日本血吸虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂干预脂多糖诱导的小鼠脓毒症 被引量：6

1

作者 万勇坤 李徽徽 +14 位作者 左琳 王小莉 王黎源 贺文欣 姜辉 王守祥 盛洁 张敏 钱海春 杨芳芳 谢红 高世芳 方强 杨小迪 刘牧林 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期625-629,共5页

目的探讨日本血吸虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂(Sj Cystatin)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠脓毒症的干预效果。方法 54只BALB/c小鼠适应性饲养1周后,随机分为正常对照组(PBS组,A组)、脓毒症造模组(PBS+LPS组,B组)、蛋白干预组(PBS+LPS+Sj Cystatin... 目的探讨日本血吸虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂(Sj Cystatin)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠脓毒症的干预效果。方法 54只BALB/c小鼠适应性饲养1周后,随机分为正常对照组(PBS组,A组)、脓毒症造模组(PBS+LPS组,B组)、蛋白干预组(PBS+LPS+Sj Cystatin组,C组)。A组腹腔注射PBS(100μL),B组、C组腹腔注射含LPS(10 mg/kg)的PBS(100μL),其中C组小鼠于注射LPS后30 min腹腔注射含25μg Sj Cystatin蛋白的PBS(100μL)。每组随机抽取10只,造模后24 h取小鼠血清及肝、肺、肾组织,酶联免疫吸附试验(ELISA)验检血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)水平,全自动生化分析仪检测ALT、AST、BUN和Cr水平;肝、肺和肾组织HE染色观察其病理损伤;每组余8只小鼠,造模后记录小鼠72 h生存率的差别且观察小鼠状态的改变。结果 3组小鼠的72 h生存率具有统计学差异(P<0.05),与A组(100%)相比,B组(0%)72 h生存率降低(P<0.05),经过Sj Cystatin蛋白治疗后,C组生存率较B组增高(36%)。与A组相比,B组肝、肺、肾组织切片病理损伤加重,血清中ALT、AST、BUN、Cr、IL-6、TNF-α水平明显升高(P<0.05);与B组相比,C组调节因子IL-10水平明显升高,肝、肾、肺组织损伤明显减轻,且血清中上述肝肾功能检测指标及促炎因子水平明显降低(P<0.05)。结论 Sj Cystatin对LPS诱导的脓毒症有显著的治疗作用。 展开更多

关键词 脓毒症 日本血吸虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂 脂多糖 促炎因子 免疫调节因子

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骨髓间充质干细胞向造血细胞分化的体外诱导体系构建及优化 被引量：6

2

作者 邹维艳 赵洁 +4 位作者 李仪 胡腾飞 王莹 储晓曦 王俊斌 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期145-151,共7页

目的构建模拟胚胎期不同造血部位的造血微环境体系用于体外诱导骨髓间充质干细胞(BMSC)向造血细胞分化,并初步评价分化效率。方法采用体视显微镜及HE染色观察E11.5小鼠胚胎卵黄囊(YS)、胎盘(PL)和胎肝(FL)的解剖部位和形态;选取E7.5~E9.... 目的构建模拟胚胎期不同造血部位的造血微环境体系用于体外诱导骨髓间充质干细胞(BMSC)向造血细胞分化,并初步评价分化效率。方法采用体视显微镜及HE染色观察E11.5小鼠胚胎卵黄囊(YS)、胎盘(PL)和胎肝(FL)的解剖部位和形态;选取E7.5~E9.5、E10.5~E12.5及E13.5~E15.5胚胎YS、PL和FL组织进行基质细胞培养并制备条件培养液,即为卵黄囊基质细胞条件培养液(YSSC-CM)、胎盘基质细胞条件培养液(PLSC-CM)和胎肝基质细胞条件培养液(FLSC-CM),与体外扩增的SD大鼠BMSC共培养。实验分为对照组、白细胞介素6(IL-6)联合干细胞因子(SCF)处理组、YSSC-CM处理组、PLSC-CM处理组和FLSC-CM处理组。共培养7~9 d,收集培养液中漂浮细胞。吉姆萨染色检测细胞形态,直接免疫荧光术检测细胞表面特异性分子CD34和CD45的表达,集落形成实验检测粒-巨噬细胞集落形成单位(GM-CFU)鉴定分化细胞。结果体视显微镜下观察鼠胚PL和FL与人胚的位置相同,而YS是包裹在胚体及羊膜的外侧,HE染色显示PL血管迷路、FL血窦和YS血岛富含血细胞;倒置相差显微镜及细胞计数结果显示,与空白对照组及IL-6联合SCF处理组相比,YSSC-CM组、PLSCCM组和FLSC-CM组培养液中的漂浮细胞明显增多,FLSC-CM组最多;YSSC-CM组、PLSC-CM组和FLSC-CM组漂浮细胞,经吉姆萨染色后形态类似于淋巴或单核样细胞,表达造血细胞特异性表面标志CD34和CD45,形成造血集落数最多是FLSC-CM组,其次是PLSC-CM组,最少为YSSC-CM组。而对照组和IL-6联合SCF处理组无变化。结论依循阶段性和时序性,获取YS、PL和FL并制备了YSSC-CM、PLSC-CM和FLSC-CM,可诱导SD大鼠BMSC向造血细胞分化,FLSC-CM处理的细胞分化效率较优。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞(BMSC) 造血细胞 卵黄囊 胎盘 胎肝

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AcCystatin减轻卵清蛋白诱导的小鼠变应性鼻炎病变和促炎细胞因子分泌 被引量：6

3

作者 王黎源 袁圆 +12 位作者 王伟 李徽徽 吴玥 李坤龙 李丁茹 徐宇 梁金宝 郑欣 王娅 王馨 徐伟 孙永诚 杨小迪 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期391-395,共5页

目的观察广州管圆线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂(AcCystatin)对卵清蛋白(OVA)诱导的变应性鼻炎小鼠的影响。方法将24只8周龄雌性BALB/c小鼠随机分为空白对照组、OVA变应性鼻炎致敏组和AcCystatin治疗组。OVA组以OVA为变应原,氢氧化铝为佐剂... 目的观察广州管圆线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂(AcCystatin)对卵清蛋白(OVA)诱导的变应性鼻炎小鼠的影响。方法将24只8周龄雌性BALB/c小鼠随机分为空白对照组、OVA变应性鼻炎致敏组和AcCystatin治疗组。OVA组以OVA为变应原,氢氧化铝为佐剂进行腹腔注射,第15天后OVA滴鼻建立小鼠AR模型;AcCystatin组在致敏时腹腔注射30μg AcCystatin,并在第15天后将含有OVA的混悬液中溶入AcCystatin滴鼻治疗;对照组均以PBS替代OVA。末次滴鼻激发后,按照生物学评分标准对3组小鼠的症状进行评分,HE染色观察小鼠鼻黏膜的病变情况,ELISA检测小鼠血清OVA-IgE、白细胞介素4(IL-4)、IL-5、IL-6、IL-10和γ干扰素(IFN-γ)的分泌水平。结果与对照组相比,OVA组小鼠生物学评分明显增加,AcCystatin组小鼠生物学评分较OVA组明显降低。镜下观察OVA组小鼠鼻黏膜纤毛明显脱落,杯状细胞增生,基底膜增厚、组织水肿且黏膜下小血管扩张,而AcCystatin组小鼠鼻黏膜病变明显减轻。同时OVA组血清中OVA-IgE、IL-4、IL-5、IL-6水平较对照组明显升高,IL-10水平降低;与OVA组相比,AcCystatin组OVA-IgE、IL-4、IL-5、IL-6和IL-10水平显著降低。结论AcCystatin减轻OVA诱导的小鼠变应性鼻炎病变和炎性细胞因子分泌。 展开更多

关键词 变应性鼻炎 广州管圆线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂(AcCystatin) 卵清蛋白 细胞因子

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基于多特征融合的线性内核SVM法挖掘生物实体关联 被引量：1

4

作者 魏星 胡德华 +3 位作者 易敏寒 常雪莲 杨小迪 朱文婕 《中国生物医学工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期451-460,共10页

提高挖掘生物医学文献中的实体关联算法的性能,对开拓研究新思路有重要启示作用。提出一种改进特征的新线性内核SVM关联挖掘方法,以糖尿病相关文献摘要为研究内容,总结归纳出5种实体关联挖掘特征:实体特征、实体对特征、依赖图特征、解... 提高挖掘生物医学文献中的实体关联算法的性能,对开拓研究新思路有重要启示作用。提出一种改进特征的新线性内核SVM关联挖掘方法,以糖尿病相关文献摘要为研究内容,总结归纳出5种实体关联挖掘特征:实体特征、实体对特征、依赖图特征、解析树特征和名词短语约束特征,其中实体对和名词短语约束是所提出的新特征,并使用Huber损失函数作为SVM分类器的线性内核进行计算,挖掘预测疾病、基因和药物实体之间的关联。计算得到10种糖尿病相关病症和23种基因有173种关联,13种糖尿病相关病症和26种药物存在79种关联,18种基因与17种药物组成了159种关联,构建出疾病-基因、疾病-药物、基因-药物和8种糖尿病相关疾病基因药物的关联网络,共计619种实体关联,同时预测出27种新实体关联对,最后使用ROC曲线验证3种关联(0.804、0.847和0.742)。结果表明,所提出算法与Co Pub(0.710)、Pub Gene(0.609)、FBK-irst(0.547,0.800)和WBI(0.510,0.759)所用算法相比,最高精确度提升超过约5%(0.847与0.800),最低提升超过约20%(0.742与0.510),性能更优,为下一步在生物医学大数据中的应用打下良好基础。 展开更多

关键词 特征 支持向量机(SVM) 关联挖掘 糖尿病 ROC曲线

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体外培养SD大鼠与BALB/c小鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性比较 被引量：4

5

作者 邹维艳 赵洁 +3 位作者 李仪 胡腾飞 王莹 王俊斌 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期1099-1104,共6页

目的观察SD大鼠和BALB/c小鼠骨髓间充质干细胞(BMMSC)体外培养情况及生物学特性,评估两种BMMSC分离、纯化及扩增的能力。方法全骨髓法联合差速贴壁培养法分离、纯化及扩增SD大鼠和BALB/c小鼠BMMSC;倒置相差显微镜观察BMMSC原代及第3代... 目的观察SD大鼠和BALB/c小鼠骨髓间充质干细胞(BMMSC)体外培养情况及生物学特性,评估两种BMMSC分离、纯化及扩增的能力。方法全骨髓法联合差速贴壁培养法分离、纯化及扩增SD大鼠和BALB/c小鼠BMMSC;倒置相差显微镜观察BMMSC原代及第3代细胞形态及生长过程,HE染色观察第3代细胞形态,细胞计数法绘制第3代细胞生长曲线观察细胞增殖情况;流式细胞术检测第3代细胞表面CD29、CD44、CD45、CD34;第3代BMMSC经成骨诱导液诱导3周后,用茜素红染色检测BMMSC的分化能力。结果倒置相差显微镜观察SD大鼠骨髓细胞原代培养的细胞集落形成时间早于BALB/c小鼠,原代及第3代SD-BMMSC集落细胞呈纺锤形,大小较一致,集落形成快且较多,呈鱼群状,而BALB/c-BMMSC较杂,有圆形、三角形或梭形,细胞较小,集落少,呈霜花状; HE染色显示SD-BMMSC集落较BALB/c-BMMSC更为典型,呈鱼群状,细胞形态较为均一;两种BMMSC第3代细胞生长曲线均近似"S"型,但SD-BMMSC增殖能力较好;两种第3代BMMSC经成骨诱导培养3周后,经茜素红染色均可见有矿化结节,但SD-BMMSC形成的矿化结节较明显;第3代两种BMMSC表面标志CD29、CD44均高表达,CD34均低表达,而CD45在SD-BMMSC低表达,在BALB/c-BMMSC高表达。结论全骨髓法联合差速贴壁培养法可成功分离、纯化及扩增SD大鼠和BALB/c小鼠BMMSC,而SD-BMMSC体外分离培养、纯化及扩增更易更快,且获得的BMMSC纯度高。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 SD大鼠 BALB/C小鼠 全骨髓贴壁法 生物学特性

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紫菀酮对小鼠脊髓损伤后神经元凋亡的影响 被引量：3

6

作者 许轶博 孙洋 +4 位作者 肖林雨 朱国庆 宋雪 胡建国 齐琦 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期703-712,共10页

目的 探讨紫菀酮(SHI)对脊髓损伤(SCI)小鼠运动功能的影响及可能的分子机制。方法 采用C57BL/6小鼠构建SCI模型,分为模型组(SCI组)和SHI药物治疗组(SCI+SHI组),假手术小鼠为对照组。采用Basso小鼠量表(BMS)评分评估SCI小鼠运动功能恢复... 目的 探讨紫菀酮(SHI)对脊髓损伤(SCI)小鼠运动功能的影响及可能的分子机制。方法 采用C57BL/6小鼠构建SCI模型,分为模型组(SCI组)和SHI药物治疗组(SCI+SHI组),假手术小鼠为对照组。采用Basso小鼠量表(BMS)评分评估SCI小鼠运动功能恢复情况,采用HE染色和Nissl染色观察SCI小鼠脊髓组织纤维化和神经元的形态学变化,采用免疫荧光染色分析脊髓组织中神经元凋亡情况。体外培养小鼠海马神经元HT22细胞,分为肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导组和SHI药物治疗组,采用Western blot检测各组细胞凋亡相关蛋白的表达。利用网络药理学、基因本体和京都基因与基因组百科全书富集分析预测SHI促进SCI功能恢复的可能分子靶点和信号通路,并通过体内外实验对其分子机制进行验证。结果 与SCI组比较,SCI+SHI组小鼠BMS评分在第21、28、35、42天显著升高(P=0.003、P=0.004、P=0.023、P=0.007),脊髓组织纤维化面积显著降低(P=0.021),神经元存活数量显著增加(P=0.001),活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved-Caspase3)表达显著降低(P=0.017)。与TNF-α组比较,SHI组cleaved-Caspase3、Bax蛋白表达水平显著降低(P=0.010、P=0.001),而Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P=0.001)。生物信息学分析结果显示SHI改善SCI小鼠运动功能可能与磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路相关。体内和体外实验检测结果显示,SHI可抑制SCI小鼠或TNF-α诱导的HT22细胞中PI3K和Akt的磷酸化水平(P均<0.05),而胰岛素样生长因子-1干预后HT22细胞凋亡数量显著高于SHI组(P=0.003)。结论 SHI可能通过PI3K/Akt信号通路抑制神经元凋亡,从而促进SCI小鼠运动功能恢复。 展开更多

关键词 脊髓损伤 紫菀酮 神经元 凋亡 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B

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咪喹莫特诱导的银屑病小鼠脾脏调节性T细胞数量增加且血清相关细胞因子水平升高 被引量：2

7

作者 周艳梅 李徽徽 +2 位作者 邹维艳 齐琦 江从军 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期893-897,共5页

目的探讨调节性T细胞(Treg)及其细胞因子在咪喹莫特(imiquimod)诱导的银屑病小鼠中的作用。方法雌性BALB/c小鼠分为对照组和咪喹莫特诱导的银屑病模型组,每组10只。咪喹莫特乳膏涂抹小鼠背部皮肤建立银屑病模型,HE染色观察小鼠皮肤组织... 目的探讨调节性T细胞(Treg)及其细胞因子在咪喹莫特(imiquimod)诱导的银屑病小鼠中的作用。方法雌性BALB/c小鼠分为对照组和咪喹莫特诱导的银屑病模型组,每组10只。咪喹莫特乳膏涂抹小鼠背部皮肤建立银屑病模型,HE染色观察小鼠皮肤组织病理变化。采用流式细胞仪检测银屑病小鼠脾中Treg的数量,采用ELISA检测小鼠血清白细胞介素10(IL-10)、转化生长因子β1(TGF-β1)的含量。结果银屑病模型建立成功,与对照组相比,银屑病小鼠脾脏Treg百分率明显升高,血清IL-10和TGF-β1水平升高。结论银屑病小鼠Treg数量增加且细胞因子的水平升高。 展开更多

关键词 银屑病 咪喹莫特(imiquimod) 调节性T细胞(Treg) 白细胞介素10(IL-10) 转化生长因子β1(TGF-β1) BALB/c小鼠

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Y-27632通过抑制自噬减轻H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤 被引量：2

8

作者 于影 闵凤 +3 位作者 叶红伟 方婷婷 贾贤杰 周成超 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期1511-1515,共5页

目的探讨Rho激酶抑制剂Y-27632预处理对H9c2心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用及其机制。方法将培养的心肌细胞分成正常组、H/R组、Y-27632组和Y-27632联合3-MA组(Y-27632/3-MA组)。正常组在950 mL/L空气、50 mL/L CO_237℃培养箱... 目的探讨Rho激酶抑制剂Y-27632预处理对H9c2心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用及其机制。方法将培养的心肌细胞分成正常组、H/R组、Y-27632组和Y-27632联合3-MA组(Y-27632/3-MA组)。正常组在950 mL/L空气、50 mL/L CO_237℃培养箱中孵育6 h;H/R组先用940 mL/L N_2、10 mL/LO_2、50 mL/L CO_2的混合气培养3 h,再转入950 mL/L空气、50 mL/L CO_2培养箱孵育3 h;Y-27632组先给予10μmol/L Rho激酶抑制剂Y-27632孵育1 h,之后行H/R处理。Y-27632/3-MA组先给予10μmol/L Y-27632和5 mmol/L自噬抑制剂3-MA孵育1 h,再H/R处理。采用CCK-8比色法测定各组细胞的存活率;试剂盒测定乳酸脱氢酶(LDH)活性;流式细胞术检测心肌细胞凋亡率;Western blot法检测磷酸化肌球蛋白轻链(p-MLC)及自噬基因beclin 1蛋白水平。结果 Y-27632预处理明显改善H/R介导的H9c2心肌细胞存活率,降低LDH活性,减少细胞凋亡,降低p-MLC蛋白水平,增加beclin 1蛋白表达;而Y-27632/3-MA组抵消了Y-27632对H9c2细胞的抗凋亡作用,并增高p-MLC和降低beclin 1蛋白表达。结论 Y-27632预处理通过抑制Rho激酶诱导自噬的发生减轻心肌细胞H/R损伤。 展开更多

关键词 RHO激酶 缺氧/复氧 H9C2心肌细胞 自噬

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创伤后应激障碍诱导小鼠杏仁核亚区神经元网络的可塑性变化 被引量：1

9

作者 刘冬播 石彦 +2 位作者 陈恒涛 张宇宏 周尚琪 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 2022年第6期641-649,共9页

目的:研究创伤后应激障碍(PTSD)小鼠基底外侧杏仁核(BLA)和中央杏仁核(CeA)区神经元动作电位编码能力的改变,以探讨杏仁核亚区神经元网络的可塑性变化与记忆损害之间的关系。方法:将8周龄C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组和PTSD组,通过对... 目的:研究创伤后应激障碍(PTSD)小鼠基底外侧杏仁核(BLA)和中央杏仁核(CeA)区神经元动作电位编码能力的改变,以探讨杏仁核亚区神经元网络的可塑性变化与记忆损害之间的关系。方法:将8周龄C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组和PTSD组,通过对小鼠施加一系列强度的足底电击(FS)建立起PTSD模型,利用Morris水迷宫(MWM)评估小鼠空间探查能力的变化,采用膜片钳技术检测BLA和CeA区谷氨酸能神经元和GABA能神经元动作电位发放模式的改变。结果:施加FS后小鼠僵住百分比和僵住次数显著提高,运动平均速度显著降低(P<0.05);与对照组相比,PTSD组小鼠在MWM中的获得潜伏期显著延长(P<0.01),平台象限内游泳探查时间显著减少(P<0.05),对侧象限内游泳探查时间则显著增加(P<0.01),BLA区谷氨酸能神经元和CeA区GABA能神经元绝对不应期、能障和动作电位间距显著提高(P<0.05),BLA区GABA能神经元和CeA区谷氨酸能神经元绝对不应期、能障和动作电位间距显著降低(P<0.05)。结论:PTSD降低了小鼠空间探查和记忆能力,BLA区整体兴奋性降低、功能下调,CeA区整体兴奋性升高、功能上调。 展开更多

关键词 创伤后应激障碍 杏仁核 MORRIS水迷宫 全细胞记录 小鼠

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胰岛素样生长因子1(IGF-1)通过激活PI3K/AKT信号通路增强小鼠BV-2小胶质细胞的吞噬功能 被引量：11

10

作者 翟丽倩 陈晓芬 +5 位作者 卢思彤 杨丹 李皖晴 李飞迪 吴凤娇 孙美群 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期199-204,共6页

目的探讨胰岛素样生长因子1(IGF-1)对小鼠小胶质细胞吞噬功能的影响。方法脂多糖(LPS)腹腔注射建立小鼠急性中枢神经系统炎症模型,Western blot法检测脑组织中IGF-1和IGF-1受体(IGF-1R)的蛋白表达。使用LPS刺激BV-2小胶质细胞后,Western... 目的探讨胰岛素样生长因子1(IGF-1)对小鼠小胶质细胞吞噬功能的影响。方法脂多糖(LPS)腹腔注射建立小鼠急性中枢神经系统炎症模型,Western blot法检测脑组织中IGF-1和IGF-1受体(IGF-1R)的蛋白表达。使用LPS刺激BV-2小胶质细胞后,Western blot法检测IGF-1R的蛋白表达。体外培养BV-2细胞,在培养基中加入或未加入磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号阻断剂渥曼青霉素(wortmannin)的情况下,再加入IGF-1刺激24 h,加入荧光微球共同孵育2 h,流式细胞术检测BV-2细胞吞噬荧光微球的情况。IGF-1刺激BV-2细胞后,Western blot法检测细胞中AKT和磷酸化的AKT(p-AKT)蛋白表达。结果腹腔注射LPS后,小鼠脑组织中IGF-1和IGF-1R的表达均显著升高,同时LPS刺激也上调BV-2细胞IGF-1R的表达。随着IGF-1浓度的增加,BV-2细胞吞噬荧光微球的能力先逐渐增强后开始下降,在50 ng/mL的IGF-1刺激下BV-2细胞吞噬荧光微球的能力达到峰值。IGF-1刺激BV-2细胞后,细胞的AKT磷酸化水平逐渐上升。使用wortmannin阻断PI3K/AKT信号后,IGF-1促进BV-2细胞吞噬荧光微球的能力显著下降。结论IGF-1通过激活PI3K/AKT信号途径促进BV-2细胞的吞噬作用。 展开更多

关键词 胰岛素样生长因子1(IGF-1) BV-2小胶质细胞 吞噬功能 炎症

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3-溴丙酮酸通过糖酵解抑制人肺腺癌H1975细胞增殖及诱导凋亡研究 被引量：5

11

作者 樊红莲 闵静婷 +1 位作者 吴胜男 李正红 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期1520-1526,共7页

目的探究3-溴丙酮酸(3-bromopyruvate,3-BP)对肺腺癌H1975细胞抑制增殖和诱导凋亡的影响。方法采用3-BP(0、10、20、40、80、160μmol·L^-1)处理H1975细胞,使用MTT检测3-BP对肺腺癌H1975细胞增殖的影响。采用集落克隆实验观察低浓... 目的探究3-溴丙酮酸(3-bromopyruvate,3-BP)对肺腺癌H1975细胞抑制增殖和诱导凋亡的影响。方法采用3-BP(0、10、20、40、80、160μmol·L^-1)处理H1975细胞,使用MTT检测3-BP对肺腺癌H1975细胞增殖的影响。采用集落克隆实验观察低浓度的3-BP(0、5、10、20μmol·L-1)对H1975细胞的增殖抑制作用。划痕和Transwell小室实验检测不同浓度3-BP(0、25、50、75μmol·L^-1)3-BP对H1975细胞迁移能力的影响。Annexin V-FITC/PI双染法检测3-BP对肺腺癌H1975细胞凋亡的影响。试剂盒检测3-BP对H1975细胞内活性氧及ATP水平的改变。Western blot检测3-BP对H1975细胞糖酵解及凋亡相关蛋白的影响。结果3-BP对肺腺癌H1975细胞具有明显的增殖抑制作用并明显降低了H1975细胞的迁移能力。3-BP可以明显增加肺腺癌H1975细胞的凋亡并在此过程中伴随着ATP水平的下降和活性氧水平的增高。Western blot检测表明3-BP上调了促凋亡蛋白Bax的表达,抑制了抑凋亡蛋白Bcl-2、糖酵解相关蛋白MCT1、HK-Ⅱ的表达。结论3-BP可以通过抑制糖酵解抑制人肺腺癌H1975细胞增殖并诱导肺腺癌细胞发生凋亡。 展开更多

关键词 肺腺癌 3-溴丙酮酸 糖酵解 细胞凋亡 细胞增殖 能量代谢

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敲低锌指E盒增强子结合蛋白1(ZEB1)抑制胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移 被引量：4

12

作者 陈登宇 褚一凡 +3 位作者 郑庆委 徐志本 周平 李胜 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期1073-1078,共6页

目的通过RNA靶向干扰降低人胃癌BGC823细胞中锌指E盒增强子结合蛋白1(ZEB1)基因表达,观察ZEB1低表达对胃癌BGC823细胞的侵袭、迁移及增殖能力的影响,并检测相关基因lncRNA HOTAIR、上皮钙黏素(E-cadherin)表达情况。方法用载体构建针对... 目的通过RNA靶向干扰降低人胃癌BGC823细胞中锌指E盒增强子结合蛋白1(ZEB1)基因表达,观察ZEB1低表达对胃癌BGC823细胞的侵袭、迁移及增殖能力的影响,并检测相关基因lncRNA HOTAIR、上皮钙黏素(E-cadherin)表达情况。方法用载体构建针对人ZEB1基因表达的干扰质粒sh ZEB1,脂质体转染胃癌BGC823细胞后,经G418及有限稀释法筛选稳定转染细胞株。通过实时定量PCR和Western blot法检测BGC823细胞ZEB1 mRNA和蛋白水平,MTT法检测其增殖能力,TranswellTM小室侵袭试验检测转染细胞侵袭能力、划痕试验检测细胞迁移能力,实时定量PCR检测lncRNA HOTAIR、E-cadherinmRNA水平。结果成功构建干扰质粒sh ZEB1,敲低BGC823细胞ZEB1水平后,BGC823细胞的增殖、侵袭和迁移能力降低、lncRNA HOTAIR水平降低、而E-cadherin表达增高。结论靶向降低BGC823胃癌细胞ZEB1的水平,可降低lncRNA HOTAIR水平及细胞增殖、侵袭、迁移力。 展开更多

关键词 胃癌 锌指E盒增强子结合蛋白1(ZEB1) RNA干扰 长链非编码RNA HOX转录本反义RNA(HOTAIR)

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激动线粒体乙醛脱氢酶2对高糖诱导的大鼠心肌细胞MMP-14及TIMP-4的影响 被引量：2

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作者 方婷婷 曹瑞平 +4 位作者 王文连 叶红伟 吴金欣 谷小雨 高琴 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期999-1004,共6页

目的探讨基质金属蛋白酶14(MMP-14)、基质金属蛋白酶组织抑制因子4(TIMP-4)是否参与线粒体乙醛脱氢酶2(ALDH2)抗高糖诱导的原代大鼠心肌细胞损伤。方法不同浓度葡萄糖干预原代大鼠心肌细胞,MTT法检测不同时间点细胞活力,确定高糖诱导的... 目的探讨基质金属蛋白酶14(MMP-14)、基质金属蛋白酶组织抑制因子4(TIMP-4)是否参与线粒体乙醛脱氢酶2(ALDH2)抗高糖诱导的原代大鼠心肌细胞损伤。方法不同浓度葡萄糖干预原代大鼠心肌细胞,MTT法检测不同时间点细胞活力,确定高糖诱导的心肌细胞损伤模型。实验分为正常对照组(NG,5.5 mmol·L^(-1))、NG+ALDH2激动剂Alda-1组、高糖组(HG,30 mmol·L^(-1)),HG+Alda-1组。MTT法和DHE染色分别检测细胞活力及氧化应激水平,Western blot检测ALDH2、MMP-14、TIMP-4蛋白表达。结果根据细胞活力检测确定30 mmol·L^(-1)葡萄糖干预48 h为损伤模型。与NG组比较,HG组细胞活力、ALDH2、MMP-14蛋白表达、MMP-14/TIMP-4比值均降低,氧化应激、TIMP-4蛋白水平升高;与HG组比较,Alda-1干预后细胞活力、ALDH2及MMP-14蛋白表达、MMP-14/TIMP-4比值升高,氧化应激及TIMP-4蛋白表达降低。结论激动ALDH2可改善高糖引起的心肌细胞损伤,可能与抑制氧化应激、促进MMP-14蛋白表达、抑制TIMP-4蛋白表达有关。 展开更多

关键词 原代心肌细胞 高糖 氧化应激 线粒体乙醛脱氢酶2 基质金属蛋白酶14 基质金属蛋白酶组织抑制因子4

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拮抗P2X7受体在保护大鼠脑缺血/再灌注损伤中的作用 被引量：2

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作者 陈银玲 唐媛媛 +3 位作者 童旭辉 巫剑峰 李言 董淑英 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1169-1176,共8页

目的:探讨拮抗P2X7受体(P2X7 receptor,P2X7R)在保护大鼠脑缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤中的作用及其机制。方法:采用改良线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型;随后对其进行缺血2 ... 目的:探讨拮抗P2X7受体(P2X7 receptor,P2X7R)在保护大鼠脑缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤中的作用及其机制。方法:采用改良线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型;随后对其进行缺血2 h再灌注24 h处理,完成大鼠大脑局灶性脑I/R损伤模型的制备。采用Longa五分法对大鼠进行神经行为学评分;2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法检测大鼠大脑梗死体积的变化;Western印迹检测细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK),磷酸化细胞外信号调节激酶(phosphorylation extracellular signal-regulated kinase,p-ERK),缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43),Bax,Bcl-2及cleaved caspase-3蛋白表达的变化。结果:Longa五分法与TTC染色法结果显示:与假手术组比较,I/R组大鼠神经行为学评分(P<0.05)和大脑梗死体积(P<0.01)均明显增加。与I/R组大鼠相比,P2X7R拮抗剂明亮蓝(brilliant blue G,BBG)或ERK抑制剂PD98059均可明显降低大鼠神经行为学评分(P<0.01)和大鼠大脑梗死体积(P<0.05)。在阻断P2X7R的基础上使用PD98059抑制ERK活性后,大鼠神经行为学评分和大脑梗死体积进一步降低(P<0.05);Western印迹结果显示:BBG或PD98059均可降低p-ERK,Cx43,Bax/Bcl-2及cleaved caspase-3蛋白表达量(P<0.05)。在阻断P2X7R的基础上使用PD98059抑制ERK活性后,p-ERK,Cx43,Bax/Bcl-2及cleaved caspase-3等蛋白表达量进一步降低(P<0.05)。结论:拮抗P2X7R可减轻大鼠脑I/R损伤,其机制可能与抑制ERK激活,进而降低Cx43和cleaved caspase-3蛋白表达及Bax/Bcl-2比值有关。 展开更多

关键词 脑缺血/再灌注损伤 P2X7受体 细胞外信号调节激酶 缝隙连接蛋白43 凋亡

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氯喹通过上调miR129增强顺铂抗鼻咽癌作用 被引量：1

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作者 张浩轩 余芸 +7 位作者 蔡伟伟 卢华秋 何锐 张仁豪 裴飞隆 王小蝶 方旖旎 魏芳 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期361-369,共9页

目的探究miR129在氯喹增强顺铂促鼻咽癌细胞HNE1凋亡的作用及机制。方法实验分为空白对照组、氯喹组、顺铂组、氯喹+顺铂组。MTT法观察HNE1细胞存活率;结晶紫染色法观察HNE1细胞集落克隆形成;采用HNE1细胞接种BALB/C裸鼠建立移植瘤模型... 目的探究miR129在氯喹增强顺铂促鼻咽癌细胞HNE1凋亡的作用及机制。方法实验分为空白对照组、氯喹组、顺铂组、氯喹+顺铂组。MTT法观察HNE1细胞存活率;结晶紫染色法观察HNE1细胞集落克隆形成;采用HNE1细胞接种BALB/C裸鼠建立移植瘤模型,随机分为4组,6只/组,3 d给药1次,连续用药4周,观察各组肿瘤生长情况;q-PCR检测HNE1细胞中miR129表达;质粒转染下调HNE1细胞miR129的表达;Western blot法检测自噬相关蛋白p62、LC3B、Beclin1和耐药蛋白P-gp的表达;Annexin V/PI双染法,检测细胞凋亡率。结果体内外实验结果均显示氯喹+顺铂较顺铂单用能显著抑制肿瘤的生长(P<0.01)。体外实验表明,下调抑癌基因miR129能显著促进HNE1细胞自噬、上调P-gp的表达(P<0.01);氯喹显著抑制顺铂诱导的HNE1细胞自噬,上调HNE1细胞中miR129的表达(P<0.01);转染抑制miR129后,氯喹抑制顺铂诱导HNE1细胞自噬的作用被取消、氯喹和顺铂联合作用后HNE1细胞存活率显著增加(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.01)。结论氯喹通过上调miR129抑制HNE1细胞自噬和耐药,增强顺铂的促凋亡作用。 展开更多

关键词 氯喹 顺铂 miR129 自噬 凋亡

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肾透明细胞癌中拓扑异构酶Ⅱα与免疫浸润的关系及相关基因分析

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作者 马俊杰 安韶光 +3 位作者 梅静宇 张磊 张浩轩 陆进 《中国医科大学学报》 CAS 北大核心 2023年第10期871-878,共8页

目的探讨拓扑异构酶Ⅱα(TOP2A)与肾透明细胞癌(KIRC)免疫浸润的关系及相关基因分析。方法采用GEPIA和HPA数据库研究TOP2A基因在KIRC的表达和预后;通过单细胞测序数据和TIMER2.0数据库分析TOP2A基因与免疫浸润的关系;利用STRING、GEPIA2... 目的探讨拓扑异构酶Ⅱα(TOP2A)与肾透明细胞癌(KIRC)免疫浸润的关系及相关基因分析。方法采用GEPIA和HPA数据库研究TOP2A基因在KIRC的表达和预后;通过单细胞测序数据和TIMER2.0数据库分析TOP2A基因与免疫浸润的关系;利用STRING、GEPIA2和Sangerbox等数据库分析TOP2A的相关基因;通过Aclibi对TOP2A及其相关基因进行预后风险模型构建与验证。结果TOP2A mRNA和蛋白质在KIRC中表达上调,并与患者的临床分期及不良预后有关,且其在CD8+T细胞、调节T细胞和巨噬细胞等免疫细胞中均表达并与多种免疫细胞的浸润水平呈正相关;此外,TOP2A及其相关基因主要富集在细胞周期、不匹配修复和微管结合等途径;预后风险模型显示,TOP2A高风险组患者的生存率显著降低且与其不良预后密切相关。结论TOP2A与KIRC的发生密切相关,不利于患者生存预后,且与多种免疫细胞浸润有关,可作为KIRC诊断与预后的生物标志物。 展开更多

关键词 拓扑异构酶Ⅱα 肾透明细胞癌 免疫浸润 单细胞分析

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CRISPR/Cas应用于核酸特异性检测及其在检测SARS-Cov-2病毒中的应用

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作者 汪琼(综述) 刘飞 +2 位作者 柳传祺 王效静 陈付凉(审校) 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2023年第12期2139-2145,共7页

CRISPR/Cas系统是细菌体内的获得性免疫系统,用来对抗侵略细菌的外源DNA、质粒、病毒和噬菌体等,以此维持内环境的稳定。现该系统被广泛应用于基因编辑领域,主要用以完成真核、原核细胞型生物基因组的切割、修复和编辑。随着Cas蛋白家... CRISPR/Cas系统是细菌体内的获得性免疫系统,用来对抗侵略细菌的外源DNA、质粒、病毒和噬菌体等,以此维持内环境的稳定。现该系统被广泛应用于基因编辑领域,主要用以完成真核、原核细胞型生物基因组的切割、修复和编辑。随着Cas蛋白家族新成员衍生体被陆续发现,赋予CRISPR/Cas系统新的功能,例如其在分子诊断领域中的应用。本文就CRISPR/Cas系统在分子诊断领域内的研究进展进行综述,并详细分析其在新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染检测中的应用价值,为进一步完善我国核酸检测体系,提升新型冠状病毒肺炎疫情防控能力提供参考和依据。 展开更多

关键词 CRISPR/Cas系统 基因编辑 分子诊断 SARS-CoV-2 应用研究

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基于盐酸脱钙法的兔神经解剖标本制作方法

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作者 陈云龙 祖文轩 +2 位作者 霍威学 陶绍国 张浩轩 《畜牧兽医科技信息》 2023年第5期14-16,共3页

目的:探究家兔神经系统解剖标本的制作的解剖学方法以及不同浓度盐酸(5%、10%、15%、20%、25%)的骨骼脱钙效果差异。方法:选用15例体重以及月龄相仿的家兔,以3只为一组,共分成5组,以水合氯醛麻醉后空气栓塞处死。分别用37%甲醛溶液固定... 目的:探究家兔神经系统解剖标本的制作的解剖学方法以及不同浓度盐酸(5%、10%、15%、20%、25%)的骨骼脱钙效果差异。方法:选用15例体重以及月龄相仿的家兔,以3只为一组,共分成5组,以水合氯醛麻醉后空气栓塞处死。分别用37%甲醛溶液固定处理,采用手术器械剥离皮肤毛发,沿腹正中线切开腹壁,取出可能会对盐酸处理液造成污染的内脏等,处理完毕后备用。分别配置5%、10%、15%、20%、25%的盐酸处理液,将以上制备的家兔分别完全浸没其中,并分别编号为A、B、C、D、E组。采用夹具将推拉测力计与l=2.25cm,r=0.5mm的钢针相连接,以家兔颅骨最厚的顶骨为采样区域,每4h针刺一次,并记录针刺透采样区域时的峰值力度,直至力度小于5N时停止,将5组数据导入SPSS进行对照分析与回归分析。取出并清洗残留盐酸处理液,对处理完毕的家兔进行解剖。结果:A~E的处理组分别耗时44h、40h、32h、28h、24h。通过解剖操作得到的标本清楚的展示了兔的中枢神经,包括大脑、小脑、延髓、脊髓;周围神经系统包括三叉神经、眼神经、面神经、8对颈神经、13对胸神经、7对腰神经、臂丛、腰丛。结论:利用基于盐酸处理骨骼脱钙法可以简便的制作出完整的兔神经系统标本,家兔颅骨盐酸脱钙模型为Y=57.085-1.072×X1-116.8×X2。 展开更多

关键词 动物实验 盐酸脱钙法 兔 神经解剖 标本制作

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