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miR-17-92基因簇增强前列腺癌DU145细胞的迁移、侵袭能力及对顺铂的耐药性 被引量:3
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作者 陈昊 周鹏 +2 位作者 徐晶晶 周珺 国风 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期95-101,共7页
背景与目的:mi R-17-92基因簇与多种疾病的发生密切相关,其在肺癌、肝癌、胃癌和前列腺癌等多种肿瘤细胞中均高表达。本研究利用慢病毒包装系统建立稳定高表达mi R-17-92基因簇的DU145细胞株,探讨mi R-17-92基因簇对前列腺癌DU145细胞... 背景与目的:mi R-17-92基因簇与多种疾病的发生密切相关,其在肺癌、肝癌、胃癌和前列腺癌等多种肿瘤细胞中均高表达。本研究利用慢病毒包装系统建立稳定高表达mi R-17-92基因簇的DU145细胞株,探讨mi R-17-92基因簇对前列腺癌DU145细胞的迁移、侵袭能力及对顺铂耐药性的影响。方法:构建高表达mi R-17-92基因簇的表达载体,转染DU145细胞株,同时转染空载体作为对照,并用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)进行鉴定。用x CELLigence系统监测细胞的迁移、侵袭能力及顺铂处理后的生长情况;通过划痕实验观察细胞的迁移情况;采用蛋白[质]印迹法(Western blot)、凝胶酶谱实验和RTFQ-PCR检测相关蛋白质和基因的表达以探讨mi R-17-92增强DU145细胞的迁移、侵袭能力及对顺铂耐药性的相关机制。结果:DU145-mi R-17-92细胞迁移速率和侵袭能力高于DU145-control细胞(P<0.01)。DU145-mi R-17-92细胞中整合素β1的蛋白质表达水平和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloprotein-9,MMP-9)的活性显著高于DU145-control细胞。顺铂处理后,DU145-mi R-17-92细胞的生长速度自12 h起快于DU145-control细胞并呈顺铂耐药性(P<0.01)。细胞外调节蛋白激酶1/2(extracellular regulated protein kinases,ERK1/2)在DU145-mi R-17-92细胞中呈现持续高水平磷酸化,顺铂处理后,其磷酸化水平无明显变化。DU145-mi R-17-92细胞中切除修复互补交叉基因1(excision repair cross complementing1,ERCC1)的m RNA和蛋白质表达水平显著高于DU145-control细胞。结论:高表达mi R-17-92增强了DU145细胞的迁移、侵袭能力,其机制与整合素β1的表达上调及MMP-9活性增强有关。此外,高表达mi R-17-92增强了DU145细胞对顺铂的耐药性,该过程与ERK1/2的磷酸化水平增加和ERCC1的表达水平上调相关。 展开更多
关键词 miR-17-92 前列腺肿瘤 DUl45 侵袭 迁移 顺铂
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慢性淋巴细胞性白血病骨髓基质细胞和正常骨髓基质细胞的比较性分析 被引量:2
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作者 王欢 周珺 +1 位作者 徐晶晶 国风 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期914-919,共6页
本研究旨在对慢性淋巴细胞性白血病原代骨髓基质细胞(CLL-human bone marrow stromal cells,CLL-hBMSC)和正常原代骨髓基质细胞(normal hBMSC,N-hBMSC)进行比较性分析,为建立CLL-CLL-hBMSC相互作用模型,从而更好地模拟CLL体内环境提供... 本研究旨在对慢性淋巴细胞性白血病原代骨髓基质细胞(CLL-human bone marrow stromal cells,CLL-hBMSC)和正常原代骨髓基质细胞(normal hBMSC,N-hBMSC)进行比较性分析,为建立CLL-CLL-hBMSC相互作用模型,从而更好地模拟CLL体内环境提供理论依据。从CLL患者和正常供者骨髓中分离单个核细胞,进行原代骨髓基质细胞(hBMSC)培养;采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测CLL-hBMSC和N-hBMSC表面粘附分子如血管细胞粘附分子1(vascular cell adhesion molecule 1,VCAM-1)和细胞间粘附分子1(intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1)的mRNA水平;采用real-time PCR和Western blot法分别检测两类不同来源的hBMSC中淋巴毒素β受体(lymphotoxin beta receptor,LTβR)的mRNA和蛋白质表达水平;采用Western blot法检测NF-κB家族成员的表达并分析细胞因子LTα1β2对NF-κB家族成员表达的影响;建立hBMSC和CLL细胞共培养体系,利用碘化丙啶(PI)染色检测细胞死亡情况。结果表明:从CLL患者骨髓中能成功地培养出贴壁的成纤维样hBMSC。与N-hBMSC相似,表面粘附分子VCAM-1和ICAM-1在两类hBMSC中的mRNA表达一致;两类hBMSC中LTβR的mRNA和蛋白表达水平相似;各NF-κB家族成员在两类hBMSC中都有表达,且蛋白水平无显著性差异;细胞因子LTα1β2可诱导hBMSC中经典性和非经典性NF-κB信号通路的活化;体外实验表明,两类hBMSC都能够有效地支持CLL细胞的体外存活。结论:两类hBMSC培养效率以及细胞形态上无明显差异。LTβR-NF-κB信号分子在两类hBMSC的表达以及活化情况相似。 展开更多
关键词 CLL 骨髓基质细胞 LTβR 存活保护
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RelB在蛋白酶体抑制剂诱导的maspin表达中的作用研究 被引量:1
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作者 国风 郭凌川 +3 位作者 沈雅颖 顾冬梅 朱卫东 康苏娅 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期1279-1284,共6页
目的:探讨前列腺癌细胞中,核转录因子NF-κB家族成员之一RelB在蛋白酶体抑制剂作用下maspin蛋白表达调控中的作用机制。方法:采用Western blotting法检测前列腺癌细胞中内源性及蛋白酶体抑制剂MG-132作用下RelA、RelB和maspin的蛋白表达... 目的:探讨前列腺癌细胞中,核转录因子NF-κB家族成员之一RelB在蛋白酶体抑制剂作用下maspin蛋白表达调控中的作用机制。方法:采用Western blotting法检测前列腺癌细胞中内源性及蛋白酶体抑制剂MG-132作用下RelA、RelB和maspin的蛋白表达;采用免疫组化法检测前列腺癌组织中RelB和maspin的表达情况;通过转染小分子RNA至前列腺癌细胞中沉默RelB的表达;采用Western blotting法检测RelB沉默对MG-132诱导的maspin蛋白表达情况的影响;PI染色法结合流式细胞术检测细胞死亡率。结果:雄激素非依赖型前列腺癌细胞DU145中RelB表达增强而maspin表达明显降低。在检测的10例前列腺癌组织样本中,恶性度高(Gleason评分4-5)的样本普遍同时存在胞核内RelB强染色和maspin表达缺失。MG-132作用DU145细胞24 h后RelB在胞浆和胞核中表达水平下调,伴随着maspin在胞核内的表达上调。MG-132处理RelB表达沉默的DU145细胞8和24 h后,maspin的表达无明显变化,而RelA蛋白的表达水平呈时间依赖性的下调。结论:在雄激素非依赖型前列腺癌细胞和晚期前列腺癌组织中,maspin与RelB的表达呈负相关性。蛋白酶体抑制剂诱导maspin的表达上调过程中,RelB是重要的调控因子。 展开更多
关键词 蛋白酶体抑制剂 RELB MASPIN 前列腺肿瘤
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非传统性NF-κB信号转导通路与血液系统疾患 被引量:1
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作者 王文娟 孙爱宁 国风 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2010年第4期1069-1073,共5页
核因子κB(NF-κB)包括RelA,RelB,c-Rel,NF-κB1和NF-κB2,在免疫反应、炎症反应、肿瘤形成、外周淋巴器官发育和淋巴细胞发育等多种生物学过程中起重要作用。NF-κB活化通路有两条:传统途径(经典途径)和非传统途径(选择性途径)。以往... 核因子κB(NF-κB)包括RelA,RelB,c-Rel,NF-κB1和NF-κB2,在免疫反应、炎症反应、肿瘤形成、外周淋巴器官发育和淋巴细胞发育等多种生物学过程中起重要作用。NF-κB活化通路有两条:传统途径(经典途径)和非传统途径(选择性途径)。以往对于恶性血液系统疾患的研究都集中在传统性NF-κB活性(p50-RelA为主)上,近年来非传统性NF-κB信号转导通路在肿瘤尤其是B细胞源性恶性肿瘤中的作用也逐渐引起重视。了解非传统性NF-κB信号转导通路的生物学功能及其与血液系统疾患的关系,为血液病的治疗寻求一种新的途径。本文就非传统性NF-κB信号转导通路及其与恶性血液系统肿瘤的关系进行了综述。 展开更多
关键词 NF—κB 非传统性 p52-RelB B细胞 恶性肿瘤
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Maspin在非小细胞肺癌A549细胞生物学行为中的作用
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作者 周珺 周鹏 +1 位作者 秦华龙 国风 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1537-1544,共8页
目的:探讨乳腺丝氨酸蛋白酶抑制物(maspin)对于非小细胞肺癌细胞生物学有何影响及其作用机制。方法:PCR扩增人类maspin编码区全长,并构建maspin过表达载体,转染A549细胞。药物筛选出稳定高表达maspin蛋白的细胞株,并通过real-time PCR和... 目的:探讨乳腺丝氨酸蛋白酶抑制物(maspin)对于非小细胞肺癌细胞生物学有何影响及其作用机制。方法:PCR扩增人类maspin编码区全长,并构建maspin过表达载体,转染A549细胞。药物筛选出稳定高表达maspin蛋白的细胞株,并通过real-time PCR和Western blot鉴定。通过x Celligence系统实时动态观测转染后A549细胞的生长、迁移和侵袭情况。利用Western blot和real-time PCR的方法对此细胞生物学变化的相关基因进行分析,探讨相应的作用机制。结果:成功构建过表达Maspin的载体MSCV-maspin,并获得稳定高表达maspin的A549细胞株(A549-maspin)。A549-control细胞和A549-maspin细胞生长曲线无差异,但是迁移和侵袭曲线有显著差异。在A549-maspin细胞中integrinβ1的表达水平低于A549-control细胞。结论:Maspin对于A549细胞的生长无影响,但是抑制了A549细胞的迁移和侵袭能力,并且此抑制作用与integrinβ1相关。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 乳腺丝氨酸蛋白酶抑制物 细胞迁移 细胞侵袭
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Maspin在前列腺癌PC-3细胞生物学行为中的作用 被引量:1
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作者 刘美琴 周珺 +1 位作者 马亮 国风 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期1202-1207,共6页
目的:探讨maspin影响前列腺癌细胞生物学行为的作用机制。方法:设计并合成靶向maspin基因的特异性shRNA,构建靶向maspin的shRNA慢病毒表达质粒并进行细胞转染。采用qRT-PCR和Western blot-ting法检测PC-3细胞转染重组质粒后maspin mRNA... 目的:探讨maspin影响前列腺癌细胞生物学行为的作用机制。方法:设计并合成靶向maspin基因的特异性shRNA,构建靶向maspin的shRNA慢病毒表达质粒并进行细胞转染。采用qRT-PCR和Western blot-ting法检测PC-3细胞转染重组质粒后maspin mRNA和蛋白质水平的变化以建立稳定转染maspin-shRNA的细胞系。采用qRT-PCR检测转染重组质粒对PC-3细胞中凋亡相关基因的影响。采用xCELLigence系统实时动态观察转染重组质粒前后细胞的生长并计算倍增时间,结合流式细胞术检测蛋白酶体抑制剂细胞毒性作用在细胞转染前后的变化。采用Western blotting法检测蛋白酶体抑制剂对核因子κB家族成员RelA和RelB表达的影响。结果:成功构建靶向maspin的shRNA慢病毒表达质粒pLL3.7-siMaspin。利用慢病毒表达系统转染并通过极限稀释法得到单克隆转染细胞PC-3-siMaspin。PC-3-siMaspin细胞的倍增时间为26.83 h,而PC-3-control细胞为37.95 h。PC-3-siMaspin细胞中bcl-2和A20 mRNA表达水平上调;而bax和bim的表达水平下调。蛋白酶体抑制剂MG-132作用PC-3-control和PC-3-siMaspin细胞8 h后细胞死亡率分别为27.1%±5.6%和7.5%±2.3%,24 h为24.2%±3.7%和8.2%±2.5%,36 h为28.7%±3.7%和7.6%±2.5%。PC-3-control细胞在MG-132作用下RelA的表达逐渐下调,而PC-3-siMaspin细胞中RelA的表达无明显变化。结论:在雄激素非依赖型前列腺癌细胞株PC-3中maspin呈高表达。Maspin表达沉默显著缩短了前列腺癌细胞的倍增时间,加快了细胞的生长与增殖。Maspin表达沉默显著下调了PC-3细胞对MG-132的敏感性,并与RelA降解的缺失相关。 展开更多
关键词 前列腺肿瘤 MASPIN蛋白 转录因子RelA 耐药性
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