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Raji细胞系特异性Fab噬菌体抗体库的构建及筛选 被引量：5
1
作者 谢小芳 申咏梅 +3 位作者 杨晓春 董宁征 白霞 石怡珍 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期160-163,167,共5页
目的构建针对B细胞淋巴瘤Raji细胞系噬菌体抗体库并从中筛选出特异性的抗体。方法以Raji细胞免疫BALB/c小鼠,RT-PCR法从脾淋巴细胞中扩增抗体轻链к和重链Fd基因。经SacI/XbaI和XhoI/SpeI双酶切,依次克隆入噬菌体载体pComb3H-SS中,并电... 目的构建针对B细胞淋巴瘤Raji细胞系噬菌体抗体库并从中筛选出特异性的抗体。方法以Raji细胞免疫BALB/c小鼠,RT-PCR法从脾淋巴细胞中扩增抗体轻链к和重链Fd基因。经SacI/XbaI和XhoI/SpeI双酶切,依次克隆入噬菌体载体pComb3H-SS中,并电转化大肠杆菌XL1-Blue,以辅助噬菌体VCSM13进行超感染,构建B细胞淋巴瘤Raji细胞系特异性Fab噬菌体抗体库。以Raji细胞为抗原进行筛选,获得抗Raji细胞的抗体,通过ELISA法进行抗原结合活性的测定,并对所得阳性克隆进行基因测序分析。结果构建了容量为2.18×107的抗人B细胞淋巴瘤Raji细胞系的Fab噬菌体抗体库,并筛选获得了与Raji细胞系特异性识别结合的8株阳性克隆。对其中两个阳性克隆进行基因序列分析,结果显示其重链可变区、轻链可变区分别与免疫球蛋白基因库中已注册的鼠源性免疫球蛋白重链可变区和轻链可变区序列具有高度同源性。结论成功地构建Fab噬菌体抗体库并筛选出针对Raji细胞系膜抗原的抗体,为进一步研究B细胞淋巴瘤的免疫治疗提供了实验基础。 展开更多
关键词 B细胞淋巴瘤 FAB 噬菌体抗体库
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Daudi细胞系特异性Fab噬菌体抗体库的构建、筛选与初步鉴定 被引量：2
2
作者 申咏梅 杨晓春 +1 位作者 董宁征 白霞 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期150-154,共5页
目的:构建针对B细胞淋巴瘤Daudi细胞系噬菌体抗体库,从中筛选特异性抗体,并对所筛选出的阳性克隆进行鉴定。方法:以Daudi细胞免疫BALB/c小鼠,ELISA检测抗血清滴度后,分离抗体阳性的小鼠脾淋巴细胞,提取RNA。利用RT-PCR扩增抗体к轻链和... 目的:构建针对B细胞淋巴瘤Daudi细胞系噬菌体抗体库,从中筛选特异性抗体,并对所筛选出的阳性克隆进行鉴定。方法:以Daudi细胞免疫BALB/c小鼠,ELISA检测抗血清滴度后,分离抗体阳性的小鼠脾淋巴细胞,提取RNA。利用RT-PCR扩增抗体к轻链和重链Fd片段,经SacI/XbaI和XhoI/SpeI双酶切,依次克隆入噬菌体载体pComb3H-SS的相应酶切位点,并电转化大肠杆菌XL1-Blue,以辅助噬菌体VCSM13进行超感染,构建B细胞淋巴瘤Daudi细胞系特异性Fab噬菌体抗体库。以Daudi细胞为抗原对抗体库进行6轮"吸附-洗脱-扩增"筛选,并通过ELISA法对随机挑选的克隆进行抗原结合活性测定,获得的阳性克隆进一步做DNA序列测定、在大肠杆菌XL1-Blue中进行可溶性表达,并用Western blot对表达产物的特异性作了鉴定。结果:构建了容量为3.13×107的抗人B细胞淋巴瘤Daudi细胞系的Fab噬菌体抗体库,并筛选获得了与Daudi细胞系特异性识别结合的4株阳性克隆。氨基酸序列分析结果显示:阳性克隆的重链、轻链可变区序列分别与基因库中已注册的鼠源性免疫球蛋白重链、轻链可变区序列有80%～94%和88%～95%同源性。阳性克隆成功在大肠杆菌细胞中可溶性表达,Western blot结果表明所获得的可溶性表达产物可与Daudi细胞膜抗原特异性结合。结论:成功地构建Fab噬菌体抗体库并筛选出针对Daudi细胞系膜抗原的抗体,为进一步研究B细胞淋巴瘤的免疫治疗提供了实验基础。 展开更多
关键词 B细胞淋巴瘤 FAB 噬菌体抗体库 Daudi细胞系 pComb3H—SS载体
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Bcl-2反义寡核苷酸与Rituximab联合对Raji细胞增殖和凋亡的影响
3
作者 申咏梅 杨晓春 +2 位作者 石怡珍 谢小芳 唐军 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期727-730,共4页
目的：研究bcl-2硫代反义寡核苷酸（bcl-2 ASODN）联合Rituximab[CD20单克隆抗体（mAb）]对B细胞淋巴瘤Raji细胞株体内外增殖和凋亡的影响, 并探讨其作用机制.方法：bcl-2 ASODN和Rituximab分别和联合作用B细胞淋巴瘤Raji细胞后, 通过MT... 目的：研究bcl-2硫代反义寡核苷酸（bcl-2 ASODN）联合Rituximab[CD20单克隆抗体（mAb）]对B细胞淋巴瘤Raji细胞株体内外增殖和凋亡的影响, 并探讨其作用机制.方法：bcl-2 ASODN和Rituximab分别和联合作用B细胞淋巴瘤Raji细胞后, 通过MTT法检测细胞生长情况;流式细胞术（FCM）检测bcl-2蛋白表达和细胞凋亡;RT-PCR检测bcl-2 mRNA表达水平;用Raji细胞建立裸鼠B细胞淋巴瘤模型观察bcl-2 ASODN与Rituximab联合在体内的抗肿瘤效果. 结果：5～30 μmol/L bcl-2 和1 ～16 mg/L Rituximab单独应用均能抑制Raji细胞生长、诱导细胞凋亡、使bcl-2蛋白和bcl-2 mRNA表达降低, 但两者联合应用较单独应用抑制作用更为明显（P＜0.01）.体内实验表明, bcl-2 ASODN与Rituximab联合应用较单独可有效抑制BALB/c裸鼠B细胞淋巴瘤的生长（P＜0.01）.结论：bcl-2 ASODN联合Rituximab较分别单独应用可明显抑制B细胞淋巴瘤Raji细胞生长, 促进细胞凋亡;其机制可能是通过联合下调bcl-2蛋白及bcl-2 mRNA表达而起作用. 展开更多
关键词 BCL-2 反义寡核苷酸 RITUXIMAB Raji
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