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题名基因突变敏感性分子开关检测β地中海贫血基因突变
被引量：3
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作者
兰芬
郭紫芬
邓坤龙
廖端芳
李凯
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机构
南华大学药物药理研究所
湖南中医药大学药学院中医诊断学系
苏州大学第二附属医院分子医学中心
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出处
《实用医学杂志》
CAS
北大核心
2012年第2期178-180,共3页
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基金
国家高技术研究发展计划(编号:863计划2008AA02Z436)
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文摘
目的:采用高保真DNA聚合酶介导的基因突变敏感性分子开关准确、快速检测β地中海贫血。方法:首先提取正常人血液基因组DNA,根据已知β珠蛋白基因热点突变CD41-42、IVS2-654区域序列,分别设计突变序列扩增引物,利用低保真酶进行引物延伸反应,将其PCR产物克隆到pMD19-T载体,得到β地中海贫血常见的两个突变位点的基因突变克隆:CD41-42、IVS2-654,然后以这两个突变位点为检测靶点,分别设计3′末端与野生型基因位点或突变基因位点配对的引物,硫化磷酸修饰3′末端并偶联高保真DNA聚合酶构成的基因突变敏感性分子开关,对含有相应突变的阳性质粒模板及正常人基因组DNA模板进行引物延伸反应,并通过凝胶成像系统对其进行分析。结果:当引物与模板完全配对时,引物被延伸,有PCR产物;当引物与模板不完全配对时,引物不被延伸,无PCR产物。结论:高保真DNA聚合酶介导的基因突变敏感性分子开关能准确、快速筛查β地中海贫血CD41-42、IVS2-654突变,提示其在单基因遗传病的诊断中具有广阔的应用前景。
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关键词
Β地中海贫血
高保真聚合酶
硫化修饰引物
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Keywords
Beta-thalassemia
Exo ＋ polymerase
Phosphorothioate modification
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分类号
R556.9
[医药卫生—血液循环系统疾病]
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