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Daudi细胞系特异性Fab噬菌体抗体库的构建、筛选与初步鉴定
被引量：
2
1
作者
申咏梅
杨晓春
+1 位作者
董宁征
白霞
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第2期150-154,共5页
目的:构建针对B细胞淋巴瘤Daudi细胞系噬菌体抗体库,从中筛选特异性抗体,并对所筛选出的阳性克隆进行鉴定。方法:以Daudi细胞免疫BALB/c小鼠,ELISA检测抗血清滴度后,分离抗体阳性的小鼠脾淋巴细胞,提取RNA。利用RT-PCR扩增抗体к轻链和...
目的:构建针对B细胞淋巴瘤Daudi细胞系噬菌体抗体库,从中筛选特异性抗体,并对所筛选出的阳性克隆进行鉴定。方法:以Daudi细胞免疫BALB/c小鼠,ELISA检测抗血清滴度后,分离抗体阳性的小鼠脾淋巴细胞,提取RNA。利用RT-PCR扩增抗体к轻链和重链Fd片段,经SacI/XbaI和XhoI/SpeI双酶切,依次克隆入噬菌体载体pComb3H-SS的相应酶切位点,并电转化大肠杆菌XL1-Blue,以辅助噬菌体VCSM13进行超感染,构建B细胞淋巴瘤Daudi细胞系特异性Fab噬菌体抗体库。以Daudi细胞为抗原对抗体库进行6轮"吸附-洗脱-扩增"筛选,并通过ELISA法对随机挑选的克隆进行抗原结合活性测定,获得的阳性克隆进一步做DNA序列测定、在大肠杆菌XL1-Blue中进行可溶性表达,并用Western blot对表达产物的特异性作了鉴定。结果:构建了容量为3.13×107的抗人B细胞淋巴瘤Daudi细胞系的Fab噬菌体抗体库,并筛选获得了与Daudi细胞系特异性识别结合的4株阳性克隆。氨基酸序列分析结果显示:阳性克隆的重链、轻链可变区序列分别与基因库中已注册的鼠源性免疫球蛋白重链、轻链可变区序列有80%～94%和88%～95%同源性。阳性克隆成功在大肠杆菌细胞中可溶性表达,Western blot结果表明所获得的可溶性表达产物可与Daudi细胞膜抗原特异性结合。结论:成功地构建Fab噬菌体抗体库并筛选出针对Daudi细胞系膜抗原的抗体,为进一步研究B细胞淋巴瘤的免疫治疗提供了实验基础。
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关键词
B细胞淋巴瘤
FAB
噬菌体抗体库
Daudi细胞系
pComb3H—SS载体
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职称材料
Bcl-2反义寡核苷酸与Rituximab联合对Raji细胞增殖和凋亡的影响
2
作者
申咏梅
杨晓春
+2 位作者
石怡珍
谢小芳
唐军
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第8期727-730,共4页
目的：研究bcl-2硫代反义寡核苷酸（bcl-2 ASODN）联合Rituximab[CD20单克隆抗体（mAb）]对B细胞淋巴瘤Raji细胞株体内外增殖和凋亡的影响, 并探讨其作用机制.方法：bcl-2 ASODN和Rituximab分别和联合作用B细胞淋巴瘤Raji细胞后, 通过MT...
目的：研究bcl-2硫代反义寡核苷酸（bcl-2 ASODN）联合Rituximab[CD20单克隆抗体（mAb）]对B细胞淋巴瘤Raji细胞株体内外增殖和凋亡的影响, 并探讨其作用机制.方法：bcl-2 ASODN和Rituximab分别和联合作用B细胞淋巴瘤Raji细胞后, 通过MTT法检测细胞生长情况;流式细胞术（FCM）检测bcl-2蛋白表达和细胞凋亡;RT-PCR检测bcl-2 mRNA表达水平;用Raji细胞建立裸鼠B细胞淋巴瘤模型观察bcl-2 ASODN与Rituximab联合在体内的抗肿瘤效果. 结果：5～30 μmol/L bcl-2 和1 ～16 mg/L Rituximab单独应用均能抑制Raji细胞生长、诱导细胞凋亡、使bcl-2蛋白和bcl-2 mRNA表达降低, 但两者联合应用较单独应用抑制作用更为明显（P＜0.01）.体内实验表明, bcl-2 ASODN与Rituximab联合应用较单独可有效抑制BALB/c裸鼠B细胞淋巴瘤的生长（P＜0.01）.结论：bcl-2 ASODN联合Rituximab较分别单独应用可明显抑制B细胞淋巴瘤Raji细胞生长, 促进细胞凋亡;其机制可能是通过联合下调bcl-2蛋白及bcl-2 mRNA表达而起作用.
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关键词
BCL-2
反义寡核苷酸
RITUXIMAB
Raji
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职称材料
题名
Daudi细胞系特异性Fab噬菌体抗体库的构建、筛选与初步鉴定
被引量：
2
1
作者
申咏梅
杨晓春
董宁征
白霞
机构
苏州大学附属第二医院放免中心
苏州大学
附属
第二
医院
检验教研室
苏州大学
附属
第二
医院
磁共振室
江苏省血液研究所
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第2期150-154,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(30400111)
江苏省自然科学基金资助项目(BK2004041)
文摘
目的:构建针对B细胞淋巴瘤Daudi细胞系噬菌体抗体库,从中筛选特异性抗体,并对所筛选出的阳性克隆进行鉴定。方法:以Daudi细胞免疫BALB/c小鼠,ELISA检测抗血清滴度后,分离抗体阳性的小鼠脾淋巴细胞,提取RNA。利用RT-PCR扩增抗体к轻链和重链Fd片段,经SacI/XbaI和XhoI/SpeI双酶切,依次克隆入噬菌体载体pComb3H-SS的相应酶切位点,并电转化大肠杆菌XL1-Blue,以辅助噬菌体VCSM13进行超感染,构建B细胞淋巴瘤Daudi细胞系特异性Fab噬菌体抗体库。以Daudi细胞为抗原对抗体库进行6轮"吸附-洗脱-扩增"筛选,并通过ELISA法对随机挑选的克隆进行抗原结合活性测定,获得的阳性克隆进一步做DNA序列测定、在大肠杆菌XL1-Blue中进行可溶性表达,并用Western blot对表达产物的特异性作了鉴定。结果:构建了容量为3.13×107的抗人B细胞淋巴瘤Daudi细胞系的Fab噬菌体抗体库,并筛选获得了与Daudi细胞系特异性识别结合的4株阳性克隆。氨基酸序列分析结果显示:阳性克隆的重链、轻链可变区序列分别与基因库中已注册的鼠源性免疫球蛋白重链、轻链可变区序列有80%～94%和88%～95%同源性。阳性克隆成功在大肠杆菌细胞中可溶性表达,Western blot结果表明所获得的可溶性表达产物可与Daudi细胞膜抗原特异性结合。结论:成功地构建Fab噬菌体抗体库并筛选出针对Daudi细胞系膜抗原的抗体,为进一步研究B细胞淋巴瘤的免疫治疗提供了实验基础。
关键词
B细胞淋巴瘤
FAB
噬菌体抗体库
Daudi细胞系
pComb3H—SS载体
Keywords
B-lymphoma
Fab
Phage antibody libraryDaudi cell strain
pComb3H-SS vector
分类号
Q782 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
Bcl-2反义寡核苷酸与Rituximab联合对Raji细胞增殖和凋亡的影响
2
作者
申咏梅
杨晓春
石怡珍
谢小芳
唐军
机构
苏州大学附属第二医院放免中心
苏州大学
附属
第二
医院
检验教研室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第8期727-730,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(30400111)
江苏省自然科学基金资助项目(BK2004041)
文摘
目的：研究bcl-2硫代反义寡核苷酸（bcl-2 ASODN）联合Rituximab[CD20单克隆抗体（mAb）]对B细胞淋巴瘤Raji细胞株体内外增殖和凋亡的影响, 并探讨其作用机制.方法：bcl-2 ASODN和Rituximab分别和联合作用B细胞淋巴瘤Raji细胞后, 通过MTT法检测细胞生长情况;流式细胞术（FCM）检测bcl-2蛋白表达和细胞凋亡;RT-PCR检测bcl-2 mRNA表达水平;用Raji细胞建立裸鼠B细胞淋巴瘤模型观察bcl-2 ASODN与Rituximab联合在体内的抗肿瘤效果. 结果：5～30 μmol/L bcl-2 和1 ～16 mg/L Rituximab单独应用均能抑制Raji细胞生长、诱导细胞凋亡、使bcl-2蛋白和bcl-2 mRNA表达降低, 但两者联合应用较单独应用抑制作用更为明显（P＜0.01）.体内实验表明, bcl-2 ASODN与Rituximab联合应用较单独可有效抑制BALB/c裸鼠B细胞淋巴瘤的生长（P＜0.01）.结论：bcl-2 ASODN联合Rituximab较分别单独应用可明显抑制B细胞淋巴瘤Raji细胞生长, 促进细胞凋亡;其机制可能是通过联合下调bcl-2蛋白及bcl-2 mRNA表达而起作用.
关键词
BCL-2
反义寡核苷酸
RITUXIMAB
Raji
Keywords
bcl-2
oligodeoxynucleotide
Rituximab
Raji
分类号
Q392 [生物学—遗传学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
Daudi细胞系特异性Fab噬菌体抗体库的构建、筛选与初步鉴定
申咏梅
杨晓春
董宁征
白霞
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
Bcl-2反义寡核苷酸与Rituximab联合对Raji细胞增殖和凋亡的影响
申咏梅
杨晓春
石怡珍
谢小芳
唐军
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007
0
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