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流式微球技术检测血浆vWF抗原方法的建立及其临床应用
被引量：
1
1
作者
闫彬
何杨
+5 位作者
陆士奇
曲乐
徐梦乔
王琪
赵益明
阮长耿
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第1期235-241,共7页
目的:建立流式微球技术(FCIA)检测血浆vWF抗原(vWF:Ag)的方法,探索其在预测缺血性脑卒中患者长期预后中的价值。方法:包被抗人vWF单克隆抗体SZ29 IgG的微球捕获血浆vWF,再与FITC标记的绵羊抗人vWF IgG多克隆抗体孵育,结束后在流式细胞...
目的:建立流式微球技术(FCIA)检测血浆vWF抗原(vWF:Ag)的方法,探索其在预测缺血性脑卒中患者长期预后中的价值。方法:包被抗人vWF单克隆抗体SZ29 IgG的微球捕获血浆vWF,再与FITC标记的绵羊抗人vWF IgG多克隆抗体孵育,结束后在流式细胞仪上检测分析。21例血管性血友病患者和105例健康对照者用FCIA法和酶联免疫吸附测定法(ELISA)同时检测血浆vWF:Ag,进行方法学间的评估。应用FCIA法检测61例脑卒中患者的初诊vWF:Ag水平,随访2年预后情况。结果:FCIA法检测血浆vWF:Ag的标准曲线拟合较好(R2=0.99),与ELISA的差异无统计学意义。经Bland-Altman一致性检验,2种方法的偏倚为1.12%,95%一致性界限为(-45.06%,47.30%);经线性回归分析,FCIA法与ELISA法有较好的相关性(斜率=0.97,r=0.86,P<0.0001),且耗时短、灵敏度更高。与对照组相比,脑卒中患者的vWF:Ag、vWF:GPIbR和vWF胶原结合活性显著升高(Z值分别为8.36、8.71、6.22,P<0.01)。vWF:Ag与改良Barthel指数评分呈负相关(r=-0.31,P<0.05),与改良Rankin评分无相关性。结论:流式微球技术检测vWF:Ag不仅是ELISA法的有效补充,且快速灵敏,提高了对3型血管性血友病的诊断。脑卒中患者vWF:Ag水平升高预示着2年的日常活动能力恢复差,长期预后不良。
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关键词
流式微球技术
血管性血友病因子
血管性血友病
脑卒中
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职称材料
抗人肝细胞生长因子受体单链抗体慢病毒载体的构建和应用
被引量：
3
2
作者
陈永华
郭佳
+4 位作者
尹衍新
蒋明
朱红胜
张国栋
李冰宇
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第9期960-963,967,共5页
目的构建可表达抗人肝细胞生长因子受体(HGFR)单链抗体(scFv)的慢病毒表达载体,将其感染HEK293细胞,检测该抗体的表达及与抗原结合活性。方法采用反转录PCR(RT-PCR)从分泌小鼠抗人HGFR抗体的杂交瘤细胞株(8E8)中扩增VH和VL基因,用重叠延...
目的构建可表达抗人肝细胞生长因子受体(HGFR)单链抗体(scFv)的慢病毒表达载体,将其感染HEK293细胞,检测该抗体的表达及与抗原结合活性。方法采用反转录PCR(RT-PCR)从分泌小鼠抗人HGFR抗体的杂交瘤细胞株(8E8)中扩增VH和VL基因,用重叠延伸PCR法将VH和VL进行拼接,得到含有信号肽SP-VH-linker-VL的单链抗体基因(HGFR-scFv),将其插入克隆载体pCR-Blunt中。用内切酶将HGFR-scFv基因从pCR-Blunt上切下,插入慢病毒载体pRRL-CMV中,经相应酶切和测序鉴定,正确构建慢病毒表达载体pRRL HGFR-scFv。磷酸钙法转染HEK293T细胞,48 h后通过荧光显微镜检测绿色荧光蛋白(GFP)的表达,将获得病毒颗粒进一步感染HEK293细胞,RT-PCR和ELISA检测scFv的表达情况。结果抗人HGFRscFv的慢病毒表达载体构建成功,病毒颗粒感染HEK293细胞后,得到了可以稳定表达抗人HGFR-scFv的细胞系;ELISA结果表明,scFv能与人HGFR特异性结合。结论成功克隆了小鼠抗人HGFR抗体的scFv基因,并构建其慢病毒表达系统。
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关键词
肝细胞生长因子受体
单链抗体
慢病毒表达载体
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职称材料
题名
流式微球技术检测血浆vWF抗原方法的建立及其临床应用
被引量：
1
1
作者
闫彬
何杨
陆士奇
曲乐
徐梦乔
王琪
赵益明
阮长耿
机构
南阳市中心
医院
检验
科
苏州
大学附属第一
医院
、江苏省血液研究所、卫生部血栓与止血重点实验室
苏州市立医院东区检验科
出处
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第1期235-241,共7页
基金
国家自然科学基金面上项目(81270593,81873431)
江苏省自然科学基金面上项目(BK20181164).
文摘
目的:建立流式微球技术(FCIA)检测血浆vWF抗原(vWF:Ag)的方法,探索其在预测缺血性脑卒中患者长期预后中的价值。方法:包被抗人vWF单克隆抗体SZ29 IgG的微球捕获血浆vWF,再与FITC标记的绵羊抗人vWF IgG多克隆抗体孵育,结束后在流式细胞仪上检测分析。21例血管性血友病患者和105例健康对照者用FCIA法和酶联免疫吸附测定法(ELISA)同时检测血浆vWF:Ag,进行方法学间的评估。应用FCIA法检测61例脑卒中患者的初诊vWF:Ag水平,随访2年预后情况。结果:FCIA法检测血浆vWF:Ag的标准曲线拟合较好(R2=0.99),与ELISA的差异无统计学意义。经Bland-Altman一致性检验,2种方法的偏倚为1.12%,95%一致性界限为(-45.06%,47.30%);经线性回归分析,FCIA法与ELISA法有较好的相关性(斜率=0.97,r=0.86,P<0.0001),且耗时短、灵敏度更高。与对照组相比,脑卒中患者的vWF:Ag、vWF:GPIbR和vWF胶原结合活性显著升高(Z值分别为8.36、8.71、6.22,P<0.01)。vWF:Ag与改良Barthel指数评分呈负相关(r=-0.31,P<0.05),与改良Rankin评分无相关性。结论:流式微球技术检测vWF:Ag不仅是ELISA法的有效补充,且快速灵敏,提高了对3型血管性血友病的诊断。脑卒中患者vWF:Ag水平升高预示着2年的日常活动能力恢复差,长期预后不良。
关键词
流式微球技术
血管性血友病因子
血管性血友病
脑卒中
Keywords
flow cytometric immunobead array
von Willebrand factor
von Willebrand disease
Ischemic stroke
分类号
R554.1 [医药卫生—血液循环系统疾病]
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职称材料
题名
抗人肝细胞生长因子受体单链抗体慢病毒载体的构建和应用
被引量：
3
2
作者
陈永华
郭佳
尹衍新
蒋明
朱红胜
张国栋
李冰宇
机构
苏州市立医院东区检验科
同济大学
苏州
研究院生物医药中心
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第9期960-963,967,共5页
基金
江苏省自然科学基金(BK2012162)
苏州市科技发展计划(SYG201131)
苏州市生物新药创制重点实验室(SZS201002)
文摘
目的构建可表达抗人肝细胞生长因子受体(HGFR)单链抗体(scFv)的慢病毒表达载体,将其感染HEK293细胞,检测该抗体的表达及与抗原结合活性。方法采用反转录PCR(RT-PCR)从分泌小鼠抗人HGFR抗体的杂交瘤细胞株(8E8)中扩增VH和VL基因,用重叠延伸PCR法将VH和VL进行拼接,得到含有信号肽SP-VH-linker-VL的单链抗体基因(HGFR-scFv),将其插入克隆载体pCR-Blunt中。用内切酶将HGFR-scFv基因从pCR-Blunt上切下,插入慢病毒载体pRRL-CMV中,经相应酶切和测序鉴定,正确构建慢病毒表达载体pRRL HGFR-scFv。磷酸钙法转染HEK293T细胞,48 h后通过荧光显微镜检测绿色荧光蛋白(GFP)的表达,将获得病毒颗粒进一步感染HEK293细胞,RT-PCR和ELISA检测scFv的表达情况。结果抗人HGFRscFv的慢病毒表达载体构建成功,病毒颗粒感染HEK293细胞后,得到了可以稳定表达抗人HGFR-scFv的细胞系;ELISA结果表明,scFv能与人HGFR特异性结合。结论成功克隆了小鼠抗人HGFR抗体的scFv基因,并构建其慢病毒表达系统。
关键词
肝细胞生长因子受体
单链抗体
慢病毒表达载体
Keywords
hepatocyte growth factor receptor
scFv
lentiviral vector
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
Q876 [生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
流式微球技术检测血浆vWF抗原方法的建立及其临床应用
闫彬
何杨
陆士奇
曲乐
徐梦乔
王琪
赵益明
阮长耿
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2020
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
抗人肝细胞生长因子受体单链抗体慢病毒载体的构建和应用
陈永华
郭佳
尹衍新
蒋明
朱红胜
张国栋
李冰宇
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014
3
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