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改变细胞质膜透性对L-脯氨酸生物合成的影响
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作者 吏济平 褚志义 +1 位作者 钮君健 胡英杰 《上海医科大学学报》 CSCD 1991年第1期33-36,共4页
本文研究不同表面活性剂对膜渗透L-脯氨酸的前体——谷氨酸的最佳影响因素及其水平。其中脂肪醇磷酸酯铵盐浓度为0.045%时,利于外源性谷氨酸钠导入细胞,促进L-脯氨酸生成,其产量比对照提高30%左右。
关键词 L-脯氨酸 表面活性剂 谷氨酸
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人参皂苷Rd高产突变株Paecilomyces bainier sp229-7的生长特性和生物转化 被引量:7
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作者 周超群 史训龙 +1 位作者 李继扬 周珮 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期59-62,67,共5页
目的通过研究突变株拟青霉菌sp229-7(Paecilomyces bainiersp229-7)的生长及转化底物情况,探讨突变株转化三七茎叶总皂苷的高效性。方法在不同条件下,运用摇瓶转化法考查菌株生长和转化底物特性;分别采用静息态细胞、胞外酶以及粗酶液,... 目的通过研究突变株拟青霉菌sp229-7(Paecilomyces bainiersp229-7)的生长及转化底物情况,探讨突变株转化三七茎叶总皂苷的高效性。方法在不同条件下,运用摇瓶转化法考查菌株生长和转化底物特性;分别采用静息态细胞、胞外酶以及粗酶液,测定其对底物转化情况。结果菌体12~48 h之间生长最旺盛,36 h加入底物转化率最高,加入底物后72 h转化基本结束,转化产物只有人参皂苷Rd,底物投料量至少可以达到20 mg/mL,克分子转化率达80%以上,转化温度27℃~32℃之间最佳。静息态细胞、胞外酶以及粗酶液都可以将人参皂苷Rb1转化为人参皂苷Rd。结论与文献报道相比,Paecilomyces bainiersp229-7突变株具有良好的底物耐受性和专一性,快速生长的后期是底物投料的最佳时机,Rb1转化为Rd的时间缩短为3 d,投料量至少增加20倍,显著提高了转化效率,可望应用于工业生产。突变株的高转化效率可能与转化酶由细胞内产生并部分分泌到胞外有关,增加了酶与底物接触机会,避免了产物在胞内过量积累。 展开更多
关键词 人参皂苷RD 生物转化 菌株特性 底物耐受 拟青霉菌sp229-7
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D-氨基酸氧化酶在毕赤酵母中的表达及快速纯化 被引量:2
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作者 冯美卿 史训龙 +2 位作者 孙传文 周伟 周珮 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期622-625,共4页
目的建立简便、快速纯化D-氨基酸氧化酶(DAAO)的新方法,以利用高纯度的DAAO转化头孢菌素C制备戊二酰-7-氨基头孢霉烷酸(GL-7ACA)。方法通过基因工程手段,构建N端和C端各镶嵌6个组氨酸的DAAO重组质粒,电转化Pichia pastoris GS115电感受... 目的建立简便、快速纯化D-氨基酸氧化酶(DAAO)的新方法,以利用高纯度的DAAO转化头孢菌素C制备戊二酰-7-氨基头孢霉烷酸(GL-7ACA)。方法通过基因工程手段,构建N端和C端各镶嵌6个组氨酸的DAAO重组质粒,电转化Pichia pastoris GS115电感受态细胞,利用PCR方法筛选阳性转化子,再经甲醇诱导筛选出高表达菌。结果高表达重组菌(PHD12)摇瓶发酵单位达到2 000 IU/L,发酵罐内达到22 500 IU/L。并利用Ni螯合型树脂对表达的DAAO经一步分离纯化,以60%的总收率获得纯化产物。纯化产物保持良好的转化CPC-Na活性。结论利用基因工程表达组氨酸标记蛋白,可简化基因工程的下游工序。 展开更多
关键词 D-氨基酸氧化酶 毕赤酵母 表达 快速纯化
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基因工程酵母菌来源的D-氨基酸氧化酶分离纯化 被引量:2
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作者 史训龙 冯美卿 +2 位作者 贺佳音 袁中一 周珮 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期71-74,85,共5页
目的 以基因工程酵母表达的胞内D-氨基酸氧化酶(DAAO)为原料,通过破细胞,分离纯化DAAO。 方法 采用机械研磨,反复冻溶,超声波等多种方法破细胞,获得粗酶液,硫酸铵分段沉淀。沉淀透析后,经 DEAE Sephadex A-50,DEAE-DE52,Q-sepharose等... 目的 以基因工程酵母表达的胞内D-氨基酸氧化酶(DAAO)为原料,通过破细胞,分离纯化DAAO。 方法 采用机械研磨,反复冻溶,超声波等多种方法破细胞,获得粗酶液,硫酸铵分段沉淀。沉淀透析后,经 DEAE Sephadex A-50,DEAE-DE52,Q-sepharose等离子交换柱进行第一步分离,获得的含酶粗品,再经Sephaciyl S-100分子筛进一步纯化获得电泳纯的DAAO。结果 超声波破壁为最佳的破壁方法,得到的每毫升酶液所含 的酶活力是其他破壁方法的两倍以上,最高达到12 000 U/mi,。两步硫酸铵沉淀能粗分DAAO,50%硫酸铵沉 淀酶回收率可达85%以上。用Q-sepharose、Sephacryl S-100分子筛柱层析两步纯化,酶活力回收率最高可达 90%,SDS-PAGE显示单一蛋白条带。结论 本实验方法能得到电泳纯的DAAO,总回收率约为40%。 展开更多
关键词 S-100 细胞 法能 透析 分离纯化 电泳 表达 硫酸铵沉淀 基因工程酵母 D-氨基酸氧化酶
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抗生素8302-1抗肿瘤作用的实验研究
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作者 金杏泉 陆婉琴 +3 位作者 徐静芳 周珮 贺敏霞 诸志义 《上海医科大学学报》 CSCD 1990年第3期187-190,共4页
抗生素8302-1是从灰色链丝菌-变种培养发酵液中,提取的放线菌素K的同类物。本文从体内和体外观察它的抗肿瘤作甩。结果显示体外对人红白血病K562和小鼠S180细胞有明显细胞毒作用,体内对小鼠S180腹水型有明显抗肿瘤作用,作用与药物浓度... 抗生素8302-1是从灰色链丝菌-变种培养发酵液中,提取的放线菌素K的同类物。本文从体内和体外观察它的抗肿瘤作甩。结果显示体外对人红白血病K562和小鼠S180细胞有明显细胞毒作用,体内对小鼠S180腹水型有明显抗肿瘤作用,作用与药物浓度、剂量和作用时间有明显相关性。腹腔注射急性半数致死量(LD_(50))与8302-1的放线菌素K相仿。结果为进一步扩大临床前药理研究提供实验依据。 展开更多
关键词 抗生素 8302-1 抗肿瘤作用
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那西肽产生菌S.actuosus选育及发酵条件的优化 被引量:6
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作者 万睿 刘晓会 +1 位作者 李继杨 周珮 《复旦学报(医学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第6期579-581,共3页
目的 提高那西肽产量。方法 介绍那西肽产生菌活跃链霉菌S .actuosus(Z10 ) 的诱变育种 ,诱变的方法有紫外线、亚硝基胍及两者的联合诱变 ,并对高发酵单位菌种优化发酵条件和测定其生化曲线。结果 通过紫外线及亚硝基胍联合诱变获得... 目的 提高那西肽产量。方法 介绍那西肽产生菌活跃链霉菌S .actuosus(Z10 ) 的诱变育种 ,诱变的方法有紫外线、亚硝基胍及两者的联合诱变 ,并对高发酵单位菌种优化发酵条件和测定其生化曲线。结果 通过紫外线及亚硝基胍联合诱变获得高产菌株Z12 ,该菌种进行 4次传代试验显示稳定 ,经发酵条件优化后在培养基中添加 2 %黄豆粉 ,0 .0 1%硫酸锰可以提高那西肽产量。菌种Z12 相对于出发菌种Z10 提高那西肽产量达 5 8.9%。 展开更多
关键词 发酵条件 产生菌 亚硝基胍 诱变 黄豆粉 高产菌株 紫外线 联合 菌种 生化
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脑膜脓毒黄杆菌脯氨酸亚氨基肽酶基因亚克隆及表达
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作者 史济平 北薗アナ 《上海医科大学学报》 CSCD 1995年第6期415-418,共4页
脑膜脓毒黄杆菌所产生的脯氨酸亚氨基肽酶基因是亚克隆在E.Coli XLi-blue[载体Bluesoript Ⅱ SK(一)],借助于分析,找到嵌合质粒pFIP-6的物理酶谱,检测到pFIP-6基因克隆有2.4kb碎片(切点位置Hind Ⅲ, pst Ⅰ),对重组株亚氨基肽酶活性进... 脑膜脓毒黄杆菌所产生的脯氨酸亚氨基肽酶基因是亚克隆在E.Coli XLi-blue[载体Bluesoript Ⅱ SK(一)],借助于分析,找到嵌合质粒pFIP-6的物理酶谱,检测到pFIP-6基因克隆有2.4kb碎片(切点位置Hind Ⅲ, pst Ⅰ),对重组株亚氨基肽酶活性进行了分析,pFIP-6基因表达水平比pFIP-1提高了50倍。 展开更多
关键词 脑膜脓毒黄杆菌 脯氨酸 亚氨基肽酶 早老性痴呆
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诺卡菌sp.48原生质体的分离及再生 被引量:1
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作者 贺敏霞 史济平 褚志义 《上海医科大学学报》 CSCD 1989年第3期194-198,共5页
对诺卡菌sp.48原生质体形成和再生的各个方面作了较为详细的研究。由于诺卡菌在细胞壁组成上的特殊性,其原生质体研究的条件不同于其他放线菌。本实验用短小芽胞杆菌产生的胞外碱性蛋白酶B.P或消色肽酶与溶菌酶复合使用可分得10~8~10~9... 对诺卡菌sp.48原生质体形成和再生的各个方面作了较为详细的研究。由于诺卡菌在细胞壁组成上的特殊性,其原生质体研究的条件不同于其他放线菌。本实验用短小芽胞杆菌产生的胞外碱性蛋白酶B.P或消色肽酶与溶菌酶复合使用可分得10~8~10~9个/ml的原生质体,大大超过单用溶菌酶的效果。实验中摸索了甘氨酸的最佳浓度、制备原生质体的最佳菌龄及酶解作用的最适条件。结果提示,诺卡菌原生质体只能在自行设计的Rc再生培养基中再生,加牛血清白蛋白等有利于再生率的提高。原生质体贮存于-20℃比4℃更稳定。再生培养基中高浓度蔗糖影响菌落形态。还用相差显微镜和电镜分别观察了原生质体的形成过程及形态。 展开更多
关键词 诺卡菌 原生质体 再生 分离
全文增补中
诺卡菌降解胆固醇边链的发酵研究
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作者 王黎明 董贞 +2 位作者 史济平 褚志义 钮君健 《上海医科大学学报》 CSCD 1991年第1期37-40,I001,共5页
对诺卡菌SP·61降解胆固醇边链至雄甾1.4-二烯3.17-二酮(ADD)的发酵条件研究,可以选择最佳的发酵条件,提高ADD的转化率。本文就部分培养基成分的改变、通气量、pH、乙醇以及底物诱导等因素进行研究,从而使ADD的克分子转化率提高到35... 对诺卡菌SP·61降解胆固醇边链至雄甾1.4-二烯3.17-二酮(ADD)的发酵条件研究,可以选择最佳的发酵条件,提高ADD的转化率。本文就部分培养基成分的改变、通气量、pH、乙醇以及底物诱导等因素进行研究,从而使ADD的克分子转化率提高到35%(底物浓度为1%,转化时间为84h)。 展开更多
关键词 诺卡菌 胆固醇 发酵 甾体激素
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