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细菌体内同源重组构建pAdEasy-1-hNGFβ重组体
被引量：
8
1
作者
王清秀
钟和英
+5 位作者
周青山
王家宁
黄永章
余开峰
马大青
姚尚龙
《华中科技大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第3期287-290,共4页
目的采用细菌内同源重组法高效制备含神经生长因子β基因(hNGFβ)的重组腺病毒质粒。方法hNGFβ自载体pBLAST44hNGFβv02中切出,亚克隆至质粒pBluescriptⅡsk(+)中,形成pBluescriptⅡsk(+)hNGFβ,自pBluescriptⅡsk(+)hNGFβ中酶切出hNG...
目的采用细菌内同源重组法高效制备含神经生长因子β基因(hNGFβ)的重组腺病毒质粒。方法hNGFβ自载体pBLAST44hNGFβv02中切出,亚克隆至质粒pBluescriptⅡsk(+)中,形成pBluescriptⅡsk(+)hNGFβ,自pBluescriptⅡsk(+)hNGFβ中酶切出hNGFβDNA,亚克隆至腺病毒穿梭质粒pShuttleCMV中,形成转移质粒pShuttleCMVhNGFβ,在感受态大肠杆菌BJ5183内与腺病毒骨架质粒pAdEasy1同源重组,得到重组腺病毒载体pAdEasy1hNGFβ。结果线性化的pShuttleCMVhNGFβ转化含pAdEasy1的高效感受态大肠杆菌BJ5183,24h后获得了30%阳性重组质粒克隆,经酶切获得大于20kb的大片段和4.5kb的特征性条带,PCR反应扩增出731bp片段。结论应用细菌内同源重组能快速构建含hNGFβ基因的重组腺病毒载体pAdEasy1hNGFβ,为hNGFβ基因的研究及应用奠定了基础。
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关键词
同源重组
腺病毒
人β神经生长因子
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职称材料
题名
细菌体内同源重组构建pAdEasy-1-hNGFβ重组体
被引量：
8
1
作者
王清秀
钟和英
周青山
王家宁
黄永章
余开峰
马大青
姚尚龙
机构
华中科技大学同济医
学院
附属协和医院
麻醉
科
郧阳医
学院
附属人民医院
麻醉
科
武汉大学人民医院
麻醉
科
英国皇家学院麻醉与重症监护研究室
出处
《华中科技大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第3期287-290,共4页
基金
湖北省自然科学基金资助项目(No.2005ABA080)
湖北省卫生厅青年科技人才基金资助项目(No.QJX200516)
文摘
目的采用细菌内同源重组法高效制备含神经生长因子β基因(hNGFβ)的重组腺病毒质粒。方法hNGFβ自载体pBLAST44hNGFβv02中切出,亚克隆至质粒pBluescriptⅡsk(+)中,形成pBluescriptⅡsk(+)hNGFβ,自pBluescriptⅡsk(+)hNGFβ中酶切出hNGFβDNA,亚克隆至腺病毒穿梭质粒pShuttleCMV中,形成转移质粒pShuttleCMVhNGFβ,在感受态大肠杆菌BJ5183内与腺病毒骨架质粒pAdEasy1同源重组,得到重组腺病毒载体pAdEasy1hNGFβ。结果线性化的pShuttleCMVhNGFβ转化含pAdEasy1的高效感受态大肠杆菌BJ5183,24h后获得了30%阳性重组质粒克隆,经酶切获得大于20kb的大片段和4.5kb的特征性条带,PCR反应扩增出731bp片段。结论应用细菌内同源重组能快速构建含hNGFβ基因的重组腺病毒载体pAdEasy1hNGFβ,为hNGFβ基因的研究及应用奠定了基础。
关键词
同源重组
腺病毒
人β神经生长因子
Keywords
homologous recombination
adenovirus
human nerve growth factor β
分类号
Q784 [生物学—分子生物学]
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作者
出处
发文年
被引量
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1
细菌体内同源重组构建pAdEasy-1-hNGFβ重组体
王清秀
钟和英
周青山
王家宁
黄永章
余开峰
马大青
姚尚龙
《华中科技大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2005
8
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