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聚合酶链反应检测日本血吸虫DNA的实验研究 被引量:22
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作者 陆正贤 许静 +5 位作者 龚唯 骆伟 张惠琴 荣荣 时长军 夏超明 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期479-483,共5页
目的探索核酸检测在日本血吸虫病诊断中的应用。方法根据日本血吸虫基因设计特异性引物,采用PCR方法对日本血吸虫的成虫、虫卵、日本血吸虫感染家兔的肝组织、粪便、外周血清标本中的DNA进行扩增,并将虫卵和粪便的模板DNA倍比稀释后进... 目的探索核酸检测在日本血吸虫病诊断中的应用。方法根据日本血吸虫基因设计特异性引物,采用PCR方法对日本血吸虫的成虫、虫卵、日本血吸虫感染家兔的肝组织、粪便、外周血清标本中的DNA进行扩增,并将虫卵和粪便的模板DNA倍比稀释后进行扩增,以测定PCR扩增法的敏感性。结果从日本血吸虫的成虫、虫卵、日本血吸虫感染家兔的肝组织、粪便和外周血清中均扩增到分子量为230bp的阳性条带,扩增产物经测序并在基因库中匹配,证实为日本血吸虫基因中的一个片段,其同源性为98%。其PCR扩增敏感性检测结果表明,0.021个虫卵DNA模板即可扩增出该特异性阳性条带。结论聚合酶链反应检测日本血吸虫DNA有较高的敏感性,尤其是能从日本血吸虫感染宿主血清中检测出特异性DNA,具有潜在的诊断应用价值。 展开更多
关键词 日本血吸虫 聚合酶链反应 DNA
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弓形虫GRA6抗原基因的克隆与表达 被引量:5
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作者 朱翔 丁天 +2 位作者 陆惠民 张惠琴 黄伟达 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第2期50-54,共5页
目的 在大肠杆菌中高效表达弓形虫抗原GRA6。方法 采用聚合酶链反应 (PCR)从弓形虫昆山分离株和RH株总DNA中分别扩增到编码GRA6的基因 ,经DNA序列分析后导入表达载体PGEX - 5X - 3 ,然后在大肠杆菌BL2 1 -CodonPlus(DE3) -RP中进行表... 目的 在大肠杆菌中高效表达弓形虫抗原GRA6。方法 采用聚合酶链反应 (PCR)从弓形虫昆山分离株和RH株总DNA中分别扩增到编码GRA6的基因 ,经DNA序列分析后导入表达载体PGEX - 5X - 3 ,然后在大肠杆菌BL2 1 -CodonPlus(DE3) -RP中进行表达 ,以SDS -PAGE和Westenblotting进行鉴定 ,用GST亲和层析柱纯化表达产物。 结果  1 在我们所比较的 336个碱基中 ,弓形虫昆山分离株与RH株之间碱基基本一致。 2 得到一分子量为 49kDa的融合蛋白 ,占大肠杆菌总蛋白的 2 5 55 % ,通过Westenblotting证实 ,该重组抗原能被弓形虫感染的人特异性IgM和IgG血清所识别。 结论  1 弓形虫昆山分离株和RH株的GRA6基因片段几乎完全一致 ;2 在大肠杆菌中得到了高效表达的融合蛋白 ;3 该重组抗原能被弓形虫感染的人特异性IgM和IgG血清所别 。 展开更多
关键词 弓形虫 GRA6抗原基因 克隆 表达 聚合酶链反应
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复式PCR用于闽南疟疾监测的效果评价 被引量:9
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作者 张山鹰 陆惠民 +4 位作者 许龙善 李莉莎 李清山 刘德发 刘庆生 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2001年第2期72-74,共3页
目的 评价复式PCR在闽南疟疾监测中的应用效果。方法 采集流行区发热病人及疫点居民血样用复式PCR一次扩增同时检测恶性疟原虫 (P f)和间日疟原虫 (P .v)。结果  2 49例发热病人PCR测阳性率为 8 0 2 % ,敏感性为10 0 % ,特异性 99 5 ... 目的 评价复式PCR在闽南疟疾监测中的应用效果。方法 采集流行区发热病人及疫点居民血样用复式PCR一次扩增同时检测恶性疟原虫 (P f)和间日疟原虫 (P .v)。结果  2 49例发热病人PCR测阳性率为 8 0 2 % ,敏感性为10 0 % ,特异性 99 5 6 %符合率 99 5 9% ,镜检阳性率为 7 6 3% ,抽查疫点居民 70 1人检测疟原虫 ,未发现阳性样本 ,复式PCR检测大批样本平均费用不高于传统镜检方法。结论 该复式PCR检测系统用于闽南现场疟疾监测具有敏感、特异、快速等特点 ,可用于分子流行病学调查。 展开更多
关键词 复式PCR 疟疾 监测 评价 闽南地区
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弓形虫病核酸疫苗研究进展 被引量:11
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作者 李文姝 陆惠民 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第5期435-437,440,共4页
关键词 弓形虫病 核酸疫苗 研究进展 候选基因
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汉滩病毒核酸疫苗滴鼻免疫小鼠效果的实验 被引量:2
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作者 石永兵 诸葛洪祥 +3 位作者 金东华 许菊 钱峰 张学光 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第4期315-317,共3页
目的 观察汉滩病毒DNA疫苗滴鼻免疫诱导机体产生的免疫应答 ,探索汉滩病毒DNA疫苗新的免疫途径。方法 用重组质粒PcDNA3 1B -S1 3 经滴鼻接种BALB/c小鼠 ,采用ELISA、淋巴细胞转化试验及流式细胞仪等方法检测了其诱导的系统和粘膜免... 目的 观察汉滩病毒DNA疫苗滴鼻免疫诱导机体产生的免疫应答 ,探索汉滩病毒DNA疫苗新的免疫途径。方法 用重组质粒PcDNA3 1B -S1 3 经滴鼻接种BALB/c小鼠 ,采用ELISA、淋巴细胞转化试验及流式细胞仪等方法检测了其诱导的系统和粘膜免疫反应。结果 免疫小鼠血清IgG及粪便IgA明显增高 (P <0 0 1) ,且IgA增幅较大 ;实验组淋巴细胞增殖反应明显 ,刺激指数 (SI)显著增大 (P <0 0 5 ) ;免疫后CD+ 4 、CD+ 8T细胞均增加 (P <0 0 1) ,而CD+ 4 /CD+ 8T细胞比值无显著变化 (P >0 0 5 )。结论 汉滩病毒重组质粒滴鼻免疫能诱导机体产生了特异的系统免疫和较强的粘膜免疫 ,滴鼻的疫苗免疫途径有着潜在的应用价值。 展开更多
关键词 汉滩病毒 核酸疫苗 滴鼻 免疫小鼠 实验
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我国不同疟区间日疟原虫裂殖子表面蛋白1(PvMSP-1)基因多态性研究 被引量:15
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作者 张山鹰 陆惠民 +3 位作者 许龙善 高琪 沈毓祖 黄伟达 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第1期26-30,共5页
目的 了解我国不同疟疾流行区间日疟原虫裂殖子表面蛋白 - 1基因多态性及其分布。方法 用套式PCR扩增间日疟原虫现场分离株MSP - 1第五多态区 (ICB5 -ICB6 )基因片段 ,部分样本进行序列测定、分析和比对。结果  82份间日疟原虫现场... 目的 了解我国不同疟疾流行区间日疟原虫裂殖子表面蛋白 - 1基因多态性及其分布。方法 用套式PCR扩增间日疟原虫现场分离株MSP - 1第五多态区 (ICB5 -ICB6 )基因片段 ,部分样本进行序列测定、分析和比对。结果  82份间日疟原虫现场分离株扩增出 4 70bp片段 5 0份 ,4 0 0bp片段 39份 ,其中 7份为两种片段的混合型。海南分离株混合型为 2 0 %(6 / 30 ) ,平均克隆数为 1 2 0 (36 / 30 ) ,安徽分离株混合型仅为 2 3% ,平均克隆数 1 0 2。对 33份样本进行序列测定 ,Sal- 1型17份 ,Belem型 2份 ,12份重组型 (Ⅲ型 )和朝鲜型 2份为我国新发现基因型。结论 我国间日疟原虫PvMSP - 1存在 4种不同的等位基因型 ,以Sal- 1型和重组型 (Ⅲ型 )占优势 ,南部疟区基因型比北部复杂。 展开更多
关键词 间日疟原虫 裂殖子表面蛋白1 基因多态性 序列分析
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