刺激人γδT细胞增殖的结核杆菌多肽抗原的生物学特性分析 被引量：10

1

作者 陈勇 吕合作 +1 位作者 胡建国 李柏青 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期121-123,共3页

目的 :分析可刺激人γδT细胞增殖的结核杆菌多肽抗原(Mtb Ag)的某些生物学特性。方法 :以结核杆菌分泌蛋白与经透析或链霉蛋白酶处理的Mtb Ag体外分别刺激人外周血单个核细胞 (PBMC)增殖 ,培养 10d时 ,采用流式细胞仪分析细胞的表型。... 目的 :分析可刺激人γδT细胞增殖的结核杆菌多肽抗原(Mtb Ag)的某些生物学特性。方法 :以结核杆菌分泌蛋白与经透析或链霉蛋白酶处理的Mtb Ag体外分别刺激人外周血单个核细胞 (PBMC)增殖 ,培养 10d时 ,采用流式细胞仪分析细胞的表型。结果 :透析后的Mtb Ag刺激γδT细胞增殖的活性未见明显降低 ;而经链霉蛋白酶处理的Mtb Ag促进γδT细胞增殖的活性则显著下降。另外 ,与结核杆菌分泌蛋白相比较 ,Mtb Ag刺激γδT细胞增殖的活性显著增强。 结论 :Mtb Ag中可刺激人γδT细胞增殖的成分是一种相对分子质量 (Mr)大于 10 0 0 0、非分泌性。 展开更多

关键词 ΓΔT细胞 细胞增殖 结核杆菌 多肽抗原 生物学特性

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康莱特注射液对肿瘤恶病质实验模型的细胞免疫功能影响 被引量：18

2

作者 邓松华 徐振山 +1 位作者 刘爱国 张宝霆 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第5期445-447,共3页

目的探讨癌症恶病质时机体细胞免疫功能变化及康莱特（kanglaite，KLT）对癌症恶病质的治疗作用。方法建立T739小鼠癌症恶病质模型，观察KLT对模型鼠细胞免疫功能的作用。结果KLT可明显降低小鼠血清中肿瘤坏死因子（TNF-α）水平，并可... 目的探讨癌症恶病质时机体细胞免疫功能变化及康莱特（kanglaite，KLT）对癌症恶病质的治疗作用。方法建立T739小鼠癌症恶病质模型，观察KLT对模型鼠细胞免疫功能的作用。结果KLT可明显降低小鼠血清中肿瘤坏死因子（TNF-α）水平，并可提高NK细胞活性和促进小鼠脾淋巴细胞增殖。结论康莱特对小鼠癌症恶病质时受损的细胞免疫功能有较好的恢复作用。 展开更多

关键词 肿瘤恶病质 药物疗法 康莱特 细胞免疫功能

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microRNA-204在鼻咽癌中的表达及生物学意义研究 被引量：5

3

作者 蒋成义 汪洪涛 +2 位作者 周蕾 江涛 许亚佳 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期822-826,共5页

目的:研究微小RNA 204(microRNA-204,miR-204)在鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma,NPC)中的表达情况及生物学意义。方法:收集2012年3月至2014年3月间于我院耳鼻喉头颈外科行组织病理活检的NPC组织及对应癌旁鼻黏膜组织共43例,运用q RT-... 目的:研究微小RNA 204(microRNA-204,miR-204)在鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma,NPC)中的表达情况及生物学意义。方法:收集2012年3月至2014年3月间于我院耳鼻喉头颈外科行组织病理活检的NPC组织及对应癌旁鼻黏膜组织共43例,运用q RT-PCR技术检测miR-204在NPC组织及癌旁组织中的表达水平,统计分析miR-204表达水平与患者临床病理资料间的相关性;免疫组化检测鼻咽癌组织中miR-204下游潜在靶点Bcl-2及SIRT1蛋白的表达水平,统计分析Bcl-2及SIRT1蛋白与miR-204表达间的相关性;采用人工合成的miR-204模拟物(miR-204 mimics)转染人鼻咽癌CNE-2细胞,分别采用q RT-PCR及Western blot检测转染后Bcl-2及SIRT1 mRNA和蛋白的表达变化。结果:miR-204在NPC组织中表达水平显著低于对应癌旁鼻黏膜组织(P<0.05);miR-204低表达与肿瘤淋巴结转移(P<0.05)及高TNM分期(Ⅲ+Ⅳ期,P<0.05)显著相关;在鼻咽癌组织中miR-204与其下游潜在靶点Bcl-2及SIRT1的表达呈显著负相关关系(P<0.05),miR-204转染人鼻咽癌CNE-2细胞后可显著降低细胞内Bcl-2及SIRT1 mRNA和蛋白的表达水平(P<0.05)。结论:miR-204在鼻咽癌组织中表达下调并与肿瘤恶性临床病理特征有关,miR-204可能通过下调Bcl-2及SIRT1的表达来抑制鼻咽癌的发生、发展过程。 展开更多

关键词 MicroRNA-204 鼻咽癌 BCL-2 SIRT1

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结核病DNA疫苗pVAX1/ESAT-6的构建、鉴定及免疫效应评价 被引量：4

4

作者 王雪梅 王英 +5 位作者 薛玉芹 陈勇 陶志勇 夏惠 唐洁 方强 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期945-950,共6页

目的构建结核病DNA疫苗pVAX1/ESAT-6并探讨其诱导的免疫效应。方法将扩增自结核杆菌基因组的ESAT-6基因装入pVAX1载体构建pVAX1/ESAT-6重组质粒;经酶切、测序鉴定后,利用阳离子聚合物介导将重组质粒pVAX1/ESAT-6转染Hela细胞,分别以RT-... 目的构建结核病DNA疫苗pVAX1/ESAT-6并探讨其诱导的免疫效应。方法将扩增自结核杆菌基因组的ESAT-6基因装入pVAX1载体构建pVAX1/ESAT-6重组质粒;经酶切、测序鉴定后,利用阳离子聚合物介导将重组质粒pVAX1/ESAT-6转染Hela细胞,分别以RT-PCR法检测ESAT-6 mRNA的表达、间接免疫荧光法检测ESAT-6蛋白表达。重组质粒经体内电转染免疫小鼠后,采用ELISA法测定小鼠血清中IFN-γ及抗ESAT-6特异性抗体IgG的水平;流式细胞术检测小鼠淋巴细胞增殖水平;ELISPOT检测产生IFN-γ的淋巴细胞频数。结果构建的重组质粒pVAX1/ESAT-6经双酶切于3000 bp和300 bp处各见1条带,测序结果显示插入序列与ESAT-6基因序列无差异。重组质粒转染Hela细胞后,RT-PCR产物经琼脂糖凝胶电泳于约300 bp处见目的条带,间接免疫荧光检测显示特异性绿色荧光。重组质粒免疫小鼠后,血清中抗ESAT-6特异性抗体IgG水平较对照组(空质粒组和生理盐水对照组)明显升高;血清中IFN-γ水平、小鼠脾淋巴细胞增殖水平及产生IFN-γ的淋巴细胞数明显均高于对照组(空质粒组和生理盐水对照组)。结论成功构建了结核病DNA疫苗pVAX1/ESAT-6,该疫苗可有效诱导小鼠产生特异性细胞免疫和体液免疫效应。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 ESAT-6 DNA疫苗 细胞免疫 体液免疫

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miR-346在鼻咽癌中的表达及生物学功能 被引量：2

5

作者 蒋成义 汪洪涛 +2 位作者 江涛 许亚佳 夏林 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期833-837,共5页

目的:探讨miR-346在鼻咽癌中的表达及在鼻咽癌中的生物学功能。方法:收集63例鼻咽癌组织以及34例鼻咽部非癌组织标本,Real-time PCR检测组织和6株人鼻咽癌细胞系及1株人正常鼻咽部永生化上皮细胞株NP69中miR-346表达量,选取人鼻咽癌细... 目的:探讨miR-346在鼻咽癌中的表达及在鼻咽癌中的生物学功能。方法:收集63例鼻咽癌组织以及34例鼻咽部非癌组织标本,Real-time PCR检测组织和6株人鼻咽癌细胞系及1株人正常鼻咽部永生化上皮细胞株NP69中miR-346表达量,选取人鼻咽癌细胞系中表达量居中的两种细胞系,并转染miR-346 inhibitor,设置对照组(NC组)并转染阴性对照质粒,Real-time PCR检测两种细胞系转染miR-346 inhibitor和对照组miR-346表达量,细胞增殖、凋亡分别采用Brdu-ELISA和流式细胞术检测,Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭。结果:与鼻咽非癌组织比较,鼻咽癌组织中miR-346表达量显著升高(P=0.000);以正常人鼻咽部上皮细胞NP69比较,各鼻咽癌细胞株中miR-346相对表达量均显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。选择6种鼻咽癌细胞株中miR-346表达量居中的两种,分别为CNE-1和CNE-2,转染miR-346 inhibitor后,两种鼻咽癌细胞株miR-346相对表达量均显著降低,与NC组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。两种鼻咽癌细胞转染miR-346inhibitor下调miR-346表达后鼻咽癌细胞的增殖受到抑制,均在转染第3天差异具有统计学意义(P<0.05)。下调miR-346表达后鼻咽癌细胞CNE-1和CNE-2的凋亡显著增加,迁移细胞数和侵袭细胞数显著降低,与NC组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-346在鼻咽癌中高表达,下调miR-346表达会抑制鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭,促进凋亡,miR-346可能作为一种癌基因在鼻咽癌的发生和发展中发挥重要的作用。 展开更多

关键词 miR-346 鼻咽癌 增殖 凋亡 迁移 侵袭

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真核表达的重组猪单链IL-12生物学活性的研究 被引量：2

6

作者 王雪梅 袁远英 +3 位作者 方强 夏惠 孙新 李柏青 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期691-695,共5页

目的:真核表达重组猪单链IL-12(pscIL-12)并鉴定表达的pscIL-12的生物学活性。方法:采用梭华-SofastTM将pcDNA3.1(+)-pscIL-12转入CHO-K1细胞,ELISA法测定细胞培养上清中pscIL-12的表达水平;MTT法检测细胞培养上清对NK细胞杀伤作用的影... 目的:真核表达重组猪单链IL-12(pscIL-12)并鉴定表达的pscIL-12的生物学活性。方法:采用梭华-SofastTM将pcDNA3.1(+)-pscIL-12转入CHO-K1细胞,ELISA法测定细胞培养上清中pscIL-12的表达水平;MTT法检测细胞培养上清对NK细胞杀伤作用的影响;ELISA法测定细胞培养上清刺激人PBMC分泌IFN-γ的水平;流式细胞术(FCM)检测细胞培养上清对人淋巴母细胞增殖水平的作用。结果:融合基因pscIL-12在CHO-K1细胞中表达产物pscIL-12融合蛋白含量较高;生物学活性鉴定表明:pscIL-12融合蛋白可增强NK细胞活性、提高IFN-γ的产生和促进人淋巴母细胞的增殖。结论:转染pcDNA3.1(+)-pscIL-12质粒的CHO-K1细胞成功表达了具有良好生物学活性的pscIL-12。 展开更多

关键词 白细胞介素-12 融合基因 真核表达

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人工合成的siRNA转染外周血活化T淋巴细胞方法学研究 被引量：2

7

作者 葛晓松 薛祝平 李柏青 《生物学杂志》 CAS CSCD 2009年第1期79-80,95,共3页

观察人工合成siRNA与脂质体DMRIE-C Reagent的复合物对人外周血活化T淋巴细胞转染效果。人外周血标本中分离的外周血单个核细胞用抗原和IL-2刺激扩增培养,产生活化的T淋巴细胞,用不同配比浓度的荧光标记的siRNA-FAM与脂质体的复合物转... 观察人工合成siRNA与脂质体DMRIE-C Reagent的复合物对人外周血活化T淋巴细胞转染效果。人外周血标本中分离的外周血单个核细胞用抗原和IL-2刺激扩增培养,产生活化的T淋巴细胞,用不同配比浓度的荧光标记的siRNA-FAM与脂质体的复合物转染活化后的T淋巴细胞,分别采用转染一次和连续转染两次的方法,并在转染后4h,分别取样本,通过流式细胞测定技术,比较两种方法的转染效率,并筛选出最佳转染效率剂量配比。活化T细胞用转染一次和两次的方法后,平均转染阳性率分别为(12.5±0.64)%和(50.37±6.77)%。采用连续两次转染的方法进行转染,转染效率要明显高于一次转染法。 展开更多

关键词 SIRNA 转染 脂质体

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共刺激分子4-1BBL高表达与肿瘤免疫逃逸关系的研究 被引量：2

8

作者 张克昌 吴俊英 李柏青 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期903-907,共5页

目的:观察高表达4-1BBL的HL-60细胞培养上清液对人淋巴细胞活化、增殖、IL-2分泌及凋亡诱导作用的影响;分析阻断4-1BB/4-1BBL信号对肿瘤细胞增殖、细胞因子分泌的影响,揭示肿瘤的免疫逃逸机制。方法:将不同浓度的HL-60肿瘤细胞培养上清... 目的:观察高表达4-1BBL的HL-60细胞培养上清液对人淋巴细胞活化、增殖、IL-2分泌及凋亡诱导作用的影响;分析阻断4-1BB/4-1BBL信号对肿瘤细胞增殖、细胞因子分泌的影响,揭示肿瘤的免疫逃逸机制。方法:将不同浓度的HL-60肿瘤细胞培养上清液与体外分离的人淋巴细胞共培养,MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测免疫表型、细胞因子分泌及细胞凋亡;ELISA法检测IL-2分泌水平;用抗4-1BBL单抗作用后,观察对HL-60细胞增殖及细胞因子分泌的影响。结果:不同的肿瘤细胞株表面均有4-1BBL表达,但表达水平不同;HL-60细胞培养上清液对淋巴细胞活化没有明显影响(P>0.05),但能明显抑制淋巴细胞增殖(P<0.01)和IL-2分泌(P<0.05),诱导淋巴细胞凋亡(P<0.05)。抗4-1BBL单抗能抑制HL-60细胞增殖和TGF-β的分泌(P<0.05)。结论:HL-60细胞高表达4-1BBL具有反向调节作用,可通过促进肿瘤细胞增殖及TGF-β分泌等抑制淋巴细胞功能,从而使之逃避宿主的免疫监视。 展开更多

关键词 肿瘤细胞 淋巴细胞 4-1BBL 免疫逃逸

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纯化的结核杆菌多肽抗原刺激人γδT细胞的效应分析 被引量：9

9

作者 陈勇 吕合作 +2 位作者 李柏青 王伟 张海峰 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期661-664,共4页

目的 :探讨从结核杆菌多肽抗原 (Mtb Ag)纯化的多肽 (C主肽 )对人新鲜外周血γδT细胞的促增殖效应以及对已活化扩增的T细胞再次刺激的激活效应。方法 :采用不同剂量的C主肽体外刺激健康人外周血PBMC ,培养 10天时经流式细胞仪检测细胞... 目的 :探讨从结核杆菌多肽抗原 (Mtb Ag)纯化的多肽 (C主肽 )对人新鲜外周血γδT细胞的促增殖效应以及对已活化扩增的T细胞再次刺激的激活效应。方法 :采用不同剂量的C主肽体外刺激健康人外周血PBMC ,培养 10天时经流式细胞仪检测细胞表型 ;另外以γδT细胞活化标志分子CD6 9的表达为指标 ,分析C主肽对已被Mtb Ag激活扩增 13天的γδT细胞再次刺激的激活效应。同时以MTT法检测C主肽的再刺激对已活化扩增的γδT细胞的促增殖活性。结果 :结核杆菌C主肽对人新鲜的γδT细胞具有显著扩增效应 ;当C主肽再刺激已经活化的γδT细胞时 ,可使其显著表达CD6 9分子 ,同时对γδT细胞具有显著促增殖活性。结论 :结核杆菌C主肽可能是Mtb 展开更多

关键词 ΓΔT细胞 结核杆菌 刺激 多肽抗原 扩增 增殖活性 CD69 结论 培养 分子

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IL-12增强结核病患者中性粒细胞吞噬和杀伤结核杆菌的活性 被引量：19

10

作者 姜丽娜 姚春艳 +2 位作者 金齐力 贺文欣 李柏青 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1191-1194,共4页

目的:观察IL-12对结核病患者外周血中性粒细胞(PMN)对结核分枝杆菌(M.tb)吞噬和杀伤功能的影响。方法:结核病患者和正常人外周血与异硫氰酸荧光素(FITC)标记的M.tb共同孵育不同时间后,用流式细胞术(FCM)检测PMN对M.tb的吞噬率;结核病患... 目的:观察IL-12对结核病患者外周血中性粒细胞(PMN)对结核分枝杆菌(M.tb)吞噬和杀伤功能的影响。方法:结核病患者和正常人外周血与异硫氰酸荧光素(FITC)标记的M.tb共同孵育不同时间后,用流式细胞术(FCM)检测PMN对M.tb的吞噬率;结核病患者和正常人外周血均加入2'7'二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)作用,同时加或者不加M.tb共同孵育不同时间后,用FCM检测PMN的活化率并计算活性氧(ROS)产生量;不同浓度IL-12预先作用外周血后,再用上述方法检测PMN对M.tb吞噬率,活化率及产生ROS的变化。结果:结核病患者和正常人PMN对M.tb吞噬率,PMN活化率和ROS产生均随时间延长而增加,但结核病患者5 min吞噬率(51.82±6.93)%高于正常人(47.20±4.26)%(P<0.05);IL-12预先作用后,结核病患者和正常人PMN吞噬率、PMN活化率和ROS的产生均随浓度增大而显著增加,两者之间无显著性差异。结论:结核病患者外周血PMN对M.tb的吞噬功能以及ROS产生与正常人无显著性差异,仅早期吞噬率较高。IL-12略增强PMN吞噬和产生ROS的反应能力。 展开更多

关键词 结核 中性粒细胞 吞噬 活性氧 IL-12

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刺激人γδ^+ T细胞增殖的结核杆菌多肽抗原的纯化与活性鉴定 被引量：13

11

作者 陈勇 吕合作 +4 位作者 胡建国 候彦强 张海峰 李柏青 何海辉 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期86-89,共4页

目的:纯化可刺激人γδ+ T细胞增殖的结核杆菌耐热多肽抗 原。方法:采用快速蛋白液相色谱仪(FPLC)S-100分子筛层析柱,对结核杆菌耐热抗原(Mtb-Ag)初步分离。将获得的结核杆菌耐热Mr低的多肽抗原(Mtb-LW-Ag)洗脱峰,分别再经FPLC Mono Q... 目的:纯化可刺激人γδ+ T细胞增殖的结核杆菌耐热多肽抗 原。方法:采用快速蛋白液相色谱仪(FPLC)S-100分子筛层析柱,对结核杆菌耐热抗原(Mtb-Ag)初步分离。将获得的结核杆菌耐热Mr低的多肽抗原(Mtb-LW-Ag)洗脱峰,分别再经FPLC Mono Q离子交换层析柱进一步纯化,并且采用流式细胞仪对获得的Mtb-LW-Ag进行刺激γδ+ T细胞增殖活性的测定。结果:Mtb-Ag经FPLC S-100柱可分离出1个大分子蛋白峰A和3个M,低的多肽峰(B,C,D)。Mr低的多肽峰分别经Mono Q柱层析,鉴定出B峰含有6个主峰,C峰含有1个主峰,D峰含有8个主峰。对Mtb-LW-Ag及其纯化多肽进行活性检测,发现多肽峰B和C以及纯化多肽B-Ⅲ和C-主肽均可显著刺激γδ+ T细胞扩增。结论:利用FPLC法可快速高效地从Mtb-Ag中纯化出多种Mr低的多肽,而且其中的B-Ⅲ多肽和C-主肽可能是促进γδ+ T细胞活化增殖的主要多肽。 展开更多

关键词 γδ^+T细胞 结核杆菌 多肽抗原 纯化 活性鉴定

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基于结核杆菌耐热抗原小分子多肽刺激人外周血T细胞产生TNF-α和IFN-γ鉴别肺结核和潜伏性结核感染 被引量：20

12

作者 唐洁 陈策 +4 位作者 查成 常见荣 方强 王兆华 李柏青 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期1442-1447,共6页

目的研究结核杆菌耐热抗原小分子多肽(Mtb-HAg-10k)刺激人外周血T细胞产生细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-γ(IFN-γ)的作用特点及肺结核患者和潜伏性感染者IFN-γ产生细胞的数量差异,初步探讨Mtb-HAg-10k作为诊断抗原鉴别肺... 目的研究结核杆菌耐热抗原小分子多肽(Mtb-HAg-10k)刺激人外周血T细胞产生细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-γ(IFN-γ)的作用特点及肺结核患者和潜伏性感染者IFN-γ产生细胞的数量差异,初步探讨Mtb-HAg-10k作为诊断抗原鉴别肺结核和潜伏性结核感染的可行性。方法以超滤离心法获得的Mtb-HAg-10k为刺激剂作用于人外周血单个核细胞(PBMCs),并以Mtb-HAg、植物血凝素PHA作为对照,用多色流式细胞术检测T细胞亚群中TNF-α和IFN-γ产生细胞比例,酶联免疫斑点法检测肺结核患者和潜伏性感染者PBMCs中IFN-γ产生细胞数量。结果流式细胞术检测人外周血Mtb-HAg-10k特异性γδT细胞中TNF-α产生细胞比例显著高于IFN-γ产生细胞比例(P<0.01);与PHA刺激组相比,γδT细胞中TNF-α和IFN-γ产生细胞比例增高(P<0.01),而αβT细胞中TNF-α和IFN-γ产生细胞比例显著降低;酶联免疫斑点法检测Mtb-HAg-10k刺激的健康者PBMCs中IFN-γ产生细胞数量低于Mtb-HAg刺激组和PHA对照组(P<0.01);肺结核患者IFN-γ产生细胞数量低于潜伏性结核感染者(P<0.01)。结论以Mtb-HAg-10K为刺激剂可使人外周血γδT细胞优势产生TNF-α和IFN-γ,通过酶联免疫斑点法检测PBMCs中IFN-γ产生细胞数量差异有助于鉴别肺结核和潜伏性结核感染。 展开更多

关键词 结核杆菌耐热抗原 ΓΔT细胞 肿瘤坏死因子-Α 干扰素-Γ 肺结核 潜伏性结核感染

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颗粒外排与Fas/Fas配体途径在人γδT细胞的肿瘤细胞毒活性中的作用 被引量：7

13

作者 胡建国 侯彦强 +1 位作者 陈勇 李柏青 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2001年第4期260-263,共4页

目的 :探讨结核杆菌抗原 (Mtb Ag)特异性活化的γδT细胞杀伤肿瘤细胞的细胞毒活性机制。 方法 :用Mtb Ag刺激正常人PBMC以诱导γδT细胞扩增并用磁珠阳性分选法获得高纯度γδT细胞 ;用RT PCR法检测γδT细胞穿孔素、颗粒酶B和FasLmRN... 目的 :探讨结核杆菌抗原 (Mtb Ag)特异性活化的γδT细胞杀伤肿瘤细胞的细胞毒活性机制。 方法 :用Mtb Ag刺激正常人PBMC以诱导γδT细胞扩增并用磁珠阳性分选法获得高纯度γδT细胞 ;用RT PCR法检测γδT细胞穿孔素、颗粒酶B和FasLmRNA的表达 ;用流式细胞仪检测γδT细胞表面Fas配体 (FasL)分子以及几种肿瘤细胞表面Fas分子的表达 ;用MTT法测定γδT细胞对肿瘤细胞的细胞毒活性 ,观察穿孔素 /颗粒酶途径的阻断剂concanamycinA (CMA)和Fas/FasL途径的抑制剂brefeldinA(BFA)对γδT细胞细胞毒活性的影响。结果 :经Mtb Ag激活和扩增的γδT细胞高表达穿孔素、颗粒酶B和FasLmRNA ;Mtb Ag活化的γδT细胞中 2 2 .4%表达FasL分子 ;CMA能明显抑制γδT细胞对肿瘤细胞 (尤其对Fas低表达的K5 6 2和PG)的杀伤 ,BFA能强烈抑制γδT细胞杀伤Fas高表达的Raji和A375。 结论 :Mtb Ag活化的γδT细胞杀伤Fas低表达的靶细胞时主要通过颗粒外排途径 ,杀伤Fas高表达的靶细胞时 ,颗粒外排和FasL均起作用。 展开更多

关键词 ΓΔT细胞 细胞毒活性 穿孔毒 颗粒酶B Fas/FasL配体 结核杆菌抗原 肿瘤细胞

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结核杆菌抗原特异性激发人γδT细胞活化信号涉及Ras/Erk途径 被引量：7

14

作者 侯彦强 李柏青 +1 位作者 胡建国 陈勇 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第8期530-533,共4页

目的 :探讨Ras Erk通路是否参与结核杆菌低分子多肽抗原 (Mtb Ag)启动的γδT细胞活化信号转导途径。方法 :分离获取PBMC ,用佛波醇酯 (PMA)和离子霉素 (IM) ,CD3mAb或Mtb Ag刺激不同时间 ,或PBMC先经PD980 5 9处理后再刺激培养 ;用荧... 目的 :探讨Ras Erk通路是否参与结核杆菌低分子多肽抗原 (Mtb Ag)启动的γδT细胞活化信号转导途径。方法 :分离获取PBMC ,用佛波醇酯 (PMA)和离子霉素 (IM) ,CD3mAb或Mtb Ag刺激不同时间 ,或PBMC先经PD980 5 9处理后再刺激培养 ;用荧光单抗染色后在流式细胞仪测定细胞CD6 9分子的表达 ;计数培养扩增 10天的细胞数量。结果 :PBMC用PMA +IM刺激 6小时 ,总T细胞和γδT细胞中的CD6 9表达均达高峰 (均 >99% ) ,用CD3mAb刺激 2 4小时 ,均达高峰 (均在 5 5 %左右 ) ,用Mtb Ag刺激 2 4小时 ,亦均达高峰 ,但总T细胞和γδT细胞中CD6 9分别为 16 .0 %和 75 2 % ;用PD980 5 9预处理PBMC ,可明显抑制Mtb Ag激活的γδT细胞CD6 9表达和γδT细胞的增殖。结论 :Mtb Ag可特异性激活γδT细胞 ,其活化信号转导需通过Ras Erk通路。 展开更多

关键词 结核杆菌 抗原特异性 ΓΔT细胞 活化信号 Ras/Erk

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协同刺激分子4-1BB和CD28对人外周血不同T细胞亚群的激活作用 被引量：6

15

作者 吴俊英 钱峰 +2 位作者 吕合作 王伟 李柏青 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期533-536,共4页

目的 :探讨 4 1BB/ 4 1BBL协同刺激信号在CD4 + 和CD8+ T细胞活化、增殖中的作用 ,并与CD2 8/B7信号作比较。方法 :用抗CD3单抗 (mAb)刺激人外周血单个核细胞 (PBMC)。用阻断型抗 4 1BBLmAb和抗CD80mAb ,分别阻断 4 1BB/ 4 1BBL和C... 目的 :探讨 4 1BB/ 4 1BBL协同刺激信号在CD4 + 和CD8+ T细胞活化、增殖中的作用 ,并与CD2 8/B7信号作比较。方法 :用抗CD3单抗 (mAb)刺激人外周血单个核细胞 (PBMC)。用阻断型抗 4 1BBLmAb和抗CD80mAb ,分别阻断 4 1BB/ 4 1BBL和CD2 8/B7 1协同刺激信号。利用流式细胞术 (FCM)检测CD4 + T细胞、CD8+ T细胞的增殖率、CD8/CD4T细胞的比值变化和细胞分泌IFN γ的情况。结果 :用抗 4 1BBLmAb和抗CD80mAb阻断相应的协同刺激途径后 ,CD4 + 和CD8+ T细胞的增殖和细胞分泌IFN γ的水平均明显下降。培养 8d,抗CD3mAb单独刺激组CD8/CD4T细胞的比值为 1.98± 0 .0 6 ;抗 4 1BBLmAb阻断组CD8/CD4T细胞的比值下降为 0 .96±0 .0 3;而在抗CD80mAb阻断组 ,其比值上升为 2 .6 9± 0 .16。结论 :4 1BB分子可在CD4 + T细胞和CD8+ T细胞的活化、增殖中提供协同刺激信号。 4 1BB分子所介导的协同刺激信号 ,在CD8+ T细胞活化及增殖中发挥了更为重要的作用 ;而CD2 8分子所介导的协同刺激信号则更有利于CD4 + 展开更多

关键词 4-1BB CD28 增殖 活化

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结核分枝杆菌耐热抗原激活的人γδT细胞Th2极性分化特征以及T-bet/GATA-3对分化的调控作用 被引量：7

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作者 朱安友 吕合作 +3 位作者 张伦军 胡建国 王凤超 李柏青 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期72-76,共5页

目的研究结核杆菌耐热抗原(MTB-HAg)激活的人外周血γδT细胞Th2极性分化特点和表达于T细胞中的T盒(T-bet)和GATA结合蛋白3(GATA-3)转录因子的调控作用。方法用MTB-HAg刺激人外周血单个核细胞(PBMC)获得MTB-HAg激活的T细胞(MTBAT),分别... 目的研究结核杆菌耐热抗原(MTB-HAg)激活的人外周血γδT细胞Th2极性分化特点和表达于T细胞中的T盒(T-bet)和GATA结合蛋白3(GATA-3)转录因子的调控作用。方法用MTB-HAg刺激人外周血单个核细胞(PBMC)获得MTB-HAg激活的T细胞(MTBAT),分别在中性条件和Th2极化条件培养后,再经10 ng/m L佛波醇酯(PMA)、500 ng/m L离子霉素(ionomycin)和2.5μmol/L莫能菌素(monensin)刺激6 h,四色荧光抗体染色流式细胞术检测γδT细胞和αβT细胞内细胞因子γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)的表达。流式细胞术分选28 d MTBAT中的γδT细胞和CD4+T细胞,反转录PCR(RT-PCR)检测T-bet和GATA-3 mRNA的表达。结果在中性条件和Th2极化条件下培养的MTBAT中,γδT细胞一直优势表达IFN-γ,而Th2极化条件下,随培养时间增加IFN-γ+αβT细胞百分率显著下降。与中性条件培养比较,Th2极化条件下MTBAT培养28 d,Th0型(IFN-γ+IL-4+)γδT细胞显著增加;而Th2型(IFN-γ-IL-4+)αβT细胞显著增加。RT-PCR结果显示,Th2极化的γδT细胞仍高表达T-bet mRNA,而在CD4+T细胞T-bet mRNA表达被显著下调;同时,GATA-3 mRNA在γδT细胞和CD4+T细胞的表达均显著上调。结论 Th2极化条件下,大部分γδT细胞仍为Th1型,仅部分极性分化为Th0型细胞;Th2极性分化的γδT细胞转录因子T-bet和GATA-3未表现出交互调节功能。 展开更多

关键词 结核杆菌耐热抗原 ΓΔT细胞 Th2极化 T-BET GATA-3

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日本血吸虫(中国大陆株)信号蛋白14-3-3在原核细胞的高效融合表达和特性鉴定 被引量：22

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作者 李德发 沈继龙 +4 位作者 祖莹 汪学龙 王维 郭泽坤 余龙 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2002年第2期50-53,共4页

目的　构建重组质粒pET2 8a -Sj14 - 3- 3,并在大肠杆菌中表达 ,检测表达产物的免疫活性。 方法　用亚克隆技术把Sj14 - 3- 3基因克隆至 pET2 8aT7启动子下游 ,转化大肠杆菌DH5α和BL2 1感受态细胞 ,经IPTG诱导表达 ,SDS -PAGE和Western... 目的　构建重组质粒pET2 8a -Sj14 - 3- 3,并在大肠杆菌中表达 ,检测表达产物的免疫活性。 方法　用亚克隆技术把Sj14 - 3- 3基因克隆至 pET2 8aT7启动子下游 ,转化大肠杆菌DH5α和BL2 1感受态细胞 ,经IPTG诱导表达 ,SDS -PAGE和Westernblot分析。结果　获得pET2 8a -Sj14 - 3- 3重组表达载体 ,SDS -PAGE和Westernblot显示Sj14 - 3- 3基因在 pET2 8a中表达的融合蛋白约为 32 4kDa ,与天然 14 - 3- 3蛋白具有相同的免疫活性。 结论　日本血吸虫信号蛋白14 - 3- 3在原核细胞中得以高效表达 ,表达产物具有免疫活性 。 展开更多

关键词 日本血吸虫 14-3-3蛋白质 原核细胞 融合表达 特性鉴定 信号转导 免疫保护

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肺结核患者外周血中结核分枝杆菌耐热抗原特异性的TNF-α^＋ γδ T细胞数量和亚群分析 被引量：8

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作者 唐洁 陈策 +4 位作者 查成 王兆华 张晨 曾林丽 李柏青 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1527-1531,共5页

目的探讨结核分枝杆菌耐热抗原(MTB-HAg)刺激下,肺结核患者、潜伏性MTB感染者、健康者外周血γδT细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)产生细胞数量的差异。方法采集15例正常成人外周血,根据人MTB感染T细胞酶联免疫斑点诊断试剂盒检测结果分... 目的探讨结核分枝杆菌耐热抗原(MTB-HAg)刺激下,肺结核患者、潜伏性MTB感染者、健康者外周血γδT细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)产生细胞数量的差异。方法采集15例正常成人外周血,根据人MTB感染T细胞酶联免疫斑点诊断试剂盒检测结果分为健康者(n=9)和潜伏性MTB感染者(n=6),另采集肺结核患者外周血(n=12),3组经密度梯度离心法获取外周血单个核细胞(PBMC),用MTB-HAg刺激20 h。收集细胞,流式细胞术检测TCRαβ+T细胞、TCRγδ+T细胞、CD4+αβT细胞、CD8+αβT细胞、TCR-Vδ2+T细胞亚群中产生TNF-α产生细胞的比例。结果肺结核患者外周血γδT细胞中TNF-α产生细胞比例显著低于潜伏性MTB感染者和健康者;肺结核患者外周血Vδ2T细胞中TNF-α产生细胞比例显著低于潜伏性MTB感染者和健康者;肺结核患者外周血中Vδ2T细胞在TNF-α+γδT细胞中所占比例显著低于潜伏性MTB感染者和健康者。结论肺结核患者外周血MTB-HAg特异性γδT细胞及其Vδ2亚群产生细胞因子TNF-α能力显著低于潜伏性MTB感染者和健康者。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌耐热抗原(MTB-HAg) 潜伏性MTB感染 活动性肺结核 γδ T细胞 肿瘤坏死因子α(TNF-α)

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早孕因子对淋巴细胞增殖的影响 被引量：8

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作者 邓松华 苏宝田 徐振山 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期410-413,共4页

目的：探讨早孕因子（ＥＰＦ）活性物对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响及其在胎母免疫中的作用。方法：使用离子交换层析、亲和层析和凝胶过滤技术提纯３～６周孕妇血清中ＥＰＦ；用淋巴细胞转化法观察ＥＰＦ对淋巴细胞的作用。结果：ＥＰＦ... 目的：探讨早孕因子（ＥＰＦ）活性物对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响及其在胎母免疫中的作用。方法：使用离子交换层析、亲和层析和凝胶过滤技术提纯３～６周孕妇血清中ＥＰＦ；用淋巴细胞转化法观察ＥＰＦ对淋巴细胞的作用。结果：ＥＰＦ活性物Ｇ４、Ｇ３及孕血清均能抑制淋巴细胞ＤＮＡ合成，尤以Ｇ４作用更为明显，并呈一定剂量依赖性。结论：ＥＰＦ可能在介导、调控妊娠早期诱导的免疫抑制。 展开更多

关键词 淋巴细胞 免疫抑制 生殖 早孕因子

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新生儿脐带血CD4^＋CD25^high调节性T细胞Foxp3的表达 被引量：8

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作者 唐洁 李柏青 +1 位作者 阮洁 张林杰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期365-367,共3页

目的:检测新生儿脐带血CD4+CD25high调节性T细胞(Treg)数量及胞内转录因子Foxp3的表达,探讨Treg细胞在新生儿期的表达特点。方法:采集新生儿脐带血(n=15)和成人外周血(n=12),密度梯度离心法获取单个核细胞用荧光标记单克隆抗体(mAb)作... 目的:检测新生儿脐带血CD4+CD25high调节性T细胞(Treg)数量及胞内转录因子Foxp3的表达,探讨Treg细胞在新生儿期的表达特点。方法:采集新生儿脐带血(n=15)和成人外周血(n=12),密度梯度离心法获取单个核细胞用荧光标记单克隆抗体(mAb)作表面和胞内染色后,在流式细胞仪上检测CD4+CD25high Treg细胞的数量及其胞内转录因子Foxp3的表达。结果:脐带血Treg细胞占CD3+CD4+T细胞的比例(3.86%±1.63%)明显高于成人外周血(0.87%±0.74%,P<0.01);而脐带血Treg细胞中表达Foxp3的比例明显低于外周血Treg细胞(23.21%±8.9%vs71.3%±11.6%,P<0.01)。结论:虽然新生儿脐带血CD4+CD25high Treg细胞数量明显高于成人外周血,但Foxp3+细胞数量明显低于成年人,提示在功能上可能尚未成熟。 展开更多

关键词 调节性T细胞 转录因子 新生儿脐带血

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