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新一代重组人粒细胞集落刺激因子的工业化发酵、复性和纯化
被引量：
4
1
作者
宋爽
蒋文宏
蒋永平
《中国生物医学工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第4期552-557,共6页
工业化大规模发酵、复性和纯化突变型人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSFa),并测定其体外生物学活性。利用定点突变和DNA重组技术获得突变型G-CSF(rhG-CSFa)。通过40 L发酵罐发酵基因工程菌株获得rhG-CSFa包涵体,经过一系列透析后,通过离子...
工业化大规模发酵、复性和纯化突变型人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSFa),并测定其体外生物学活性。利用定点突变和DNA重组技术获得突变型G-CSF(rhG-CSFa)。通过40 L发酵罐发酵基因工程菌株获得rhG-CSFa包涵体,经过一系列透析后,通过离子交换柱和分子排阻层析进行纯化,并使用高效液相色谱技术对纯化后的rhG-CSFa进行纯度分析。利用G-CSF依赖细胞株(M-NFS-60)测定纯化后的rhG-CSFa体外活性效价。结果表明,rhG-CSFa表达量占全菌蛋白的31.2%,通过优化复性条件,rhG-CSFa复性率达到11.36%,纯化后rhG-CSFa的纯度达到99.11%。体外活性实验显示,与野生型G-CSF相比,rhG-CSFa在相同浓度下能诱导NFS-60细胞株获得更高的细胞增殖率。rhG-CSFa工程菌株能够高表达rhG-CSFa,可用于工业化大规模生产,生产的rhG-CSFa具有较高的生物活性、稳定性和纯度。rhG-CSFa大规模生产的成功为该药物未来的临床运用打下了良好的基础。
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关键词
重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)
发酵
复性
纯化
生物活性
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职称材料
新一代重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSFa)的临床前急性毒性和亚急性毒性研究
被引量：
2
2
作者
范洁
丁欣欣
蒋永平
《复旦学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第1期25-30,共6页
目的研究新一代重组人粒细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte-colony stimulatingfactor a,rhG-CSFa)在不同给药途径和时间下的急性和亚急性毒性。方法 6周龄雌雄各半昆明种小鼠80只,随机均分8组进行急性毒性实验:阴性对照...
目的研究新一代重组人粒细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte-colony stimulatingfactor a,rhG-CSFa)在不同给药途径和时间下的急性和亚急性毒性。方法 6周龄雌雄各半昆明种小鼠80只,随机均分8组进行急性毒性实验:阴性对照组(2组)注射等量生理盐水,其余6组分别由皮下或静脉注射34、345、3 450μg/kg的rhG-CSFa,连续观察生理状态10天。另取6周龄雌雄各半昆明种小鼠50只,随机均分5组进行亚急性毒性实验。对照组注射等量生理盐水,其余各组每次分别皮下注射1.1、11.5、115、1 150μg/kg的rhG-CSFa,连续3周每24h给药一次并观察其生理状态。末次给药24h后处死小鼠,进行解剖学检查,并分别作白细胞计数及制作血涂片和骨髓涂片镜检。结果 (1)急性毒性实验小鼠无明显毒性作用及不良反应。实验组与对照组相比无明显体重差异(P>0.05),个别组体重偏低但生理功能未现异常,10日内未见其死亡;(2)亚急性毒性实验小鼠无明显毒性作用及不良反应,实验组白细胞数量显著增加(P<0.01)。结论 rhG-CSFa对小鼠无明显急性和亚急性毒性作用。
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关键词
重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSFa)
小鼠
急性毒性
亚急性毒性
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职称材料
题名
新一代重组人粒细胞集落刺激因子的工业化发酵、复性和纯化
被引量：
4
1
作者
宋爽
蒋文宏
蒋永平
机构
中国医学科学院北京协和医学院
苏州
方舟
生物医药研发中心
苏州方舟基因药业有限公司
出处
《中国生物医学工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第4期552-557,共6页
基金
国家"重大新药创制"科技重大专项(2009ZX09102-250)
文摘
工业化大规模发酵、复性和纯化突变型人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSFa),并测定其体外生物学活性。利用定点突变和DNA重组技术获得突变型G-CSF(rhG-CSFa)。通过40 L发酵罐发酵基因工程菌株获得rhG-CSFa包涵体,经过一系列透析后,通过离子交换柱和分子排阻层析进行纯化,并使用高效液相色谱技术对纯化后的rhG-CSFa进行纯度分析。利用G-CSF依赖细胞株(M-NFS-60)测定纯化后的rhG-CSFa体外活性效价。结果表明,rhG-CSFa表达量占全菌蛋白的31.2%,通过优化复性条件,rhG-CSFa复性率达到11.36%,纯化后rhG-CSFa的纯度达到99.11%。体外活性实验显示,与野生型G-CSF相比,rhG-CSFa在相同浓度下能诱导NFS-60细胞株获得更高的细胞增殖率。rhG-CSFa工程菌株能够高表达rhG-CSFa,可用于工业化大规模生产,生产的rhG-CSFa具有较高的生物活性、稳定性和纯度。rhG-CSFa大规模生产的成功为该药物未来的临床运用打下了良好的基础。
关键词
重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)
发酵
复性
纯化
生物活性
Keywords
rhG-CSF
fermentation
refold
purification
bioactivity
分类号
R318 [医药卫生—生物医学工程]
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职称材料
题名
新一代重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSFa)的临床前急性毒性和亚急性毒性研究
被引量：
2
2
作者
范洁
丁欣欣
蒋永平
机构
中国医学科学院北京协和医学院
苏州
方舟
生物医药研发中心
苏州方舟基因药业有限公司
出处
《复旦学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第1期25-30,共6页
基金
国家"重大新药创制"科技重大专项基金项目(2009ZX09102-250)
江苏省高技术研究计划项目医药部分(BG20070605)~~
文摘
目的研究新一代重组人粒细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte-colony stimulatingfactor a,rhG-CSFa)在不同给药途径和时间下的急性和亚急性毒性。方法 6周龄雌雄各半昆明种小鼠80只,随机均分8组进行急性毒性实验:阴性对照组(2组)注射等量生理盐水,其余6组分别由皮下或静脉注射34、345、3 450μg/kg的rhG-CSFa,连续观察生理状态10天。另取6周龄雌雄各半昆明种小鼠50只,随机均分5组进行亚急性毒性实验。对照组注射等量生理盐水,其余各组每次分别皮下注射1.1、11.5、115、1 150μg/kg的rhG-CSFa,连续3周每24h给药一次并观察其生理状态。末次给药24h后处死小鼠,进行解剖学检查,并分别作白细胞计数及制作血涂片和骨髓涂片镜检。结果 (1)急性毒性实验小鼠无明显毒性作用及不良反应。实验组与对照组相比无明显体重差异(P>0.05),个别组体重偏低但生理功能未现异常,10日内未见其死亡;(2)亚急性毒性实验小鼠无明显毒性作用及不良反应,实验组白细胞数量显著增加(P<0.01)。结论 rhG-CSFa对小鼠无明显急性和亚急性毒性作用。
关键词
重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSFa)
小鼠
急性毒性
亚急性毒性
Keywords
recombinant human granulocyte-colony stimulating factor a（rhG-CSFa）
mice
acute toxicity
sub-acute toxicity
分类号
R994.1 [医药卫生—毒理学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
新一代重组人粒细胞集落刺激因子的工业化发酵、复性和纯化
宋爽
蒋文宏
蒋永平
《中国生物医学工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012
4
在线阅读
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职称材料
2
新一代重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSFa)的临床前急性毒性和亚急性毒性研究
范洁
丁欣欣
蒋永平
《复旦学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2012
2
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