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内皮抑素基因转移对乳腺癌细胞生长影响的体内和离体研究 被引量:1
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作者 白霞 傅建新 +2 位作者 王玮 谢学顺 阮长耿 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第11期2183-2187,共5页
目的探讨内皮抑素(ES)基因转移在乳腺癌抗血管新生中的作用。方法通过建立逆转录病毒介导的ES基因转移系统,用ES病毒转染人乳腺癌细胞系MDA-MB-231。以聚合酶链反应(PCR)、MTT法和裸鼠成瘤实验分析ES的生物学特性及其功能。结果脂质体... 目的探讨内皮抑素(ES)基因转移在乳腺癌抗血管新生中的作用。方法通过建立逆转录病毒介导的ES基因转移系统,用ES病毒转染人乳腺癌细胞系MDA-MB-231。以聚合酶链反应(PCR)、MTT法和裸鼠成瘤实验分析ES的生物学特性及其功能。结果脂质体转染与交互感染策略获得ES病毒生产细胞;以ES病毒转染MDA-MB-231细胞后,经PCR分析显示其内有ES基因整合并持续表达,其分泌的ES能明显抑制内皮细胞EA.hy926的增殖(P<0.05),但对肿瘤细胞的离体生长无明显影响(P>0.05);裸鼠皮下移植瘤模型表明,ES基因表达可明显抑制MDA-MB-231细胞的生长(P<0.01);实验组的肿瘤微血管密度(MVD)和血管内皮生长因子(VEGF)表达低于对照组(P<0.05)。结论逆转录病毒载体介导的ES基因在乳腺癌细胞中可有效表达,能明显抑制血管内皮细胞生长,并通过旁分泌方式抑制血管新生,具有显著的抗肿瘤生长的作用。 展开更多
关键词 内皮抑素 逆转录病毒载体 乳腺肿瘤 新生血管化 病理性
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基因转移FasL诱导人黑色素瘤细胞凋亡的体外研究
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作者 马文雄 王文宏 +5 位作者 陈桂林 惠国桢 吴杰 张世明 周岱 杜子威 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2002年第4期265-268,共4页
目的:探讨体外基因转移Fas配体(Fas-Ligand,FasL)对恶性人黑色素瘤细胞凋亡的影响。方法:用携带人FasLcDNA的缺陷型重组腺病毒载体(Ad-FL),在体外转导2株黑色素瘤细胞,并使其表达;通过流式细胞仪、RT-PCR法进行Fas/FasL表达检测,TUNEL... 目的:探讨体外基因转移Fas配体(Fas-Ligand,FasL)对恶性人黑色素瘤细胞凋亡的影响。方法:用携带人FasLcDNA的缺陷型重组腺病毒载体(Ad-FL),在体外转导2株黑色素瘤细胞,并使其表达;通过流式细胞仪、RT-PCR法进行Fas/FasL表达检测,TUNEL法及荧光显微镜检测细胞凋亡状况。结果:流式细胞仪和RT-PCR检测两株黑色素瘤细胞表面均表达Fas,不表达FasL,而Ad-FL转导的两株黑色素瘤细胞均能表达FasL;Ad-FL能显著诱导两株黑色素瘤细胞在体外凋亡或抑制其生长。结论:重组腺病毒FasL在体外诱导人黑色素瘤细胞凋亡效果显著。 展开更多
关键词 细胞凋亡 FAS LIGAND 黑色素瘤 基因转移 重组腺病毒
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骨癌痛大鼠脊髓背角KCC2的表达及可能机制 被引量:5
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作者 贾晓明 杨建平 +5 位作者 王丽娜 钟丽敏 高建瓴 许期年 王秀云 左剑玲 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1463-1466,共4页
目的研究骨癌痛大鼠脊髓背角钾离子-氯离子联合转运体2(potassium-chloride cotransporter2,KCC2)的表达变化及其可能机制。方法采用大鼠胫骨骨髓腔接种Walker256肿瘤细胞建立胫骨癌痛模型。观测种瘤前后大鼠机械缩足反射阈值(mechanica... 目的研究骨癌痛大鼠脊髓背角钾离子-氯离子联合转运体2(potassium-chloride cotransporter2,KCC2)的表达变化及其可能机制。方法采用大鼠胫骨骨髓腔接种Walker256肿瘤细胞建立胫骨癌痛模型。观测种瘤前后大鼠机械缩足反射阈值(mechanical withdrawl thresthold,MWT)和脊髓背角KCC2表达水平的变化,观察痛敏形成前鞘内预注射酪氨酸蛋白激酶B(tyrosine protein kinase B,TrkB)中和抗体阻断脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BD-NF)-TrkB途径对KCC2表达和机械性痛觉超敏的影响。结果大鼠种瘤后6~12d,MWT明显下降(P<0.01),出现明显的机械性痛敏,脊髓背角KCC2蛋白水平进行性降低(P<0.01);鞘内预注射TrkB中和抗体的骨癌痛大鼠,其脊髓KCC2表达水平和MWT明显高于注射IgG和不作处理的骨癌痛大鼠(P<0.01)。结论脊髓背角的KCC2可能参与了骨癌痛的发生发展,而BDNF-TrkB途径可能介导了该作用。 展开更多
关键词 胫骨癌痛 KCC2 TRKB BDNF 脊髓 痛觉超敏
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大鼠鞘内注射MCP-1中和抗体缓解骨癌痛 被引量:2
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作者 郑小艳 杨建平 +6 位作者 胡计嬅 王丽娜 贾晓明 殷伟 许期年 王秀云 左剑玲 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期769-772,共4页
目的观察脊髓趋化因子单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1,或CCL2)在骨癌痛大鼠中的可能作用。方法大鼠胫骨骨髓腔接种Walker256肿瘤细胞建立骨癌痛模型。观测造模前、后大鼠机械性痛觉超敏Von Frey阈值并观察造... 目的观察脊髓趋化因子单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1,或CCL2)在骨癌痛大鼠中的可能作用。方法大鼠胫骨骨髓腔接种Walker256肿瘤细胞建立骨癌痛模型。观测造模前、后大鼠机械性痛觉超敏Von Frey阈值并观察造模后d 10~12,鞘内给予MCP-1中和抗体对大鼠Von Frey阈值和脊髓小胶质细胞激活标志物(ox-42)表达的影响。结果大鼠种瘤后6~12 d,机械性痛觉超敏Von Frey阈值进行性下降(P<0.01);与对照组相比,鞘内给予MCP-1中和抗体后,脊髓ox-42的表达水平明显降低(P<0.01),Von Frey阈值的明显升高(P<0.01)。结论大鼠鞘内注射MCP-1中和抗体缓解骨癌痛,其机制可能与抑制小胶质细胞的激活相关。 展开更多
关键词 骨癌痛 脊髓 趋化因子 MCP-1 CCR2 小胶质细胞 机械性痛觉超敏
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针对小胶质细胞上BDNF表达的siRNA筛选及其抑制效应检测 被引量:2
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作者 王丽娜 王秀云 +4 位作者 左剑玲 许期年 朱卫东 贾晓明 杨建平 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期1021-1026,共6页
目的筛选有效抑制小胶质细胞上脑源性神经生长因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)表达的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)序列,并观察其对小胶质细胞活性标记物OX-42表达的调节作用。方法设计并合成针对BDNF的siRNA3... 目的筛选有效抑制小胶质细胞上脑源性神经生长因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)表达的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)序列,并观察其对小胶质细胞活性标记物OX-42表达的调节作用。方法设计并合成针对BDNF的siRNA3对(siRNA1588,siRNA283,siR-NA232)及一条带绿色荧光标记的通用阴性对照FAM-siRNA。在LipofectamineTM 2000介导下转染小胶质细胞。分别采用Real-TimePCR及Western blot方法测定并比较其抑制率;采用磺基罗丹明B法(sulforhodamine B,SRB)分析转染复合物的细胞毒性。同时采用免疫荧光组织化学结合共聚焦显微镜观察BDNF和OX-42的表达情况。结果①与阴性对照组及siRNA283、siRNA232相比,BDNFsiRNA1588(50μmol·L-1,脂质体与siRNA比例1∶3)干扰小胶质细胞后,其mR-NA和蛋白的相对表达量最低(P<0.01)。②Lipofectami-neTM 20008μl复合50μmol·L-1siRNA(脂质体与siRNA比例为1∶3),不仅细胞毒性低而且转染效率高(P<0.01),为最佳转染条件。③BNDF和OX-42存在共表达;且siR-NA1588作用后OX-42的平均光密度值(IOD/area)明显降低(P<0.01)。结论①siRNA1588对小胶质细胞上BDNF表达的抑制效果最大。②BDNF在小胶质细胞的活性调节中具有重要作用。 展开更多
关键词 小胶质细胞 脑源性神经生长因子 小干扰RNA 筛选 磺基罗丹明B法 细胞毒性 大鼠
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鞘内注射TDAG8的siRNA对大鼠骨癌痛的缓解作用
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作者 殷伟 杭黎华 +6 位作者 郑小艳 王丽娜 贾晓明 杨建平 许期年 王秀云 左剑玲 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1402-1406,共5页
目的观察鞘内注射T细胞死亡相关基因8(T celldeath-associated gene 8,TDAG8)的小干扰RNA(small inter-fering RNA,siRNA)对骨癌痛大鼠机械性痛觉过敏以及脊髓TDAG8表达的影响。方法通过将Walker256肿瘤细胞接种在大鼠左侧胫骨骨髓腔内... 目的观察鞘内注射T细胞死亡相关基因8(T celldeath-associated gene 8,TDAG8)的小干扰RNA(small inter-fering RNA,siRNA)对骨癌痛大鼠机械性痛觉过敏以及脊髓TDAG8表达的影响。方法通过将Walker256肿瘤细胞接种在大鼠左侧胫骨骨髓腔内建立骨癌痛模型。观察接种肿瘤前后大鼠机械缩爪反射阈值(paw withdrawl threshould,PWT)和脊髓TDAG8表达水平的变化;并进一步观察痛觉过敏形成后鞘内注射TDAG8的siRNA对大鼠PWT和脊髓TDAG8表达的影响。结果大鼠接种肿瘤后6~18 d,PWT明显下降(P<0.01),脊髓TDAG8的表达明显升高(P<0.01);与对照组相比,鞘内注射siRNA的骨癌痛大鼠,其PWT明显增高(P<0.05),脊髓TDAG8表达水平明显降低(P<0.01)。结论脊髓部位的TDAG8可能参与了大鼠骨癌痛的形成和发展,鞘内注射其siRNA可以通过干扰脊髓TDAG8的表达而具有疼痛缓解作用。 展开更多
关键词 大鼠 肿瘤 脊髓 鞘内注射 T细胞死亡相关基因8 痛觉过敏
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趋化因子受体CCR2拮抗剂在大鼠骨癌痛治疗中的可能机制 被引量:4
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作者 徐振华 杨建平 +2 位作者 胡计嬅 陈婷 左建玲 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期510-513,共4页
目的观察脊髓单核细胞趋化蛋白受体CCR2在大鼠骨癌痛形成过程中的可能机制。方法大鼠左侧胫骨骨髓腔内接种Walker256乳腺癌细胞制备骨癌痛模型。观察并测量各组大鼠术前1 d,术后3、6、9、10、11、12 d的机械痛阈值。术后12 d取材,免疫... 目的观察脊髓单核细胞趋化蛋白受体CCR2在大鼠骨癌痛形成过程中的可能机制。方法大鼠左侧胫骨骨髓腔内接种Walker256乳腺癌细胞制备骨癌痛模型。观察并测量各组大鼠术前1 d,术后3、6、9、10、11、12 d的机械痛阈值。术后12 d取材,免疫组织化学法检测脊髓背角星形胶质细胞标志物(GFAP)的平均光密度值(MOD),观察脊髓小胶质细胞增殖活化情况。结果与对照组相比,鞘内给予CCR2拮抗剂后大鼠机械痛阈值明显升高,脊髓GFAP表达明显降低(P<0.01)。结论鞘内注射CCR2特异性拮抗剂可能通过抑制脊髓星形胶质细胞的活化而缓解大鼠骨癌痛,CCR2可能是治疗骨癌痛新的靶点。 展开更多
关键词 骨癌痛 脊髓 趋化因子 CCL2 CCR2 星形胶质细胞 CCL2 CCR2
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