康莱特注射液对肿瘤恶病质实验模型的细胞免疫功能影响 被引量：18

1

作者 邓松华 徐振山 +1 位作者 刘爱国 张宝霆 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第5期445-447,共3页

目的探讨癌症恶病质时机体细胞免疫功能变化及康莱特（kanglaite，KLT）对癌症恶病质的治疗作用。方法建立T739小鼠癌症恶病质模型，观察KLT对模型鼠细胞免疫功能的作用。结果KLT可明显降低小鼠血清中肿瘤坏死因子（TNF-α）水平，并可... 目的探讨癌症恶病质时机体细胞免疫功能变化及康莱特（kanglaite，KLT）对癌症恶病质的治疗作用。方法建立T739小鼠癌症恶病质模型，观察KLT对模型鼠细胞免疫功能的作用。结果KLT可明显降低小鼠血清中肿瘤坏死因子（TNF-α）水平，并可提高NK细胞活性和促进小鼠脾淋巴细胞增殖。结论康莱特对小鼠癌症恶病质时受损的细胞免疫功能有较好的恢复作用。 展开更多

关键词 肿瘤恶病质 药物疗法 康莱特 细胞免疫功能

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结核病DNA疫苗pVAX1/ESAT-6的构建、鉴定及免疫效应评价 被引量：4

2

作者 王雪梅 王英 +5 位作者 薛玉芹 陈勇 陶志勇 夏惠 唐洁 方强 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期945-950,共6页

目的构建结核病DNA疫苗pVAX1/ESAT-6并探讨其诱导的免疫效应。方法将扩增自结核杆菌基因组的ESAT-6基因装入pVAX1载体构建pVAX1/ESAT-6重组质粒;经酶切、测序鉴定后,利用阳离子聚合物介导将重组质粒pVAX1/ESAT-6转染Hela细胞,分别以RT-... 目的构建结核病DNA疫苗pVAX1/ESAT-6并探讨其诱导的免疫效应。方法将扩增自结核杆菌基因组的ESAT-6基因装入pVAX1载体构建pVAX1/ESAT-6重组质粒;经酶切、测序鉴定后,利用阳离子聚合物介导将重组质粒pVAX1/ESAT-6转染Hela细胞,分别以RT-PCR法检测ESAT-6 mRNA的表达、间接免疫荧光法检测ESAT-6蛋白表达。重组质粒经体内电转染免疫小鼠后,采用ELISA法测定小鼠血清中IFN-γ及抗ESAT-6特异性抗体IgG的水平;流式细胞术检测小鼠淋巴细胞增殖水平;ELISPOT检测产生IFN-γ的淋巴细胞频数。结果构建的重组质粒pVAX1/ESAT-6经双酶切于3000 bp和300 bp处各见1条带,测序结果显示插入序列与ESAT-6基因序列无差异。重组质粒转染Hela细胞后,RT-PCR产物经琼脂糖凝胶电泳于约300 bp处见目的条带,间接免疫荧光检测显示特异性绿色荧光。重组质粒免疫小鼠后,血清中抗ESAT-6特异性抗体IgG水平较对照组(空质粒组和生理盐水对照组)明显升高;血清中IFN-γ水平、小鼠脾淋巴细胞增殖水平及产生IFN-γ的淋巴细胞数明显均高于对照组(空质粒组和生理盐水对照组)。结论成功构建了结核病DNA疫苗pVAX1/ESAT-6,该疫苗可有效诱导小鼠产生特异性细胞免疫和体液免疫效应。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 ESAT-6 DNA疫苗 细胞免疫 体液免疫

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共刺激分子4-1BBL高表达与肿瘤免疫逃逸关系的研究 被引量：2

3

作者 张克昌 吴俊英 李柏青 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期903-907,共5页

目的:观察高表达4-1BBL的HL-60细胞培养上清液对人淋巴细胞活化、增殖、IL-2分泌及凋亡诱导作用的影响;分析阻断4-1BB/4-1BBL信号对肿瘤细胞增殖、细胞因子分泌的影响,揭示肿瘤的免疫逃逸机制。方法:将不同浓度的HL-60肿瘤细胞培养上清... 目的:观察高表达4-1BBL的HL-60细胞培养上清液对人淋巴细胞活化、增殖、IL-2分泌及凋亡诱导作用的影响;分析阻断4-1BB/4-1BBL信号对肿瘤细胞增殖、细胞因子分泌的影响,揭示肿瘤的免疫逃逸机制。方法:将不同浓度的HL-60肿瘤细胞培养上清液与体外分离的人淋巴细胞共培养,MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测免疫表型、细胞因子分泌及细胞凋亡;ELISA法检测IL-2分泌水平;用抗4-1BBL单抗作用后,观察对HL-60细胞增殖及细胞因子分泌的影响。结果:不同的肿瘤细胞株表面均有4-1BBL表达,但表达水平不同;HL-60细胞培养上清液对淋巴细胞活化没有明显影响(P>0.05),但能明显抑制淋巴细胞增殖(P<0.01)和IL-2分泌(P<0.05),诱导淋巴细胞凋亡(P<0.05)。抗4-1BBL单抗能抑制HL-60细胞增殖和TGF-β的分泌(P<0.05)。结论:HL-60细胞高表达4-1BBL具有反向调节作用,可通过促进肿瘤细胞增殖及TGF-β分泌等抑制淋巴细胞功能,从而使之逃避宿主的免疫监视。 展开更多

关键词 肿瘤细胞 淋巴细胞 4-1BBL 免疫逃逸

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纯化的结核杆菌多肽抗原刺激人γδT细胞的效应分析 被引量：9

4

作者 陈勇 吕合作 +2 位作者 李柏青 王伟 张海峰 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期661-664,共4页

目的 :探讨从结核杆菌多肽抗原 (Mtb Ag)纯化的多肽 (C主肽 )对人新鲜外周血γδT细胞的促增殖效应以及对已活化扩增的T细胞再次刺激的激活效应。方法 :采用不同剂量的C主肽体外刺激健康人外周血PBMC ,培养 10天时经流式细胞仪检测细胞... 目的 :探讨从结核杆菌多肽抗原 (Mtb Ag)纯化的多肽 (C主肽 )对人新鲜外周血γδT细胞的促增殖效应以及对已活化扩增的T细胞再次刺激的激活效应。方法 :采用不同剂量的C主肽体外刺激健康人外周血PBMC ,培养 10天时经流式细胞仪检测细胞表型 ;另外以γδT细胞活化标志分子CD6 9的表达为指标 ,分析C主肽对已被Mtb Ag激活扩增 13天的γδT细胞再次刺激的激活效应。同时以MTT法检测C主肽的再刺激对已活化扩增的γδT细胞的促增殖活性。结果 :结核杆菌C主肽对人新鲜的γδT细胞具有显著扩增效应 ;当C主肽再刺激已经活化的γδT细胞时 ,可使其显著表达CD6 9分子 ,同时对γδT细胞具有显著促增殖活性。结论 :结核杆菌C主肽可能是Mtb 展开更多

关键词 ΓΔT细胞 结核杆菌 刺激 多肽抗原 扩增 增殖活性 CD69 结论 培养 分子

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IL-12增强结核病患者中性粒细胞吞噬和杀伤结核杆菌的活性 被引量：19

5

作者 姜丽娜 姚春艳 +2 位作者 金齐力 贺文欣 李柏青 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1191-1194,共4页

目的:观察IL-12对结核病患者外周血中性粒细胞(PMN)对结核分枝杆菌(M.tb)吞噬和杀伤功能的影响。方法:结核病患者和正常人外周血与异硫氰酸荧光素(FITC)标记的M.tb共同孵育不同时间后,用流式细胞术(FCM)检测PMN对M.tb的吞噬率;结核病患... 目的:观察IL-12对结核病患者外周血中性粒细胞(PMN)对结核分枝杆菌(M.tb)吞噬和杀伤功能的影响。方法:结核病患者和正常人外周血与异硫氰酸荧光素(FITC)标记的M.tb共同孵育不同时间后,用流式细胞术(FCM)检测PMN对M.tb的吞噬率;结核病患者和正常人外周血均加入2'7'二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)作用,同时加或者不加M.tb共同孵育不同时间后,用FCM检测PMN的活化率并计算活性氧(ROS)产生量;不同浓度IL-12预先作用外周血后,再用上述方法检测PMN对M.tb吞噬率,活化率及产生ROS的变化。结果:结核病患者和正常人PMN对M.tb吞噬率,PMN活化率和ROS产生均随时间延长而增加,但结核病患者5 min吞噬率(51.82±6.93)%高于正常人(47.20±4.26)%(P<0.05);IL-12预先作用后,结核病患者和正常人PMN吞噬率、PMN活化率和ROS的产生均随浓度增大而显著增加,两者之间无显著性差异。结论:结核病患者外周血PMN对M.tb的吞噬功能以及ROS产生与正常人无显著性差异,仅早期吞噬率较高。IL-12略增强PMN吞噬和产生ROS的反应能力。 展开更多

关键词 结核 中性粒细胞 吞噬 活性氧 IL-12

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刺激人γδ^+ T细胞增殖的结核杆菌多肽抗原的纯化与活性鉴定 被引量：13

6

作者 陈勇 吕合作 +4 位作者 胡建国 候彦强 张海峰 李柏青 何海辉 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期86-89,共4页

目的:纯化可刺激人γδ+ T细胞增殖的结核杆菌耐热多肽抗 原。方法:采用快速蛋白液相色谱仪(FPLC)S-100分子筛层析柱,对结核杆菌耐热抗原(Mtb-Ag)初步分离。将获得的结核杆菌耐热Mr低的多肽抗原(Mtb-LW-Ag)洗脱峰,分别再经FPLC Mono Q... 目的:纯化可刺激人γδ+ T细胞增殖的结核杆菌耐热多肽抗 原。方法:采用快速蛋白液相色谱仪(FPLC)S-100分子筛层析柱,对结核杆菌耐热抗原(Mtb-Ag)初步分离。将获得的结核杆菌耐热Mr低的多肽抗原(Mtb-LW-Ag)洗脱峰,分别再经FPLC Mono Q离子交换层析柱进一步纯化,并且采用流式细胞仪对获得的Mtb-LW-Ag进行刺激γδ+ T细胞增殖活性的测定。结果:Mtb-Ag经FPLC S-100柱可分离出1个大分子蛋白峰A和3个M,低的多肽峰(B,C,D)。Mr低的多肽峰分别经Mono Q柱层析,鉴定出B峰含有6个主峰,C峰含有1个主峰,D峰含有8个主峰。对Mtb-LW-Ag及其纯化多肽进行活性检测,发现多肽峰B和C以及纯化多肽B-Ⅲ和C-主肽均可显著刺激γδ+ T细胞扩增。结论:利用FPLC法可快速高效地从Mtb-Ag中纯化出多种Mr低的多肽,而且其中的B-Ⅲ多肽和C-主肽可能是促进γδ+ T细胞活化增殖的主要多肽。 展开更多

关键词 γδ^+T细胞 结核杆菌 多肽抗原 纯化 活性鉴定

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刺激人γδT细胞增殖的结核杆菌多肽抗原的生物学特性分析 被引量：10

7

作者 陈勇 吕合作 +1 位作者 胡建国 李柏青 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期121-123,共3页

目的 :分析可刺激人γδT细胞增殖的结核杆菌多肽抗原(Mtb Ag)的某些生物学特性。方法 :以结核杆菌分泌蛋白与经透析或链霉蛋白酶处理的Mtb Ag体外分别刺激人外周血单个核细胞 (PBMC)增殖 ,培养 10d时 ,采用流式细胞仪分析细胞的表型。... 目的 :分析可刺激人γδT细胞增殖的结核杆菌多肽抗原(Mtb Ag)的某些生物学特性。方法 :以结核杆菌分泌蛋白与经透析或链霉蛋白酶处理的Mtb Ag体外分别刺激人外周血单个核细胞 (PBMC)增殖 ,培养 10d时 ,采用流式细胞仪分析细胞的表型。结果 :透析后的Mtb Ag刺激γδT细胞增殖的活性未见明显降低 ;而经链霉蛋白酶处理的Mtb Ag促进γδT细胞增殖的活性则显著下降。另外 ,与结核杆菌分泌蛋白相比较 ,Mtb Ag刺激γδT细胞增殖的活性显著增强。 结论 :Mtb Ag中可刺激人γδT细胞增殖的成分是一种相对分子质量 (Mr)大于 10 0 0 0、非分泌性。 展开更多

关键词 ΓΔT细胞 细胞增殖 结核杆菌 多肽抗原 生物学特性

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颗粒外排与Fas/Fas配体途径在人γδT细胞的肿瘤细胞毒活性中的作用 被引量：7

8

作者 胡建国 侯彦强 +1 位作者 陈勇 李柏青 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2001年第4期260-263,共4页

目的 :探讨结核杆菌抗原 (Mtb Ag)特异性活化的γδT细胞杀伤肿瘤细胞的细胞毒活性机制。 方法 :用Mtb Ag刺激正常人PBMC以诱导γδT细胞扩增并用磁珠阳性分选法获得高纯度γδT细胞 ;用RT PCR法检测γδT细胞穿孔素、颗粒酶B和FasLmRN... 目的 :探讨结核杆菌抗原 (Mtb Ag)特异性活化的γδT细胞杀伤肿瘤细胞的细胞毒活性机制。 方法 :用Mtb Ag刺激正常人PBMC以诱导γδT细胞扩增并用磁珠阳性分选法获得高纯度γδT细胞 ;用RT PCR法检测γδT细胞穿孔素、颗粒酶B和FasLmRNA的表达 ;用流式细胞仪检测γδT细胞表面Fas配体 (FasL)分子以及几种肿瘤细胞表面Fas分子的表达 ;用MTT法测定γδT细胞对肿瘤细胞的细胞毒活性 ,观察穿孔素 /颗粒酶途径的阻断剂concanamycinA (CMA)和Fas/FasL途径的抑制剂brefeldinA(BFA)对γδT细胞细胞毒活性的影响。结果 :经Mtb Ag激活和扩增的γδT细胞高表达穿孔素、颗粒酶B和FasLmRNA ;Mtb Ag活化的γδT细胞中 2 2 .4%表达FasL分子 ;CMA能明显抑制γδT细胞对肿瘤细胞 (尤其对Fas低表达的K5 6 2和PG)的杀伤 ,BFA能强烈抑制γδT细胞杀伤Fas高表达的Raji和A375。 结论 :Mtb Ag活化的γδT细胞杀伤Fas低表达的靶细胞时主要通过颗粒外排途径 ,杀伤Fas高表达的靶细胞时 ,颗粒外排和FasL均起作用。 展开更多

关键词 ΓΔT细胞 细胞毒活性 穿孔毒 颗粒酶B Fas/FasL配体 结核杆菌抗原 肿瘤细胞

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结核杆菌抗原特异性激发人γδT细胞活化信号涉及Ras/Erk途径 被引量：7

9

作者 侯彦强 李柏青 +1 位作者 胡建国 陈勇 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第8期530-533,共4页

目的 :探讨Ras Erk通路是否参与结核杆菌低分子多肽抗原 (Mtb Ag)启动的γδT细胞活化信号转导途径。方法 :分离获取PBMC ,用佛波醇酯 (PMA)和离子霉素 (IM) ,CD3mAb或Mtb Ag刺激不同时间 ,或PBMC先经PD980 5 9处理后再刺激培养 ;用荧... 目的 :探讨Ras Erk通路是否参与结核杆菌低分子多肽抗原 (Mtb Ag)启动的γδT细胞活化信号转导途径。方法 :分离获取PBMC ,用佛波醇酯 (PMA)和离子霉素 (IM) ,CD3mAb或Mtb Ag刺激不同时间 ,或PBMC先经PD980 5 9处理后再刺激培养 ;用荧光单抗染色后在流式细胞仪测定细胞CD6 9分子的表达 ;计数培养扩增 10天的细胞数量。结果 :PBMC用PMA +IM刺激 6小时 ,总T细胞和γδT细胞中的CD6 9表达均达高峰 (均 >99% ) ,用CD3mAb刺激 2 4小时 ,均达高峰 (均在 5 5 %左右 ) ,用Mtb Ag刺激 2 4小时 ,亦均达高峰 ,但总T细胞和γδT细胞中CD6 9分别为 16 .0 %和 75 2 % ;用PD980 5 9预处理PBMC ,可明显抑制Mtb Ag激活的γδT细胞CD6 9表达和γδT细胞的增殖。结论 :Mtb Ag可特异性激活γδT细胞 ,其活化信号转导需通过Ras Erk通路。 展开更多

关键词 结核杆菌 抗原特异性 ΓΔT细胞 活化信号 Ras/Erk

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协同刺激分子4-1BB和CD28对人外周血不同T细胞亚群的激活作用 被引量：6

10

作者 吴俊英 钱峰 +2 位作者 吕合作 王伟 李柏青 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期533-536,共4页

目的 :探讨 4 1BB/ 4 1BBL协同刺激信号在CD4 + 和CD8+ T细胞活化、增殖中的作用 ,并与CD2 8/B7信号作比较。方法 :用抗CD3单抗 (mAb)刺激人外周血单个核细胞 (PBMC)。用阻断型抗 4 1BBLmAb和抗CD80mAb ,分别阻断 4 1BB/ 4 1BBL和C... 目的 :探讨 4 1BB/ 4 1BBL协同刺激信号在CD4 + 和CD8+ T细胞活化、增殖中的作用 ,并与CD2 8/B7信号作比较。方法 :用抗CD3单抗 (mAb)刺激人外周血单个核细胞 (PBMC)。用阻断型抗 4 1BBLmAb和抗CD80mAb ,分别阻断 4 1BB/ 4 1BBL和CD2 8/B7 1协同刺激信号。利用流式细胞术 (FCM)检测CD4 + T细胞、CD8+ T细胞的增殖率、CD8/CD4T细胞的比值变化和细胞分泌IFN γ的情况。结果 :用抗 4 1BBLmAb和抗CD80mAb阻断相应的协同刺激途径后 ,CD4 + 和CD8+ T细胞的增殖和细胞分泌IFN γ的水平均明显下降。培养 8d,抗CD3mAb单独刺激组CD8/CD4T细胞的比值为 1.98± 0 .0 6 ;抗 4 1BBLmAb阻断组CD8/CD4T细胞的比值下降为 0 .96±0 .0 3;而在抗CD80mAb阻断组 ,其比值上升为 2 .6 9± 0 .16。结论 :4 1BB分子可在CD4 + T细胞和CD8+ T细胞的活化、增殖中提供协同刺激信号。 4 1BB分子所介导的协同刺激信号 ,在CD8+ T细胞活化及增殖中发挥了更为重要的作用 ;而CD2 8分子所介导的协同刺激信号则更有利于CD4 + 展开更多

关键词 4-1BB CD28 增殖 活化

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基于结核杆菌耐热抗原小分子多肽刺激人外周血T细胞产生TNF-α和IFN-γ鉴别肺结核和潜伏性结核感染 被引量：20

11

作者 唐洁 陈策 +4 位作者 查成 常见荣 方强 王兆华 李柏青 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期1442-1447,共6页

目的研究结核杆菌耐热抗原小分子多肽(Mtb-HAg-10k)刺激人外周血T细胞产生细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-γ(IFN-γ)的作用特点及肺结核患者和潜伏性感染者IFN-γ产生细胞的数量差异,初步探讨Mtb-HAg-10k作为诊断抗原鉴别肺... 目的研究结核杆菌耐热抗原小分子多肽(Mtb-HAg-10k)刺激人外周血T细胞产生细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-γ(IFN-γ)的作用特点及肺结核患者和潜伏性感染者IFN-γ产生细胞的数量差异,初步探讨Mtb-HAg-10k作为诊断抗原鉴别肺结核和潜伏性结核感染的可行性。方法以超滤离心法获得的Mtb-HAg-10k为刺激剂作用于人外周血单个核细胞(PBMCs),并以Mtb-HAg、植物血凝素PHA作为对照,用多色流式细胞术检测T细胞亚群中TNF-α和IFN-γ产生细胞比例,酶联免疫斑点法检测肺结核患者和潜伏性感染者PBMCs中IFN-γ产生细胞数量。结果流式细胞术检测人外周血Mtb-HAg-10k特异性γδT细胞中TNF-α产生细胞比例显著高于IFN-γ产生细胞比例(P<0.01);与PHA刺激组相比,γδT细胞中TNF-α和IFN-γ产生细胞比例增高(P<0.01),而αβT细胞中TNF-α和IFN-γ产生细胞比例显著降低;酶联免疫斑点法检测Mtb-HAg-10k刺激的健康者PBMCs中IFN-γ产生细胞数量低于Mtb-HAg刺激组和PHA对照组(P<0.01);肺结核患者IFN-γ产生细胞数量低于潜伏性结核感染者(P<0.01)。结论以Mtb-HAg-10K为刺激剂可使人外周血γδT细胞优势产生TNF-α和IFN-γ,通过酶联免疫斑点法检测PBMCs中IFN-γ产生细胞数量差异有助于鉴别肺结核和潜伏性结核感染。 展开更多

关键词 结核杆菌耐热抗原 ΓΔT细胞 肿瘤坏死因子-Α 干扰素-Γ 肺结核 潜伏性结核感染

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结核分枝杆菌耐热抗原激活的人γδT细胞Th2极性分化特征以及T-bet/GATA-3对分化的调控作用 被引量：7

12

作者 朱安友 吕合作 +3 位作者 张伦军 胡建国 王凤超 李柏青 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期72-76,共5页

目的研究结核杆菌耐热抗原(MTB-HAg)激活的人外周血γδT细胞Th2极性分化特点和表达于T细胞中的T盒(T-bet)和GATA结合蛋白3(GATA-3)转录因子的调控作用。方法用MTB-HAg刺激人外周血单个核细胞(PBMC)获得MTB-HAg激活的T细胞(MTBAT),分别... 目的研究结核杆菌耐热抗原(MTB-HAg)激活的人外周血γδT细胞Th2极性分化特点和表达于T细胞中的T盒(T-bet)和GATA结合蛋白3(GATA-3)转录因子的调控作用。方法用MTB-HAg刺激人外周血单个核细胞(PBMC)获得MTB-HAg激活的T细胞(MTBAT),分别在中性条件和Th2极化条件培养后,再经10 ng/m L佛波醇酯(PMA)、500 ng/m L离子霉素(ionomycin)和2.5μmol/L莫能菌素(monensin)刺激6 h,四色荧光抗体染色流式细胞术检测γδT细胞和αβT细胞内细胞因子γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)的表达。流式细胞术分选28 d MTBAT中的γδT细胞和CD4+T细胞,反转录PCR(RT-PCR)检测T-bet和GATA-3 mRNA的表达。结果在中性条件和Th2极化条件下培养的MTBAT中,γδT细胞一直优势表达IFN-γ,而Th2极化条件下,随培养时间增加IFN-γ+αβT细胞百分率显著下降。与中性条件培养比较,Th2极化条件下MTBAT培养28 d,Th0型(IFN-γ+IL-4+)γδT细胞显著增加;而Th2型(IFN-γ-IL-4+)αβT细胞显著增加。RT-PCR结果显示,Th2极化的γδT细胞仍高表达T-bet mRNA,而在CD4+T细胞T-bet mRNA表达被显著下调;同时,GATA-3 mRNA在γδT细胞和CD4+T细胞的表达均显著上调。结论 Th2极化条件下,大部分γδT细胞仍为Th1型,仅部分极性分化为Th0型细胞;Th2极性分化的γδT细胞转录因子T-bet和GATA-3未表现出交互调节功能。 展开更多

关键词 结核杆菌耐热抗原 ΓΔT细胞 Th2极化 T-BET GATA-3

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microRNA-204在鼻咽癌中的表达及生物学意义研究 被引量：5

13

作者 蒋成义 汪洪涛 +2 位作者 周蕾 江涛 许亚佳 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期822-826,共5页

目的:研究微小RNA 204(microRNA-204,miR-204)在鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma,NPC)中的表达情况及生物学意义。方法:收集2012年3月至2014年3月间于我院耳鼻喉头颈外科行组织病理活检的NPC组织及对应癌旁鼻黏膜组织共43例,运用q RT-... 目的:研究微小RNA 204(microRNA-204,miR-204)在鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma,NPC)中的表达情况及生物学意义。方法:收集2012年3月至2014年3月间于我院耳鼻喉头颈外科行组织病理活检的NPC组织及对应癌旁鼻黏膜组织共43例,运用q RT-PCR技术检测miR-204在NPC组织及癌旁组织中的表达水平,统计分析miR-204表达水平与患者临床病理资料间的相关性;免疫组化检测鼻咽癌组织中miR-204下游潜在靶点Bcl-2及SIRT1蛋白的表达水平,统计分析Bcl-2及SIRT1蛋白与miR-204表达间的相关性;采用人工合成的miR-204模拟物(miR-204 mimics)转染人鼻咽癌CNE-2细胞,分别采用q RT-PCR及Western blot检测转染后Bcl-2及SIRT1 mRNA和蛋白的表达变化。结果:miR-204在NPC组织中表达水平显著低于对应癌旁鼻黏膜组织(P<0.05);miR-204低表达与肿瘤淋巴结转移(P<0.05)及高TNM分期(Ⅲ+Ⅳ期,P<0.05)显著相关;在鼻咽癌组织中miR-204与其下游潜在靶点Bcl-2及SIRT1的表达呈显著负相关关系(P<0.05),miR-204转染人鼻咽癌CNE-2细胞后可显著降低细胞内Bcl-2及SIRT1 mRNA和蛋白的表达水平(P<0.05)。结论:miR-204在鼻咽癌组织中表达下调并与肿瘤恶性临床病理特征有关,miR-204可能通过下调Bcl-2及SIRT1的表达来抑制鼻咽癌的发生、发展过程。 展开更多

关键词 MicroRNA-204 鼻咽癌 BCL-2 SIRT1

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早孕因子对淋巴细胞增殖的影响 被引量：8

14

作者 邓松华 苏宝田 徐振山 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期410-413,共4页

目的：探讨早孕因子（ＥＰＦ）活性物对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响及其在胎母免疫中的作用。方法：使用离子交换层析、亲和层析和凝胶过滤技术提纯３～６周孕妇血清中ＥＰＦ；用淋巴细胞转化法观察ＥＰＦ对淋巴细胞的作用。结果：ＥＰＦ... 目的：探讨早孕因子（ＥＰＦ）活性物对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响及其在胎母免疫中的作用。方法：使用离子交换层析、亲和层析和凝胶过滤技术提纯３～６周孕妇血清中ＥＰＦ；用淋巴细胞转化法观察ＥＰＦ对淋巴细胞的作用。结果：ＥＰＦ活性物Ｇ４、Ｇ３及孕血清均能抑制淋巴细胞ＤＮＡ合成，尤以Ｇ４作用更为明显，并呈一定剂量依赖性。结论：ＥＰＦ可能在介导、调控妊娠早期诱导的免疫抑制。 展开更多

关键词 淋巴细胞 免疫抑制 生殖 早孕因子

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转录因子T-bet和Eomes对不同亚类人T细胞产生IFN-γ的调控作用 被引量：4

15

作者 汪洪涛 葛晓松 +1 位作者 薛祝平 李柏青 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期31-34,共4页

目的:探讨转录因子T-bet和Eomes对不同亚类人T细胞产生IFN-γ的调控作用。方法:化学合成针对人T-bet和Eomes基因的小干扰RNA(siRNA),转染体外培养的CD3单克隆抗体(mAb)活化的αβT细胞和Mtb-Ag活化的γδT细胞,利用流式细胞仪分选纯化C... 目的:探讨转录因子T-bet和Eomes对不同亚类人T细胞产生IFN-γ的调控作用。方法:化学合成针对人T-bet和Eomes基因的小干扰RNA(siRNA),转染体外培养的CD3单克隆抗体(mAb)活化的αβT细胞和Mtb-Ag活化的γδT细胞,利用流式细胞仪分选纯化CD4+、CD8+T细胞和γδT细胞,半定量RT-PCR检测CD4+、CD8+T淋巴细胞中T-bet和EomesmRNA的表达变化,流式细胞术(FCM)检测转染前后IFN-γ产生的变化情况。结果:经过连续2次转染,siRNA-FAM+细胞可达50%。转染T-bet-siRNA后,CD4+T细胞IFN-γ+细胞率(18.46±6.86)%,比阴性对照组(50.20±5.91)%,明显降低(P<0.01),而CD8+T细胞转染T-bet-siRNA,IFN-γ+细胞率(74.18±9.33)%,与阴性对照组(76.51±6.49)%无统计学意义;转染Eomes-siRNA,CD4+T细胞IFN-γ+细胞率(50.92±6.78)%,与对照组无统计学意义;而CD8+T细胞IFN-γ+细胞率(25.37±7.11)%,比阴性对照组(76.51±6.49)%,明显降低(P<0.01)。MtbAT转染T-bet-siRNA和Eomes-siRNA后,γδT细胞IFN-γ+细胞率分别为(56.57±6.67)%和(42.53±5.13)%,比阴性对照组(76.52±2.58)%均明显降低(P<0.01)。结论:在转录因子水平,T-bet和Eomes分别是调控CD4+、CD8+T淋巴细胞IFN-γ产生的重要转录因子,而两者可能同时参与了γδT细胞IFN-γ产生的调节。 展开更多

关键词 SIRNA T-BET IFN-Γ 淋巴细胞

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MAPK信号转导途径在Mtb-Ag激活的γδT细胞杀伤肿瘤细胞中的作用 被引量：4

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作者 胡建国 侯彦强 李柏青 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期21-23,共3页

目的: 探讨MAPK信号转导途径在结核杆菌抗原(Mtb- Ag)活化的γδT细胞杀伤肿瘤细胞中的作用。方法: 用Mtb- Ag刺激正常人PBMC以诱导γδT细胞扩增, 并用磁珠阳性分选法分离高纯度的γδT细胞; 用MTT比色法测定γδT细胞对肿瘤细胞系K562... 目的: 探讨MAPK信号转导途径在结核杆菌抗原(Mtb- Ag)活化的γδT细胞杀伤肿瘤细胞中的作用。方法: 用Mtb- Ag刺激正常人PBMC以诱导γδT细胞扩增, 并用磁珠阳性分选法分离高纯度的γδT细胞; 用MTT比色法测定γδT细胞对肿瘤细胞系K562和Raji的细胞毒活性, 并观察MEK/Erk特异性抑制剂PD98059和p38 MAPK特异性抑制剂SB203580, 对细胞毒活性的阻断作用。用流式细胞仪检测肿瘤细胞诱导γδT细胞上CD69的表达, 并观察PD98059和SB203580对CD69表达的抑制作用。结果: 新鲜分离的PB- MC, 用Mtb Ag刺激培养第 10天, 用磁珠阳性法分离的细胞中γδT细胞的比率, 分别为 3. 56%、74. 63%和 98. 20%。PD98059可抑制γδT细胞的杀瘤活性, 且对γδT细胞杀伤Fas低表达的K562细胞的抑制率(39. 27% )高于对γδT细胞杀伤高表达Fas的Raji细胞的抑制率 ( 26. 58% )。PD98059还能明显抑制肿瘤细胞诱导γδT细胞表达CD69; 而SB203580对γδT细胞的杀瘤活性和肿瘤细胞诱导的CD69的表达均无影响。结论: MAPK途径中的Erk通路 (而不是p38通路 )参与了γδT细胞对肿瘤细胞细胞毒活性的启动, 且可能对γδT细胞的颗粒外吐作用较大, 而对Fas/FasL介导的细胞毒活性的作用较小。MAPK途径的Erk通路可能还参与肿瘤细胞诱导γδT细胞的? 展开更多

关键词 ΓΔT细胞 肿瘤细胞 细胞毒活性 MAPK途径

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肺结核患者外周血中结核分枝杆菌耐热抗原特异性的TNF-α^＋ γδ T细胞数量和亚群分析 被引量：8

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作者 唐洁 陈策 +4 位作者 查成 王兆华 张晨 曾林丽 李柏青 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1527-1531,共5页

目的探讨结核分枝杆菌耐热抗原(MTB-HAg)刺激下,肺结核患者、潜伏性MTB感染者、健康者外周血γδT细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)产生细胞数量的差异。方法采集15例正常成人外周血,根据人MTB感染T细胞酶联免疫斑点诊断试剂盒检测结果分... 目的探讨结核分枝杆菌耐热抗原(MTB-HAg)刺激下,肺结核患者、潜伏性MTB感染者、健康者外周血γδT细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)产生细胞数量的差异。方法采集15例正常成人外周血,根据人MTB感染T细胞酶联免疫斑点诊断试剂盒检测结果分为健康者(n=9)和潜伏性MTB感染者(n=6),另采集肺结核患者外周血(n=12),3组经密度梯度离心法获取外周血单个核细胞(PBMC),用MTB-HAg刺激20 h。收集细胞,流式细胞术检测TCRαβ+T细胞、TCRγδ+T细胞、CD4+αβT细胞、CD8+αβT细胞、TCR-Vδ2+T细胞亚群中产生TNF-α产生细胞的比例。结果肺结核患者外周血γδT细胞中TNF-α产生细胞比例显著低于潜伏性MTB感染者和健康者;肺结核患者外周血Vδ2T细胞中TNF-α产生细胞比例显著低于潜伏性MTB感染者和健康者;肺结核患者外周血中Vδ2T细胞在TNF-α+γδT细胞中所占比例显著低于潜伏性MTB感染者和健康者。结论肺结核患者外周血MTB-HAg特异性γδT细胞及其Vδ2亚群产生细胞因子TNF-α能力显著低于潜伏性MTB感染者和健康者。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌耐热抗原(MTB-HAg) 潜伏性MTB感染 活动性肺结核 γδ T细胞 肿瘤坏死因子α(TNF-α)

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乙醇及二甲基亚砜对人γδT细胞和αβT细胞凋亡与细胞活性的影响 被引量：4

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作者 梅传忠 沈继龙 +1 位作者 陈勇 李柏青 《安徽医科大学学报》 CAS 2004年第3期168-173,共6页

目的　观察不同浓度的乙醇及二甲基亚砜 (DMSO)对人γδT细胞和αβT细胞凋亡与细胞活性的影响。方法　分别用结核杆菌低分子多肽抗原 (Mtb Ag)、CD3单抗(CD3mAb)刺激正常人外周血单个核细胞 ,分别获得Mtb Ag激活的T细胞 (αβT细胞为... 目的　观察不同浓度的乙醇及二甲基亚砜 (DMSO)对人γδT细胞和αβT细胞凋亡与细胞活性的影响。方法　分别用结核杆菌低分子多肽抗原 (Mtb Ag)、CD3单抗(CD3mAb)刺激正常人外周血单个核细胞 ,分别获得Mtb Ag激活的T细胞 (αβT细胞为主 )及CD3mAb激活的T细胞(γδT细胞为主 ) ;用不同浓度的乙醇及二甲基亚砜分别作用于γδT细胞和γδT细胞 4、2 4h后 ,应用Annexin V FITC/PI染色 ,流式细胞术检测不同T细胞亚群的凋亡 ,应用四唑盐(MTT)法检测T细胞的活性。结果　Mtb Ag激活的T细胞中γδT细胞比例可达 70 %～ 90 % ;CD3mAb激活的T细胞中γδT细胞比例 >90 % ;与对照组相比 ,除浓度为 1 0 %及 2 0 %的DMSO作用于γδT细胞 2 4h的诱导凋亡作用明显 (P <0 0 5 )及浓度为 2 0 %的DMSO作用于γδT细胞 4h对细胞活性抑制明显 (P <0 0 5 )外 ,低浓度乙醇及DMSO(≤ 2 0 % )对人γδT细胞和γδT细胞的诱导凋亡作用及对细胞活性的抑制作用均无显著性 (P >0 0 5 ) ;与对照组相比 ,除 5 0 %乙醇作用于γδT细胞 4h及 5 0 %DMSO作用于γδT细胞 4h诱导细胞凋亡作用不明显 (P >0 0 5 )外 ,高浓度乙醇和DMSO(5 0 % )对γδT细胞和γδT细胞的诱导凋亡作用及对细胞活性的抑制作用均增加 (P <0 0 5 )。结论? 展开更多

关键词 乙醇/药理学 二甲亚砜/药理学 脱噬作用/药物作用 ΓΔT细胞 ΑΒT细胞

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人4-1BB配体基因真核表达载体的构建、表达及其体外抗肿瘤效应 被引量：6

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作者 吕坤 吴俊英 李柏青 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期511-514,519,共5页

目的:构建人4-1BB配体(h4-1BBL)全长基因的真核表达载体,并在肿瘤细胞HT-29中转染表达;探讨人4-1BBL基因转染的肿瘤细胞体外诱导的抗肿瘤活性。方法:用RT-PCR从Raji细胞中克隆h4-1BBL全长基因,测序后,构建重组真核表达载体pcDNA3.1(-)-h... 目的:构建人4-1BB配体(h4-1BBL)全长基因的真核表达载体,并在肿瘤细胞HT-29中转染表达;探讨人4-1BBL基因转染的肿瘤细胞体外诱导的抗肿瘤活性。方法:用RT-PCR从Raji细胞中克隆h4-1BBL全长基因,测序后,构建重组真核表达载体pcDNA3.1(-)-h4-1BBL。通过脂质体法以重组载体转染HT-29细胞,用RT-PCR检测转染细胞中h4-1BBLmRNA的表达;用流式细胞术检测转染细胞表面h4-1BBL分子的表达。分离外周血单个核细胞(PBMC),用抗CD3mAb扩增T细胞,并与h4-1BBL基因转染及未转染的HT-29细胞混合培养。用MTT比色法检测CTL的增殖及杀伤活性;用流式细胞术检测分泌IFN-γ的T细胞。结果:从Raji细胞中克隆到h4-1BBL全长cDNA,测序完全正确。构建的h4-1BBL基因真核表达载体在HT-29中获得稳定表达。与未转染的细胞相比较,h4-1BBL基因转染的肿瘤细胞HT-29能更有效地刺激T细胞活化、增殖,促进IFN-γ分泌,并能有效地诱导CTL产生针对野生型HT-29细胞的特异性杀伤。结论:成功地构建pcDNA3.1(-)h4-1BBL重组真核表达载体。4-1BBL基因转染的肿瘤细胞介导的协同刺激信号,能增强野生型肿瘤细胞的免疫原性,诱导T细胞产生有效的抗肿瘤免疫应答。 展开更多

关键词 h4-1BBL 基因转染 抗肿瘤免疫应答

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白细胞介素17对结核病患者中性粒细胞凋亡的影响 被引量：4

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作者 姜丽娜 姚春艳 +1 位作者 金齐力 李柏青 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期833-836,共4页

目的 探讨白细胞介素-17（IL-17）对结核病患者外周血中性粒细胞（PMN）凋亡的影响以及可能涉及的信号通路。方法 取结核病患者和健康人外周血PMN培养0-24 h, annexinⅤ染色后流式细胞术检测PMN凋亡率; 或加不同浓度IL-17刺激培养24 h... 目的 探讨白细胞介素-17（IL-17）对结核病患者外周血中性粒细胞（PMN）凋亡的影响以及可能涉及的信号通路。方法 取结核病患者和健康人外周血PMN培养0-24 h, annexinⅤ染色后流式细胞术检测PMN凋亡率; 或加不同浓度IL-17刺激培养24 h再检测PMN凋亡率; 或用MAPK特异性抑制剂U0126预处理30 min 后, 再加IL-17培养24 h后检测PMN的凋亡。结果 结核病患者和正常人PMN凋亡率均随培养时间延长而增加（P〈0.05）, 结核病患者PMN在0、6、12、24 h 时的annexin Ⅴ＋细胞分别为（4.49±1.39）%、（21.89±2.90）%、39.96±4.15）%、（68.35±7.01）%, 均分别高于正常人组的（2.65±0.75）%、（11.00 ±1.72）%、（25.84±3.90）%, （45.59±4.10）%（P〈0.05）。而经IL-17刺激后, 结核病患者与正常人PMN的凋亡率, 在IL-17 0.5 μg/L组, 分别为（59.81±7.19）%和（34.65 ±4.79）%; 在IL-17 5 μg/L组, 分别为（51.62±6.91）%和（29.04±3.62）%; 均低于未加IL-17对照组（68.35±7.01）%和（45.59±4.10）%（P〈0.05）; 而在IL-17 50 μg/L组, 凋亡率则分别达到（76.04±5.59）%和（53.24±4.62）%, 明显高于对照组（P〈0.05）。预先用U0126处理, 可大部分阻断IL-17对结核病患者和正常人PMN凋亡的抑制作用。结论 结核病患者和正常人PMN凋亡率均随培养时间延长而增加, 且结核病患者PMN凋亡率高于正常人。IL-17较低浓度延迟凋亡, 较高浓度促进凋亡。IL-17抑制PMN凋亡的作用和ERK途径有关。 展开更多

关键词 结核 中性粒细胞 白细胞介素-17 凋亡

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