紫外线致弱日本血吸虫尾蚴诱导BALB/c小鼠免疫保护作用研究 被引量：4

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作者 周霞 诸葛洪祥 +4 位作者 龚唯 骆伟 魏莉 杜海林 陈明中 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期446-448,482,共4页

目的观察紫外线(UV)致弱日本血吸虫尾蚴免疫BALB/c小鼠免疫保护作用。方法辐照致弱日本血吸虫尾蚴,经腹部皮肤用UV致弱日本血吸虫尾蚴免疫诱导BALB/c小鼠,3周后进行攻击感染,同时设正常感染对照组。攻击感染6周后解剖小鼠,计算减虫率、... 目的观察紫外线(UV)致弱日本血吸虫尾蚴免疫BALB/c小鼠免疫保护作用。方法辐照致弱日本血吸虫尾蚴,经腹部皮肤用UV致弱日本血吸虫尾蚴免疫诱导BALB/c小鼠,3周后进行攻击感染,同时设正常感染对照组。攻击感染6周后解剖小鼠,计算减虫率、减卵率,并观察虫体发育情况和肝组织细胞免疫应答情况。结果免疫组的减虫率和减卵率分别为37.90%和51.16%;免疫组小鼠体内虫体发育明显滞后于正常感染对照组内虫体;免疫组小鼠肝脏虫卵肉芽肿较正常组明显减少。结论UV致弱日本血吸虫尾蚴免疫BALB/c小鼠能诱导较好的免疫保护力。 展开更多

关键词 日本血吸虫 BALB/C小鼠 紫外线致弱尾蚴 免疫病理反应

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日本血吸虫感染小鼠CD_4^+ T淋巴细胞协同刺激分子表达谱及其在介导Th1/Th2极化中的作用 被引量：5

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作者 李颖 张惠琴 +4 位作者 龚唯 骆伟 杨巧林 刘爱平 夏超明 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期799-804,共6页

目的观察日本血吸虫感染小鼠不同病期体内及体外培养后脾CD4+T淋巴细胞表面的协同刺激分子表达谱,探讨协同刺激分子介导Th1/Th2极化的作用。方法收集血吸虫感染后4w、7w、12w、16w和20w小鼠及正常小鼠脾CD4+T淋巴细胞,以及上述不同病期... 目的观察日本血吸虫感染小鼠不同病期体内及体外培养后脾CD4+T淋巴细胞表面的协同刺激分子表达谱,探讨协同刺激分子介导Th1/Th2极化的作用。方法收集血吸虫感染后4w、7w、12w、16w和20w小鼠及正常小鼠脾CD4+T淋巴细胞,以及上述不同病期经SEA诱导72h后脾淋巴细胞培养上清,用流式细胞术检测细胞表面协同刺激分子CD80、CD86、ICOS、CD40、OX40、4-1BB及PD1表达水平,用ELISA法检测培养上清中的Th1细胞因子IFN-γ,Th2细胞因子IL-4、IL-5、IL-10、IL-13。结果血吸虫感染后小鼠脾CD4+T淋巴细胞表面CD86、ICOS、CD40和OX40的表达均随感染时间延长而上调,其中ICOS和CD86表达上调最为显著;经SEA诱导培养72h后CD86、ICOS亦显著上调表达;培养上清检测发现IFN-γ在4w时呈高表达,7w开始随感染时间延长呈下调表达;IL-4、IL-5、IL-10和IL-13的表达水平则从7w开始明显升高,IL-5的峰值出现在12w,其余均16w达高峰,致20w仍维持在较高水平。结论日本血吸虫感染小鼠CD4+T淋巴细胞协同刺激分子表达水平与Th1/Th2免疫偏移密切相关,其中ICOS、CD86在介导Th2极化中可能具有重要作用。 展开更多

关键词 日本血吸虫 TH1/TH2极化 协同刺激分子

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细胞松弛素D与钙通道阻滞剂拮抗吡喹酮作用对血吸虫超微结构的影响 被引量：4

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作者 蔡茹 杨巧林 +1 位作者 张惠琴 夏超明 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期315-319,共5页

目的通过观察细胞松弛素D(cytochalasin D,CyD)与钙通道阻滞剂(calcium channel blockers,CCBs)拮抗吡喹酮(praziquantel,PZQ)体外杀日本血吸虫效应的虫体体表超微结构变化,探讨PZQ对血吸虫的药物靶点及作用机制。方法在日本血吸虫(Schi... 目的通过观察细胞松弛素D(cytochalasin D,CyD)与钙通道阻滞剂(calcium channel blockers,CCBs)拮抗吡喹酮(praziquantel,PZQ)体外杀日本血吸虫效应的虫体体表超微结构变化,探讨PZQ对血吸虫的药物靶点及作用机制。方法在日本血吸虫(Schistosoma japonicum,Sj)单性尾蚴感染昆明小鼠6w后,采用门静脉灌注法收集雄性成虫,体外培养。将虫体分别与CyD及CCBs预孵育1h,然后在培养液内加入临界致死剂量的PZQ(14μmol/L)孵育过夜(16h)。次晨,洗涤、更换培养液,继续培养48h收集虫体作扫描电镜观察。结果超微结构显示,经CyD拮抗PZQ复活后虫体皮层无损害,抱雌沟内壁轻微改变。CCBs组尼群地平和尼非地平拮抗PZQ复活虫体,皮层及抱雌沟内壁仅有轻度损伤。结论CyD与CCBs组尼群地平和尼非地平均可拮抗PZQ对日本血吸虫体表超微结构的损伤效应,提示PZQ对虫体体表的损伤并非药物直接作用所致,而是PZQ作用于血吸虫钙通道诱导虫体痉挛性麻痹后的继发效应,实验结果进一步证明了PZQ抗血吸虫的药物靶点可能与血吸虫的钙通道有关。 展开更多

关键词 日本血吸虫 吡喹酮 细胞松弛素D 钙通道阻滞剂 超微结构

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紫外线致弱日本血吸虫尾蚴感染小鼠引起的肺组织细胞反应及虫体扫描电镜观察 被引量：3

4

作者 周霞 诸葛洪祥 +5 位作者 龚唯 骆伟 魏莉 杜海林 陈明中 张惠琴 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期265-268,共4页

目的通过观察日本血吸虫（Schistosoma japonicura，Sj）紫外线辐照致弱尾蚴感染小鼠后肺组织的细胞反应以及肺期虫体的受损情况，探寻致弱尾蚴在小鼠体内诱导免疫效应机制和Sj受损情况。方法以紫外线致弱Sj尾蚴经腹部皮肤感染小鼠4d、7... 目的通过观察日本血吸虫（Schistosoma japonicura，Sj）紫外线辐照致弱尾蚴感染小鼠后肺组织的细胞反应以及肺期虫体的受损情况，探寻致弱尾蚴在小鼠体内诱导免疫效应机制和Sj受损情况。方法以紫外线致弱Sj尾蚴经腹部皮肤感染小鼠4d、7d、14d和45d后剖杀，分别取肺组织，固定、切片，光镜下观察虫体周围的组织细胞反应，并与同时期的感染小鼠组织切片进行比较，同时，对小鼠体内肺期Sj童虫进行扫描电镜观察。结果感染后4-7d，小鼠肺期童虫虫体周围出现较明显的出血灶和炎症反应，并有一定量的嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、巨噬细胞等炎症细胞的浸润，同时期的正常感染小鼠组织内虫体周围炎症反应却不明显；虫体体壁可见不同程度的损伤，电镜观察显示小鼠体内的肺期童虫存在明显的畸形和发育延迟。结论紫外线辐照致弱尾蚴感染后Sj在小鼠体内不能正常发育成熟，和正常尾蚴相比，致弱尾蚴在肺期滞留时间较长，仅有极少数虫体可移行至肠系膜或肝脏，但宜不能发育成熟，引起的病理损害主要表现为在肺期弥漫性出血灶、炎症细胞浸润等反应，这些特征可能与血吸虫致弱尾蚴感染免疫机制有关。 展开更多

关键词 日本血吸虫 致弱尾蚴 肺期童虫 扫描电镜

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吡喹酮压力下日本血吸虫耐药性的诱导和虫体差异表达蛋白的分析 被引量：3

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作者 董兰兰 许静 +5 位作者 赵波 梁松 王言言 关志勋 曹蕴 夏超明 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1171-1180,共10页

目的分析经吡喹酮(PZQ)半数有效量(ED50)诱导虫体与未诱导虫体之间的差异表达蛋白,为阐明PZQ的作用机制,探索候选疫苗靶抗原及药物治疗靶点,提供实验依据。方法应用PZQ ED50(25.98mg/kg),对单性感染4周后ICR鼠连续灌胃给药30d,停药21d后... 目的分析经吡喹酮(PZQ)半数有效量(ED50)诱导虫体与未诱导虫体之间的差异表达蛋白,为阐明PZQ的作用机制,探索候选疫苗靶抗原及药物治疗靶点,提供实验依据。方法应用PZQ ED50(25.98mg/kg),对单性感染4周后ICR鼠连续灌胃给药30d,停药21d后,再给予治疗剂量(200mg/kg)连续灌胃5d,肝门静脉灌注法收集成虫体外培养,观察虫体对PZQ的敏感性。收集诱导虫体和未诱导虫体,利用2D-DIGE分离差异蛋白,并予MALDI-TOF-MS鉴定,进而在线Uniprot软件检索差异蛋白功能。结果诱导成虫在8倍未诱导成虫临界致死浓度(112μmol/L)PZQ作用下,仍有75.6%存活率,与未诱导成虫临界致死浓度组相比差异有统计学意义(P<0.05)。诱导虫体和未诱导虫体共确认有30个差异表达蛋白,其中12个蛋白表达上调,18个蛋白表达下调,主要是细胞骨架相关蛋白、细胞中参与糖代谢和能量代谢的酶类、氧化还原酶类以及应激蛋白和参与解毒代谢的蛋白酶等。结论诱导虫体对PZQ敏感性下降显著,显示出明显的耐受性。诱导后,蛋白表达上调或下调提示PZQ诱导促进或抑制了某些特定基因的表达。为深入阐明PZQ作用机制,探索新的疫苗候选抗原及药物治疗的靶点,提供科学依据,同时为研发抗血吸虫新药开拓新途径和新思路。 展开更多

关键词 日本血吸虫 吡喹酮 ED50 耐药性 蛋白质组学 差异表达

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Real-time PCR法用于日本血吸虫感染宿主血清DNA的定量检测及其感染度的评价 被引量：4

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作者 官威 许静 +3 位作者 孙缓 梁松 董兰兰 夏超明 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期263-267,277,共6页

目的以日本血吸虫高度重复序列-逆转录转座子SjR2为靶序列,建立TaqMan实时定量PCR法检测宿主血清中的日本血吸虫DNA用于评价感染度。方法以real-time PCR法检测不同感染度的家兔模型血清DNA。结果该法具有高度的敏感性和特异性,可以检测... 目的以日本血吸虫高度重复序列-逆转录转座子SjR2为靶序列,建立TaqMan实时定量PCR法检测宿主血清中的日本血吸虫DNA用于评价感染度。方法以real-time PCR法检测不同感染度的家兔模型血清DNA。结果该法具有高度的敏感性和特异性,可以检测到44.7拷贝的重组质粒DNA。在感染家兔后的3d到7周血清中均能检测到血吸虫DNA,不同感染度早期检测的时间节点及其检测阈值分别为,家兔感染30条尾蚴(EPG=14)需在感染后2周才能检测到目的DNA,其含量为119.03拷贝,感染50条尾蚴(EPG=24)、感染100条尾蚴(EPG=48)则在感染后1周可检测到目的DNA,其含量分别为54.36拷贝和72.24拷贝,在家兔感染200条尾蚴(EPG=97)、感染500条尾蚴(EPG=232)最早在感染后3d即可检测到目的 DNA,其含量分别为60.34拷贝和142.47拷贝。日本血吸虫感染宿主血清DNA水平与感染度呈正相关,即血清DNA浓度随感染度的增大而上升。结论本研究所建立的real-time PCR法可定量检测血清DNA动态变化并对日本血吸虫病诊断及感染度的评价具有潜在的应用价值,为日本血吸虫病诊断与疗效考核提供了新方法。 展开更多

关键词 日本血吸虫 TaqMan实时定量PCR 血清DNA 感染度 检测阈值

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荧光实时定量PCR定量水体中日本血吸虫尾蚴方法的建立 被引量：3

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作者 王本敬 王文波 +5 位作者 周霞 陈艳勤 张静 刘晨晨 梁幼生 诸葛洪祥 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1075-1081,共7页

目的建立快速、高效、特异的定量水体中尾蚴的数量和检测水体中日本血吸虫尾蚴残余基因组DNA的方法,来评估水体受日本血吸虫尾蚴污染的程度。方法根据日本血吸虫基因组DNA中的3个多拷贝序列Sjrh1.0(序列号:U92488.1)、18S小亚基单位核... 目的建立快速、高效、特异的定量水体中尾蚴的数量和检测水体中日本血吸虫尾蚴残余基因组DNA的方法,来评估水体受日本血吸虫尾蚴污染的程度。方法根据日本血吸虫基因组DNA中的3个多拷贝序列Sjrh1.0(序列号:U92488.1)、18S小亚基单位核糖体核酸基因(18SrRNA)序列(序列号:AY157226.1)和逆转录转座子SjR2的G55A序列(G55A)(序列号:AF412221.1),设计常规PCR引物和实时定量PCR引物,选取较好的靶序列建立SYBR GreenI实时定量PCR方法,绘制尾蚴数的对数与Ct值的标准曲线,并对疫水中日本血吸虫尾蚴残余的基因组DNA进行检测。结果尾蚴数的对数与Ct值的标准曲线有良好的线性关系,相关系数r2为0.918 6,重复性良好。结论本方法特异性高,灵敏,可定量水体中尾蚴数,对疫水检测有一定的预警作用。 展开更多

关键词 日本血吸虫 尾蚴 荧光实时定量PCR 预警

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5种方法提取弓形虫速殖子DNA的效果比较 被引量：2

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作者 沈海英 王廷安 +3 位作者 周永华 李冬娜 申云侠 诸葛洪祥 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期333-336,共4页

目的用5种方法提取弓形虫速殖子基因组DNA,比较其效果。方法分别以试剂盒法、直接裂解法、煮沸法、酚-氯仿法和盐析法提取10倍系列稀释的弓形虫速殖子DNA,通过分光光度计、琼脂糖凝胶电泳和PCR比较其效果。结果酚-氯仿法提取的DNA纯度最... 目的用5种方法提取弓形虫速殖子基因组DNA,比较其效果。方法分别以试剂盒法、直接裂解法、煮沸法、酚-氯仿法和盐析法提取10倍系列稀释的弓形虫速殖子DNA,通过分光光度计、琼脂糖凝胶电泳和PCR比较其效果。结果酚-氯仿法提取的DNA纯度最高,煮沸法、盐析法、直接裂解法和试剂盒法依次降低;琼脂糖凝胶电泳可检测出由直接裂解法、酚-氯仿法、盐析法提取1×106个速殖子的基因组DNA;试剂盒法、直接裂解法、煮沸法、酚-氯仿法、盐析法提取的DNA经PCR扩增可检测最少速殖子的数量依次为1×104,无目的条带,1×102,1×101,1×103个。结论酚-氯仿提取的DNA纯度高,用于PCR扩增具有较高的敏感性,但操作相对繁琐;煮沸法操作简单,与除酚-氯仿法外其他3种方法相比具有较高的敏感性。其它3种方法提取的DNA纯度不高,用于PCR扩增的效果不如前面2种。 展开更多

关键词 弓形虫速殖子 DNA提取 PCR 电泳

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检测水体日本血吸虫毛蚴PCR方法的建立

9

作者 王廷安 沈海英 +4 位作者 申云侠 王文波 王本敬 梁幼生 诸葛洪祥 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期562-564,共3页

目的建立一种灵敏、特异的痕量检测日本血吸虫毛蚴的PCR方法。方法取感染6～8w日本血吸虫的小鼠肝脏,碾磨后沉淀,孵化并利用间接连续离心法富集毛蚴,采用蛋白酶K-苯酚法提取毛蚴基因组DNA。登陆GenBank查询获得日本血吸虫保守序列18S小... 目的建立一种灵敏、特异的痕量检测日本血吸虫毛蚴的PCR方法。方法取感染6～8w日本血吸虫的小鼠肝脏,碾磨后沉淀,孵化并利用间接连续离心法富集毛蚴,采用蛋白酶K-苯酚法提取毛蚴基因组DNA。登陆GenBank查询获得日本血吸虫保守序列18S小亚基单位核糖体脱氧核酸(18SrDNA)基因,利用引物设计软件PrimerPremier5.0和Oligo6自主设计一对引物,建立检测日本血吸虫毛蚴的PCR方法。梯度稀释血吸虫毛蚴基因组DNA进行PCR方法的灵敏性试验,设置阴性对照,PCR产物通过电泳鉴定。结果 PCR扩增日本血吸虫毛蚴得到特异性DNA片段,片段长度为463bp,阴性对照组无扩增产物。PCR法可检测出日本血吸虫毛蚴DNA的最低浓度为62.5pg/μL。结论建立的检测日本血吸虫毛蚴PCR方法灵敏、特异,具有一定的预警作用。 展开更多

关键词 日本血吸虫 毛蚴 PCR 痕量检测 预警

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苯二氮杂卓类化合物的合成及抗血吸虫活性研究

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作者 孙伟振 仇思婕 +2 位作者 吴建忠 夏超明 乔春华 《化学研究与应用》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1008-1014,共7页

化合物B30属于苯二氮杂卓类化合物。体外实验表明,在50μM具有100%的杀灭血吸虫效果。本文利用药物化学生物电子等排等原理,设计、合成了4个B30衍生物6、10、13、16,并对其抗血吸虫活性进行初步体外评价。结果显示4个化合物均具有一定... 化合物B30属于苯二氮杂卓类化合物。体外实验表明,在50μM具有100%的杀灭血吸虫效果。本文利用药物化学生物电子等排等原理,设计、合成了4个B30衍生物6、10、13、16,并对其抗血吸虫活性进行初步体外评价。结果显示4个化合物均具有一定的杀虫能力。尤其化合物16有较好的抗血吸虫活性,在50μM浓度下血吸虫的存活率降低到40%。本研究为寻找新型抗血吸虫药物提供一定思路。 展开更多

关键词 苯二氮杂卓类化合物 抗血吸虫活性 合成

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gsdmd基因敲除巨噬细胞RAW264.7的构建:基于CRISPR/Cas9系统

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作者 周丽婷 叶颖 +2 位作者 原海波 吴超逸 吴淑燕 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期116-122,共7页

目的利用CRISPR/Cas9系统构建gsdmd基因敲除的巨噬细胞RAW264.7,为研究gasdermin D(GSDMD)在巨噬细胞中的生物学功能提供细胞模型。方法针对gsdmd基因靶向设计4条向导RNA(sgRNA),构建pGL3-sgRNA串联载体后PCR、测序鉴定,将Cas9质粒和pGL... 目的利用CRISPR/Cas9系统构建gsdmd基因敲除的巨噬细胞RAW264.7,为研究gasdermin D(GSDMD)在巨噬细胞中的生物学功能提供细胞模型。方法针对gsdmd基因靶向设计4条向导RNA(sgRNA),构建pGL3-sgRNA串联载体后PCR、测序鉴定,将Cas9质粒和pGL3-sgRNA串联载体分两步电转至巨噬细胞RAW264.7;qPCR检测cas9的表达;嘌呤霉素筛选出阳性单克隆后PCR、Western blot和测序鉴定。将鼠伤寒沙门菌与gsdmd-/-RAW264.7细胞共培养,AnnexinⅤ/PI染色及比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放水平分析细胞死亡情况。结果qPCR结果表明获得稳定表达cas9的RAW264.7-Cas9细胞(P<0.01);PCR及测序证明pGL3-sgRNA串联载体构建成功;PCR、测序及Western blot结果表明成功构建gsdmd-/-RAW 264.7细胞。AnnexinⅤ/PI染色及LDH释放水平发现敲除gsdmd可降低巨噬细胞死亡率(P<0.01)。结论本研究利用CRISPR/Cas9系统成功构建gsdmd-/-RAW264.7细胞,为后续深入研究GSDMD介导的巨噬细胞死亡及其机制奠定基础。 展开更多

关键词 CRISPR/Cas9 巨噬细胞 gasdermin D

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