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两株新的鼠抗人OX40L单克隆抗体的研制及其生物学功能的初步研究 被引量：1
1
作者 吴鸿雅 王勤 +4 位作者 陈永井 谢芳 毛一香 刘高勤 张学光 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期757-760,共4页
目的:鼠抗人OX40L分子功能性单克隆抗体(mAb)的研制及其生物学特性的鉴定。方法:以高表达人OX40L分子的基因转染细胞L929/OX40L为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,经流式细胞术(FCM)分析和多次克隆化培... 目的:鼠抗人OX40L分子功能性单克隆抗体(mAb)的研制及其生物学特性的鉴定。方法:以高表达人OX40L分子的基因转染细胞L929/OX40L为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,经流式细胞术(FCM)分析和多次克隆化培养,筛选出特异分泌鼠抗人OX40L分子mAb的杂交瘤细胞株;采用Westernblot、Ig亚型快速定性试纸法、染色体核型分析、竞争结合抑制试验、间接免疫荧光法和MTT增殖试验等对单抗的生物学特性进行鉴定。结果:获得2株持续、稳定分泌鼠抗人OX40LmAb的杂交瘤细胞株,分别命名为4D6和5C2。对mAb生物学功能的研究结果表明,2株mAb均能识别成熟DC细胞以及Jurkat、SHI-1、U937等白血病细胞株表面的OX40L分子。对其中SHI-1白血病细胞株增殖影响的实验显示,这2株抗体对SHI-1的增殖都具有一定的抑制作用。结论:成功地获得了2株鼠抗人OX40L功能性mAb杂交瘤,其所分泌的抗体能特异地识别人OX40L分子,并影响表达OX40白血病细胞株的体外增殖,为进一步研究OX40/OX40L的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 OX40L 共刺激信号 杂交瘤 单克隆抗体 白血病
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人重组IL-17/His蛋白的原核表达、纯化及其生物学活性 被引量：8
2
作者 刘高勤 吴鸿雅 +4 位作者 张光波 马泓冰 马珍妮 居颂光 张学光 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期715-718,共4页
目的:研究人IL-17的体外生物学活性。方法:采用RT-PCR的方法克隆得到了hIL-17基因序列。将测序正确的人IL-17基因装入PQE3.0原核表达载体构建重组载体hIL-17/PQE3.0。该重组载体导入宿主菌M15,经异丙基β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导产生IL... 目的:研究人IL-17的体外生物学活性。方法:采用RT-PCR的方法克隆得到了hIL-17基因序列。将测序正确的人IL-17基因装入PQE3.0原核表达载体构建重组载体hIL-17/PQE3.0。该重组载体导入宿主菌M15,经异丙基β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导产生IL-17/His融合蛋白,并经West-ernblot实验确认。结果:原核表达的hIL-17/His重组蛋白经变性、复性后,利用HiTrapTM亲和层析得到纯品蛋白。体外活性实验表明,该融合蛋白具有刺激人宫颈癌细胞株HeLa分泌IL-6和GM-CSF的作用。结论:制备了具有生物学活性的IL-17/His重组蛋白,为进一步研究该分子在自身免疫疾病等方面的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 IL-17 原核表达 复性 纯化
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重组人CD40配体对卵巢癌SKOV3细胞生长特性的影响 被引量：2
3
作者 刘艳 施勤 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期2002-2006,共5页
目的:观察重组人CD40配体(rhCD40L)对卵巢癌细胞株SKOV3增殖、表面抗原变化、细胞周期、凋亡相关基因及肿瘤坏死因子受体相关因子(TRAFs)的影响。方法:在体外将SKOV3细胞与不同浓度的rhCD40L作用72 h后MTT法测定细胞增殖;直接免疫荧光... 目的:观察重组人CD40配体(rhCD40L)对卵巢癌细胞株SKOV3增殖、表面抗原变化、细胞周期、凋亡相关基因及肿瘤坏死因子受体相关因子(TRAFs)的影响。方法:在体外将SKOV3细胞与不同浓度的rhCD40L作用72 h后MTT法测定细胞增殖;直接免疫荧光标记流式细胞术测定细胞表面抗原及TRAFs变化,RT-PCR法测定凋亡相关基因c-myc、bcl-2、bcl-xl的表达程度,并用Annexin V和PI双标记测定细胞凋亡水平。结果:rhCD40L在100μg/L的低剂量时即可抑制SKOV3细胞增殖(0.65±0.10vs0.81±0.05),其作用随着rhCD40L浓度的增加而加强,10 mg/L时抑制率达(0.13±0.12vs0.83±0.15,P<0.01),呈明显的浓度相关性,并使细胞分裂阻滞于G1期;rhCD40L可上调SKOV3细胞CD95的表达(42.4%vs59.2%,P<0.05),下调抗凋亡基因bcl-2和bcl-xl的表达,促进其凋亡;SKOV3细胞高表达TRAF2(81.3%±9.2%)、TRAF5(47.2%±7.2%)和TRAF6(44.5%±6.3%),rhCD40L可显着下调TRAF2(50.4%±5.3%,P<0.05)、TRAF5(7.2%±2.1%,P<0.01)和TRAF6(5.1%±1.1%,P<0.01)表达,而上调TRAF3(25.2%±6.2%vs68.8%±5.3%,P<0.01)表达,对TRAF1(4.3%±1.2%vs5.1%±1.4%)和4(7.4%±1.2%vs8.1%±1.4%)的表达则无作用。结论:rhCD40L通过下调bcl-2和bcl-xl基因表达,并改变细胞内TRAFs表达,使SKOV3细胞的增殖受阻滞于G1期,并促进其凋亡。 展开更多
关键词 卵巢肿瘤 CD40配体 受体 肿瘤坏死因子 细胞增殖 细胞周期 SKOV3细胞
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