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启动子串联及改造提高FAD为辅基的葡萄糖脱氢酶在Bacillus subtilis中的表达
被引量：
1
1
作者
张玲
林荣
+2 位作者
宋祖坤
王男
杨海麟
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第8期15-21,共7页
以黄素腺嘌呤二核苷酸(flavin adenine dinucleotide,FAD)为辅基的葡萄糖脱氢酶(glucose dehydrogenase with FAD,FAD-GDH,EC 1.1.99.10),与辅基结合紧密,催化效率高,是临床检测血糖指标的新型诊断用酶。将Burkholderia cepacia的FAD-GD...
以黄素腺嘌呤二核苷酸(flavin adenine dinucleotide,FAD)为辅基的葡萄糖脱氢酶(glucose dehydrogenase with FAD,FAD-GDH,EC 1.1.99.10),与辅基结合紧密,催化效率高,是临床检测血糖指标的新型诊断用酶。将Burkholderia cepacia的FAD-GDH基因(gdh)构建含单启动P_(HpaⅡ)的穿梭质粒p MA5-1,在蛋白酶缺陷型菌株Bacillus subtilis WB600中表达。为了获得该酶的高效表达,采用启动子串联及改造策略考察产酶情况。将4种启动子(P_(amyQ’),P_(43),P_(gsiB),P_(opuaa))分别与质粒上自带的启动子P_(HpaⅡ)串联,结果表明P_(HpaⅡ)-P_(amyQ’)串联组合获得的FAD-GDH胞内酶活最高,为2 497 U/L,是串联前单启动子的2.7倍。为了减少发酵过程中,葡萄糖和甘油对产酶的抑制作用,在串联组合的基础上删去P_(amyQ’)启动子中与碳代谢调控蛋白结合的cre位点,使胞内产酶水平提高至3 626 U/L,说明cre位点的去除能够减少碳代谢产物对启动子转录的抑制。本研究为新型诊断用酶FAD-GDH的菌种改造和工业化生产应用提供参考与借鉴。
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关键词
黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)
葡萄糖脱氢酶
枯草芽孢杆菌
串联启动子
cre位点
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职称材料
题名
启动子串联及改造提高FAD为辅基的葡萄糖脱氢酶在Bacillus subtilis中的表达
被引量：
1
1
作者
张玲
林荣
宋祖坤
王男
杨海麟
机构
江南大学工业
生物
技术教育部重点实验室
苏州盛迪亚生物医药有限公司
出处
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第8期15-21,共7页
基金
江苏省产学研(BY2016022-40)
国家轻工技术与工程一流学科自主课题资助(2018-23)
文摘
以黄素腺嘌呤二核苷酸(flavin adenine dinucleotide,FAD)为辅基的葡萄糖脱氢酶(glucose dehydrogenase with FAD,FAD-GDH,EC 1.1.99.10),与辅基结合紧密,催化效率高,是临床检测血糖指标的新型诊断用酶。将Burkholderia cepacia的FAD-GDH基因(gdh)构建含单启动P_(HpaⅡ)的穿梭质粒p MA5-1,在蛋白酶缺陷型菌株Bacillus subtilis WB600中表达。为了获得该酶的高效表达,采用启动子串联及改造策略考察产酶情况。将4种启动子(P_(amyQ’),P_(43),P_(gsiB),P_(opuaa))分别与质粒上自带的启动子P_(HpaⅡ)串联,结果表明P_(HpaⅡ)-P_(amyQ’)串联组合获得的FAD-GDH胞内酶活最高,为2 497 U/L,是串联前单启动子的2.7倍。为了减少发酵过程中,葡萄糖和甘油对产酶的抑制作用,在串联组合的基础上删去P_(amyQ’)启动子中与碳代谢调控蛋白结合的cre位点,使胞内产酶水平提高至3 626 U/L,说明cre位点的去除能够减少碳代谢产物对启动子转录的抑制。本研究为新型诊断用酶FAD-GDH的菌种改造和工业化生产应用提供参考与借鉴。
关键词
黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)
葡萄糖脱氢酶
枯草芽孢杆菌
串联启动子
cre位点
Keywords
flavin adenine dinucleotide (FAD)
glucose dehydrogenase
Bacillus subtilis
tandem promoter
cre site
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
启动子串联及改造提高FAD为辅基的葡萄糖脱氢酶在Bacillus subtilis中的表达
张玲
林荣
宋祖坤
王男
杨海麟
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2019
1
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