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DNA微阵列法检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药性 被引量：3
1
作者 赵静 王凤平 +2 位作者 孙清清 杨玉婷 陈蕾 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1651-1654,共4页
目的探讨DNA微阵列法在结核菌耐药基因快速检出中的应用价值。方法应用DNA微阵列法定性检测来源于临床疑似结核病患者痰液样本,检测利福平(RFP)和异烟肼(INH)的3个耐药相关基因rpo B、kat G及inh A基因启动子的野生型及不同突变型;采用B... 目的探讨DNA微阵列法在结核菌耐药基因快速检出中的应用价值。方法应用DNA微阵列法定性检测来源于临床疑似结核病患者痰液样本,检测利福平(RFP)和异烟肼(INH)的3个耐药相关基因rpo B、kat G及inh A基因启动子的野生型及不同突变型;采用BACTECTMMGIT 960培养仪进行结核分枝杆菌(M.tuberculosis)培养,阳性液体培养物用改良罗氏比例法进行药物敏感试验。结果 174份M.tuberculosis核酸阳性痰液标本中15份rpo B突变型,突变频率最高的位点是531,突变率66.7%;17份kat G/inh A突变型,其中12份是kat G位点的单一突变,突变率为70.6%。对照68例改良罗氏比例法药敏结果,DNA微阵列法检测RFP、INH耐药的符合率均达90%以上。结论 DNA微阵列法可快速准确地检测大部分疑似结核病临床样本的rpo B、kat G和inh A基因突变,可用于临床耐药性的检测,指导临床用药,并在临床诊断中推广应用。 展开更多
关键词 DNA微阵列 结核分枝杆菌 耐药性
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结核分枝杆菌Mtub-39位点多态性与下游基因表达关系的研究 被引量：2
2
作者 周爱萍 徐志弘 +2 位作者 孙青 姚玉峰 吴兴福 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1415-1420,共6页
目的分析结核分枝杆菌(MTB)北京型菌株及非北京型菌株5个有明显差异的MTB散在分布重复单位(MIRU)位点,研究其多态性与下游基因表达的关系。方法利用生物信息学方法预测5个MIRU位点(ETR-C、Mtub-30、Mtub-39、MIRU-27、MIRU-40)下游相邻... 目的分析结核分枝杆菌(MTB)北京型菌株及非北京型菌株5个有明显差异的MTB散在分布重复单位(MIRU)位点,研究其多态性与下游基因表达的关系。方法利用生物信息学方法预测5个MIRU位点(ETR-C、Mtub-30、Mtub-39、MIRU-27、MIRU-40)下游相邻基因启动子区域。通过PCR方法扩增该区域并与分枝杆菌启动子探针载体pMC210连接,重组质粒测序正确后,用电穿孔方法转化耻垢分枝杆菌mc2155。采用Real-Time PCR技术检测报告基因lacZ的转录水平,验证MIRU位点多态性对其下游基因表达的影响。结果 Mtub-39位点核心区域内含有其下游基因的启动子。成功构建了分别带有1、3、5个拷贝重复序列的Mtub-39位点的重组质粒。Real-Time PCR结果显示,有多态性的Mtub-39位点(pMC210-Mtub-39-N158、pMC210-Mtub-39-N139及pMC210-Mtub-39-N146)对报告基因lacZ的转录调控差异有统计学意义(P=0.006 5)。结论 Mtub-39位点的多态性能明显影响下游基因启动子的活性进而调节其表达。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 MTB散在分布重复单位位点 pMC210 启动子
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结核分枝杆菌特异性抗原ESXO的重组制备及其免疫原性评估 被引量：1
3
作者 封莉 叶娟 +3 位作者 王凤平 赵俊伟 吴兴福 张舒林 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1426-1429,1447,共5页
目的评估结核分枝杆菌(MTB)重组特异性抗原ESXO在大肠埃希菌中的高效表达,并评价其免疫原性。方法采用常规分子克隆方法获得MTB重组蛋白ESXO。酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测84份确诊结核病(TB)患者血清和48份健康人血清中相应的抗结... 目的评估结核分枝杆菌(MTB)重组特异性抗原ESXO在大肠埃希菌中的高效表达,并评价其免疫原性。方法采用常规分子克隆方法获得MTB重组蛋白ESXO。酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测84份确诊结核病(TB)患者血清和48份健康人血清中相应的抗结核ESXO抗体水平,评价血清学抗原活性,并与结核早期分泌蛋白ESAT-6和CFP-10的检测结果进行比较。结果重组特异性抗原ESXO在大肠杆菌中获得成功表达,其在E.coli BL 21 plysS(DE3)中以可溶性和包涵体两种形式存在,相对分子质量(27 300)与预期相符,血清学抗原活性评估结果显示其特异度和敏感度分别为94.0%(45/48)和32.1%(27/84),特异度与ESAT-6和CFP-10相当,敏感度高于ESAT-6。结论结核特异性抗原ESXO有望成为新的TB诊断与疫苗设计的候选抗原。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 克隆 ESXO 基因表达 血清学诊断
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