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不同批次的重组诱饵型受体创新药物RC28-E1与RC28-E2对视网膜新生血管的药效学比较及机制 被引量：3
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作者 谷中秀 姜静 +6 位作者 黄敏 吴绵绵 郭芳 李慎军 房健民 赵少贞 张琰 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期581-589,共9页
目的探讨不同批次的重组诱饵型受体创新药物RC28-E1与RC28-E2对视网膜新生血管的药效学比较及作用机制。方法选取健康清洁级4日龄C57BL/6J幼鼠60只，应用随机数字表法随机分为正常对照组、血管内皮生长因子（VEGF）＋成纤维细胞生长因子... 目的探讨不同批次的重组诱饵型受体创新药物RC28-E1与RC28-E2对视网膜新生血管的药效学比较及作用机制。方法选取健康清洁级4日龄C57BL/6J幼鼠60只，应用随机数字表法随机分为正常对照组、血管内皮生长因子（VEGF）＋成纤维细胞生长因子2（FGF2）组、VEGF＋FGF2＋RC28-E1组、VEGF＋FGF2＋RC28-E2组、VEGF＋FGF2＋conbercept组、VEGF＋FGF2＋FGF trap组，每组10只。取各组视网膜组织块构建培养体系，加入用饥饿培养基配置的相应因子和药物刺激，正常对照组加饥饿培养基。将各组视网膜组织块进行植物凝集素（Isolectin B4）染色并拍照，计算各组单位血管长度下视网膜血管顶细胞分叉的数量。另选96只健康清洁级7日龄C57BL/6J幼鼠，应用随机数字表法随机分为正常对照组、氧诱导视网膜病变（OIR）模型对照组、OIR＋RC28-E1组、OIR＋RC28-E2组、OIR＋conbercept组和OIR＋FGF trap组，每组16只。正常对照组在常氧下饲养10 d，其余各组在高氧环境中饲养5 d后在常氧状态下再饲养5 d。各组取17日龄鼠视网膜进行Isolectin B4染色并拍照，用计算机软件分析视网膜相对无灌注区面积和新生血管像素。Western blot法检测OIR实验各组视网膜中VEGF和FGF2的蛋白水平。最后，在VEGF和FGF2刺激下的视网膜血管内皮细胞（RF/6A）中，检测给予RC28-E1、conbercept以及FGF trap处理后，细胞的MEK-细胞外调节蛋白激酶（Erk）、蛋白激酶C（PKC）以及蛋白激酶B（Akt）信号传导通路的活性变化。结果视网膜组织块研究结果显示，VEGF＋FGF2＋RC28-E1组、VEGF＋FGF2＋RC28-E2组、VEGF＋FGF2＋conbercept组和VEGF＋FGF2＋FGF trap组中单位血管长度的顶细胞分叉数目均明显少于VEGF＋FGF2组，差异均有统计学意义（均P〈0.001），其中RC28-E1组与RC28-E2组的血管顶细胞分叉数量相似，差异无统计学意义（P＝0.15），但均明显少于VEGF＋FGF2＋conbercept组和VEGF＋FGF2＋FGF trap组，差异均有统计学意义（均P〈0.001）。OIR模型对照组无灌注区相对面积明显大于各药物干预组，差异均有统计学意义（均P〈0.05），OIR＋RC28-E1组与OIR＋RC28-E2组视网膜无灌注区相对面积的比较，差异无统计学意义（P＝0.17），但二者明显小于OIR＋conbercept组和OIR＋FGF trap组，差异均有统计学意义（均P〈0.05）。各干预组新生血管的相对像素值明显低于OIR模型对照组，差异均有统计学意义（均P〈0.001），OIR＋RC28-E1组视网膜新生血管的相对像素值明显低于VEGF＋FGF2＋conbercept组和VEGF＋FGF2＋FGF trap组，差异均有统计学意义（均P〈0.05），但与OIR＋RC28-E2组相比，差异无统计学意义（P＝0.39）。Western blot结果显示，OIR小鼠视网膜中VEGF和FGF2的蛋白表达均较正常对照组显著上调，差异均有统计学意义（均P〈0.001），而RC28-E1和RC28-E2可使其降至正常水平。VEGF和FGF2可诱导RF/6A细胞中的MEK-Erk通路活性增强，而RC28-E1可显著抑制这一通路的过度激活。结论RC28-E1和RC28-E2可在初生小鼠视网膜组织块中抑制血管生成，并减少OIR小鼠模型中视网膜的无灌注区，减轻新生血管生成。药理批次和中试批次的RC28-E在体内外模型中的效果相当，稳定性可靠，且优于临床同类药物conbercept和FGF trap。RC28-E1可能是通过抑制视网膜血管内皮细胞中MEK-Erk通路的过度激活而达到抑制病理性新生血管生成的效果的。 展开更多
关键词 视网膜新生血管 诱饵型受体 碱性成纤维细胞生长因子 血管内皮生长因子 重组蛋白质药物
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不同批次重组诱饵型受体创新药物RC28-E体外药效学比较
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作者 郑嘉琳 杨千惠 +7 位作者 孙靖 张红 姜静 黄敏 李慎军 房建民 李筱荣 张琰 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期908-913,共6页
目的比较不同药理批次重组诱饵型受体创新药物RC28-E的体外药效学,验证工艺变更前后生物治疗药物的效果是否存在差异。方法将RF/6A细胞分为正常对照组、血管内皮生长因子(VEGF)+成纤维细胞生长因子(FGF)组和不同质量浓度RC28-E1组,采用... 目的比较不同药理批次重组诱饵型受体创新药物RC28-E的体外药效学,验证工艺变更前后生物治疗药物的效果是否存在差异。方法将RF/6A细胞分为正常对照组、血管内皮生长因子(VEGF)+成纤维细胞生长因子(FGF)组和不同质量浓度RC28-E1组,采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法筛选出RC28-E1最适作用浓度。将细胞分为正常对照组、VEGF+FGF组、RC28-E1处理组、RC28-E2处理组、康柏西普处理组和FGF trap处理组,分别用无血清正常培养液、含VEGF+FGF无血清培养液、含VEGF+FGF+RC28-E1无血清培养液、含VEGF+FGF+RC28-E2的无血清培养液、含VEGF+FGF+康柏西普无血清培养液以及含VEGF+FGF+FGF trap无血清培养液进行培养。采用CCK-8法检测各组细胞增生率;采用Transwell试验检测各组细胞迁移能力;采用Matrigel实验检测各组细胞管腔形成能力。结果正常对照组、VEGF+FGF组、0.025mg/mlRC28-E1组、0.080mg/ml RC28-E1组和0.240mg/ml RC28-E1组细胞增生率总体比较差异有统计学意义(F=6.601,P=0.012);其中0.080mg/ml RC28-E1组细胞增生率明显低于VEGF+FGF组,差异有统计学意义(P<0.05),以0.080mg/ml为RC28-E最适工作浓度。正常对照组、VEGF+FGF组、RC28-E1处理组、RC28-E2处理组、康柏西普处理组、FGF trap处理组细胞增生率总体比较,差异有统计学意义(F=3.210,P=0.019);其中RC28-E1处理组、RC28-E2处理组和FGF trap处理组的细胞增生率均明显低于VEGF+FGF组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。各组移行细胞数目总体比较差异有统计学意义(F=24.640,P=0.000);其中RC28-E1处理组、RC28-E2处理组、康柏西普处理组及FGF trap处理组移行细胞数均明显低于VEGF+FGF组,差异均有统计学意义(均P=0.000);RC28-E2处理组移行细胞数少于RC28-E1处理组,差异有统计学意义(P=0.002)。各组细胞管腔形成数总体比较,差异有统计学意义(F=9.273,P=0.000),其中RC28-E1处理组、RC28-E2处理组、康柏西普处理组及FGF trap处理组内皮细胞管腔形成数均明显低于VEGF+FGF组,差异均有统计学意义(P=0.003、0.001、0.009、0.018);RC28-E2处理组细胞管腔形成数与正常对照组、RC28-E1处理组和康柏西普处理组相比,差异均无统计学意义(均P>0.05);FGF trap处理组细胞管腔形成数明显高于RC28-E1处理组、RC28-E2处理组、康柏西普组及正常对照组,差异均有统计学意义(P=0.014、0.000、0.008、0.014)。结论在体外VEGF+FGF刺激下,RC28-E对视网膜血管内皮细胞的增生抑制效果优于康柏西普,对管腔形成能力的抑制作用优于FGF trap。不同批次的重组诱饵型受体创新药物在视网膜血管内皮细胞中的效果无显著差异。 展开更多
关键词 细胞增生 细胞移行 管腔成型 血管生成 重组诱饵型受体
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