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基于CRISPR-Cas系统的病原体核酸检测方法的研究进展
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作者 臧佳 董泽丰 +2 位作者 雅雪蓉 孙万平 沈强 《临床检验杂志》 2025年第3期197-203,共7页
病原体的快速、准确诊断对感染性疾病的有效控制和治疗至关重要,基于核酸的检测方法因具有高灵敏度、高特异性被广泛应用于实验室检测和临床诊断。目前,定量聚合酶链式反应(qPCR)已成为核酸诊断的金标准,然而,该方法对仪器设备和操作者... 病原体的快速、准确诊断对感染性疾病的有效控制和治疗至关重要,基于核酸的检测方法因具有高灵敏度、高特异性被广泛应用于实验室检测和临床诊断。目前,定量聚合酶链式反应(qPCR)已成为核酸诊断的金标准,然而,该方法对仪器设备和操作者技能要求较高并且容易发生气溶胶污染,不适用于病原体的即时检测。成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)及CRISPR相关蛋白(Cas)系统(简称为CRISPR-Cas)克服了其他核酸检测方法的局限性,为病原体核酸的即时检测提供了新工具。该文从CRISPR-Cas系统的组成及作用机制、基于不同类别Cas蛋白的检测方法以及检测方法的发展趋势3个方面对基于CRISPR-Cas系统的病原体核酸检测方法进行总结,旨在为进一步提升上述方法的可操作性以及开发更多新的检测方法提供思路。 展开更多
关键词 感染性疾病 核酸检测 成簇规律间隔短回文重复序列及CRISPR相关蛋白系统 检测方法
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苏州市食源性单核细胞增生李斯特菌的全基因组测序分析 被引量:7
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作者 王小龙 汤全英 +4 位作者 邹文燕 崔家瑞 董泽丰 张梦寒 朱莉勤 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2023年第8期255-261,共7页
目的 应用高通量测序技术分析苏州市食源性单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes, Lm)的毒力基因携带情况、分子分型、遗传进化谱系及遗传进化关系等分子特征。方法 对2016—2020年分离自食品的42株Lm进行全基因组测序,运用CLC ... 目的 应用高通量测序技术分析苏州市食源性单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes, Lm)的毒力基因携带情况、分子分型、遗传进化谱系及遗传进化关系等分子特征。方法 对2016—2020年分离自食品的42株Lm进行全基因组测序,运用CLC Genomics Workbench 21.0.4软件进行组装及毒力基因和耐药基因分析;通过与BIGSdb-Lm数据库比对获得谱系、克隆群(clone complexes,CC)、血清群、多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)、核心基因组多位点序列分型(core genome multilocus sequence typing,cgMLST);利用柏熠微生物分析平台v4.0构建最大似然树。结果 42株Lm共包含两个谱系,谱系Ⅰ和谱系Ⅱ,以谱系Ⅱ为主(83.3%)。血清群分为Ⅱa、Ⅱb和Ⅱc,以Ⅱa为主(57.1%)。42株Lm分为11个CC型, 11个序列型(sequence type, ST型),优势型别是CC9、CC8和CC121,占比61.9%。菌株携带毒力基因数量均在30个以上,涉及LIPI-1、LIPI-2、LIPI-3 3个毒力岛。LIPI-1中actA检出率为76.2%, prfA、plcA、hly、mpl、plcB检出率均为100.0%。LIPI-2中inlF的检出率为81.0%, inlB检出率为97.6%, inlA、inlC、inlJ、inlK、inlP等5种基因检出率均为100.0%。只有1株菌携带LIPI-3。菌株携带耐药基因有FosX、mprF、lin、norB、tetM、dfrG等6个基因,携带3种以上毒力基因的菌株数量达到78.6%。结论 苏州市食源性Lm的分子型别较为多样且具有优势型别,普遍携带较多毒力基因和多个耐药基因,应加强监测。 展开更多
关键词 单核细胞增生李斯特菌 食源性 全基因组测序
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