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含pIRES2-EGFP-4-1BBL质粒减毒沙门氏菌株的构建与鉴定
被引量:
2
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作者
叶建新
仉元亭
+2 位作者
陈卫昌
张学光
任大明
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第4期336-339,345,共5页
目的:构建含pIRES2-EGFP-4-1BBL质粒的SL3261(减毒鼠伤寒沙门氏菌)疫苗菌。方法:将质粒pIRES2-EGFP-4-1BBL转入LB5000(鼠伤寒沙门氏菌)进行甲基化,利用修饰后重组质粒转化终宿主菌SL3261,抗生素筛选后挑取单个菌落扩增进行抽提质粒和PC...
目的:构建含pIRES2-EGFP-4-1BBL质粒的SL3261(减毒鼠伤寒沙门氏菌)疫苗菌。方法:将质粒pIRES2-EGFP-4-1BBL转入LB5000(鼠伤寒沙门氏菌)进行甲基化,利用修饰后重组质粒转化终宿主菌SL3261,抗生素筛选后挑取单个菌落扩增进行抽提质粒和PCR鉴定,SL3261疫苗菌与HepG2细胞体外共培养,荧光显微镜和RT-PCR分别检测GFP(绿荧光蛋白)的表达和4-1BBL基因的转录。结果:导入pIRES2-EGFP-4-1BBL质粒的SL3261经抽提质粒电泳后获得了同原转化质粒相同大小的目的条带,质粒PCR获得了约930bp的条带,200个HepG2细胞感染SL3261为201±46CFU、SL3261-pIRES2-EGFP为163±37,而SL3261-pIRES2-EGFP-4-1BBL为158±32,含质粒SL3261在体外感染HepG2细胞的能力同原细菌基本相同(P>0.05)。感染含质粒SL3261的HepG2细胞观察到GFP表达,感染含重组质粒SL3261的HepG2细胞经RT-PCR检测到约930bp的目的条带。结论:成功构建了能携带大鼠4-1BBL基因真核表达质粒的SL3261疫苗菌。
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关键词
4-1BBL基因
减毒沙门氏菌
DNA疫苗
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职称材料
题名
含pIRES2-EGFP-4-1BBL质粒减毒沙门氏菌株的构建与鉴定
被引量:
2
1
作者
叶建新
仉元亭
陈卫昌
张学光
任大明
机构
苏州大学第一医院消化科江苏省临床免疫重点实验室
苏州大学
生物技术研究所
复旦
大学
遗传学研究所遗传工程国家
重点
实验室
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第4期336-339,345,共5页
基金
江苏省临床免疫重点实验室基金
江苏省自然科学基金(BK20088171)
江苏省研究生科研创新基金(2008年)资助
文摘
目的:构建含pIRES2-EGFP-4-1BBL质粒的SL3261(减毒鼠伤寒沙门氏菌)疫苗菌。方法:将质粒pIRES2-EGFP-4-1BBL转入LB5000(鼠伤寒沙门氏菌)进行甲基化,利用修饰后重组质粒转化终宿主菌SL3261,抗生素筛选后挑取单个菌落扩增进行抽提质粒和PCR鉴定,SL3261疫苗菌与HepG2细胞体外共培养,荧光显微镜和RT-PCR分别检测GFP(绿荧光蛋白)的表达和4-1BBL基因的转录。结果:导入pIRES2-EGFP-4-1BBL质粒的SL3261经抽提质粒电泳后获得了同原转化质粒相同大小的目的条带,质粒PCR获得了约930bp的条带,200个HepG2细胞感染SL3261为201±46CFU、SL3261-pIRES2-EGFP为163±37,而SL3261-pIRES2-EGFP-4-1BBL为158±32,含质粒SL3261在体外感染HepG2细胞的能力同原细菌基本相同(P>0.05)。感染含质粒SL3261的HepG2细胞观察到GFP表达,感染含重组质粒SL3261的HepG2细胞经RT-PCR检测到约930bp的目的条带。结论:成功构建了能携带大鼠4-1BBL基因真核表达质粒的SL3261疫苗菌。
关键词
4-1BBL基因
减毒沙门氏菌
DNA疫苗
Keywords
4-1BBL gene
Attenuation Salmonella typhimurium
DNA vaccine
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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1
含pIRES2-EGFP-4-1BBL质粒减毒沙门氏菌株的构建与鉴定
叶建新
仉元亭
陈卫昌
张学光
任大明
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009
2
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