGF-1刺激BV-2细胞后,Western blot法检测细胞中AKT和磷酸化的AKT(p-AKT)蛋白表达。结果腹腔注射LPS后,小鼠脑组织中IGF-1和IGF-1R的表达均显著升高,同时LPS刺激也上调BV-2细胞IGF-1R的表达。随着IGF-1浓度的增加,BV-2细胞吞噬荧光微球的能力先逐渐增强后开始下降,在50 ng/mL的IGF-1刺激下BV-2细胞吞噬荧光微球的能力达到峰值。IGF-1刺激BV-2细胞后,细胞的AKT磷酸化水平逐渐上升。使用wortmannin阻断PI3K/AKT信号后,IGF-1促进BV-2细胞吞噬荧光微球的能力显著下降。结论IGF-1通过激活PI3K/AKT信号途径促进BV-2细胞的吞噬作用。 展开更多

关键词 胰岛素样生长因子1(IGF-1) BV-2小胶质细胞 吞噬功能 炎症

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SPOP上调c-Jun蛋白表达并促进肾癌细胞的增殖和侵袭 被引量：6

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作者 吴林慧 余珂 +3 位作者 崔悦 朱雪莲 杨正 马佳 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期447-452,共6页

目的探讨SPOP对肾癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭等的影响及潜在的作用机制。方法体外培养肾癌细胞株786-O、A704、Caki-2,对照组(EV)和过表达组(SPOP)质粒采用脂质体法转染至上述肾癌细胞株;分别利用克隆形成实验及MTT法检测SPOP基因对... 目的探讨SPOP对肾癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭等的影响及潜在的作用机制。方法体外培养肾癌细胞株786-O、A704、Caki-2,对照组(EV)和过表达组(SPOP)质粒采用脂质体法转染至上述肾癌细胞株;分别利用克隆形成实验及MTT法检测SPOP基因对肾癌细胞株增殖的影响;采用TUNEL法检测SPOP基因对肾癌细胞株凋亡的影响;利用创伤愈合实验和Transwell实验检测SPOP基因对肾癌细胞株迁移和侵袭能力的作用;运用Real-time PCR和Western blotting技术检测转染后肾癌细胞株SPOP和c-Jun的mRNA水平以及相关蛋白的表达情况。结果在786-O、A704、Caki-2细胞上调SPOP的表达能促进肾癌细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05);与对照组相比,SPOP组的肾癌细胞株786-O、Caki-2的凋亡率较对照组相对减少(P<0.05);Real-time PCR结果显示,c-Jun mRNA的表达水平未发生改变,但Western blotting结果显示,SPOP组肾癌细胞株786-O、Caki-2的SPOP蛋白表达明显高于对照组(P<0.05),c-Jun蛋白的表达也明显高于对照组(P<0.05)。结论SPOP能促进肾癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,抑制肾癌细胞的凋亡,潜在的机制可能为促进c-Jun的表达。 展开更多

关键词 SPOP C-JUN 肾癌 增殖 迁移 侵袭 凋亡

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血源性单核巨噬细胞对小鼠脊髓损伤局部巨噬细胞分化的影响

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作者 张楠 李璟璐 +5 位作者 王颖 宫雅娟 许文浩 胡建国 吕合作 马萍 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 2022年第1期79-84,共6页

目的:探讨血源性单核巨噬细胞对小鼠脊髓损伤(SCI)局部巨噬细胞分化的影响。方法:将6~8周龄C57BL/6J雌鼠随机分为两组:SCI+PBS脂质体组(SCIP组)、SCI^(+)氯磷酸二钠脂质体(Chlodrolip)组(SCIL组)。两组小鼠分别注射相同剂量两种脂质体... 目的:探讨血源性单核巨噬细胞对小鼠脊髓损伤(SCI)局部巨噬细胞分化的影响。方法:将6~8周龄C57BL/6J雌鼠随机分为两组:SCI+PBS脂质体组(SCIP组)、SCI^(+)氯磷酸二钠脂质体(Chlodrolip)组(SCIL组)。两组小鼠分别注射相同剂量两种脂质体。采用流式细胞术(FCM)检测手术前外周血中单核细胞比例,确定单核细胞清除效率。在小鼠T_(10)椎骨处制备SCI重物坠落模型。实验过程中每天对小鼠称重,SCI术后7 d称取两组小鼠脾脏重量;提取损伤脊髓附近浸润的巨噬细胞和小胶质细胞。分别以CD11b、CD68、CCR7的不同荧光抗体组合作为巨噬细胞和小胶质细胞不同状态和亚型的标志。CD68^(+)CD11b^(+)为活化的巨噬细胞和小胶质细胞,CD11b^(+)CD68^(+)CCR7^(+)细胞为M1型巨噬细胞。用FCM检测两组小鼠脊髓损伤部位不同细胞所占比例。结果:SCIP组CD68^(+)细胞占CD11b^(+)细胞百分比例为(48.12±2.70)%,显著低于SCIL组(61.03±3.00)%(P<0.05);CCR7^(+)CD68^(+)细胞占CD11b^(+)细胞百分比例为(43.15±1.79)%,显著低于SCIL组(59.13±1.31)%(P<0.01);SCIL组小鼠体重量和脾脏重量较SCIP组明显下降差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:清除血源性单核巨噬细胞可导致SCI后小鼠体重量及脾脏重量减低,并使脊髓损伤局部巨噬细胞和小胶质细胞向促炎性M1方向极化。 展开更多

关键词 血源性单核巨噬细胞 脊髓损伤 流式细胞术 巨噬细胞亚群 小鼠

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